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文档简介

斑点杂交（二）聚合酶链反应（PCR）扩增细胞因子mRNA，电泳鉴定94-97 加热，DNA变性，双螺旋解开形成单链模板55 退火使引物与单链DNA模板结合72 延伸在3端以dNTPs为原料在聚合酶催化下延伸，合成与模板互补的链。（变性-退火-延伸循环）实验原理实验步骤4. PCR扩增按以下组成调制反应液cDNA模板 5.0mL目的引物（25umol/L） 2.0mL脱氧核苷三磷酸 4.0mLPCR缓冲液（10） 5.0mLMgCl2（25mmol/L） 3.0mL双蒸水 补至49mL以逆转录阴性对照取代cDNA模板作为PCR阴性对照，将上述反应成份加于0.5ml EP管，混匀，短暂离心。扩增： 94 5min，热循环条件： 94 45s，56 30s， 72 30s，循环30次。最后72 延伸5min。 PCR产物于4保存待用。

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