任务 培养基的制备技术

1、任务 培养基的制备技术第1页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日一、认识化能自养菌氧化硫杆菌的培养基粉末状硫 10g KH2PO4 4g MgSO4 0.5g CaCl2 0.5g (NH4)2SO4 0.4g FeSO4 0.01g 水 1000mL（自来水即可） 提问：其中各组分作用是什么？空气中的CO2能源碳源是什么？氮源盐也可补加一部分碳酸钠。第2页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日培养一种大肠杆菌的培养基配方如下： 葡萄糖 0.5g K2HPO4 1g MgSO4 0.2g NaCl 5g NH4H2PO4 0.4g 水 1000mL大肠杆菌的营

2、养类型？ 化能异养型。培养基的基本要求？ 至少有一种有机物，实验室中通常是葡萄糖第3页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日培养基类型合成培养基半合成培养天然培养基基本培养基富集培养基鉴别培养基固体培养基液体培养基半固体培养基按成分不同划分按用途划分按物理形态划分二、培养基的分类第4页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日(一)按成分划分：天然培养基合成培养基半合成培养基第5页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日(一)按照培养基成分来源分：a. 天然培养基：利用化学成分还不清楚或不稳定的天然有机物制成的培养基。 第6页，共34页，2022年，5

3、月20日，14点5分，星期日 优点：原料来源充足、营养丰富、经济简便 缺点：成分和含量不确定，重复性差 用途：适用于实验室粗放性实验和大规模生产之用。 举例：麦芽汁培养基天然培养基第7页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日b. 合成培养基：用化学成分和量都确切知道的纯化学试剂制成的培养基。 优点：成分精确、稳定、重复性好 缺点：价格较贵，微生物生长缓慢用途：适用于做分类鉴定，生物测定、选种育种等要 求较高的研究工作。举例：高氏一号培养基，查氏培养基等 第8页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日(一)按照培养基成分来源分：c.半合成培养基：用天然有机物和化学药

4、品制成的培养基。 特点：能充分满足微生物的营养要求，适合于大多数微生物的培养。 举例：牛肉膏蛋白胨培养基第9页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日可溶性淀粉 20.0克KNO3 1.0克K2HPO4 0.5克MgSO47H2O 0.5 克NaCl 0.5克FeSO4 7H2O 溶液2滴（10%）蒸馏水 1000毫升牛肉膏 3.0 克蛋白胨 10.0 克食盐 5.0 克蒸馏水（自来水） 1000毫升合成培养基 天然培养基 第10页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日天然的固体培养基如马铃薯块、麸皮、米糠、胡萝 卜条、木屑等；凝固剂(1.52琼脂) ，可用于微生

5、物的分离、鉴定、计数、保藏等凝固剂(0.30.6琼脂)。常用于观察细菌运动特征，噬菌体效价鉴定等。 微生物能充分接触养料，有利于生长繁殖及代谢产物积累，常用于微生物大规模工业发酵生产。 固体培养基(solid medium)半固体培养基(semi-solid medium)液体培养基(liquid medium)（二）按照培养基的物理性状分第11页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日不被微生物液化、分解和利用；在微生物生长的温度范围内保持固体状态；凝固点温度对微生物生长无害；不因灭菌而被破坏；透明度好、黏着力强；配制方便，价格低廉。 理想的凝固剂应具备以下条件：琼脂：胶体多糖

6、，熔点96，凝固点40-50 第12页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日第13页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日基础培养基加富培养基选择培养基鉴别培养基生产用培养基(三)按照培养用途分：第14页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日b. 加富培养基：根据待分离微生物的特殊营养要求配制的营养物质。使目标微生物能在其中旺盛生长，逐步占优势，从而达到与杂菌分离的目的。 培养时要同时考虑营养成分和培养环境两个因素，才能达到预期的目的a. 基本培养基：能满足一般微生物生长繁殖所需要培养基。(三)按照培养用途：第15页，共34页，2022年，5月2

7、0日，14点5分，星期日根据微生物的特殊要求，从自然界分离出特定已知微生物种类；分离培养在特殊环境中才能生长的微生物，以纤维素或石蜡油为唯一碳源的富集培养基，可以从混杂的微生物群体中分离出能分解纤维素或石蜡油的微生物。富集培养第16页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日C.选择培养基 在培养基中加入抑制剂以杀死或抑制不需要的菌种，而目标微生物因对该抑制剂有抗性而正常生长繁殖的一类培养基。 (三)按照培养基的用途分：第17页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日抑制剂： 青霉素（抑制 G+ 细菌） 分离G- 细菌 抗生素 氯霉素，链霉素（抑制细 菌 分离酵母、霉

8、菌 染料 胆盐：抑制G+ 分离G- 孟加拉红：抑制 分离 用于选择性的物理因素有：温度，氧气，pH值，渗透压等第18页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日 目的：增殖少数 手段：“投其所好”混合样品 富集培养基 成为中劣势菌 选择培养基 优势菌 目的：抑制多数菌 手段：“取其所抗” 第19页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日d.鉴别培养基：利用微生物的代谢产物与指示剂的显色反应，快速鉴别不同微生物的营养基质。(三)按照培养基的用途：第20页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日鉴别培养基(differential medium)伊红-美蓝培

9、养基（EMB）：伊红和美蓝二种染料，可用于鉴别食品、水源、乳制品等待检样品中是否含有大肠杆菌。如果有大肠杆菌，则其代谢产物能与伊红与美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。第21页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日目的：为了获得数量充足和质量较好的健壮菌体，同 时兼顾菌种对发酵培养基的适应能力。 特点：营养成分丰富且完全，氮源和维生素含量高、 易被利用目的：获得最大强度的代谢产物。 特点：原料粗放、来源充足、价格低廉、碳源比例大，有时还在发酵培养基中添加前体、促进剂或抑制剂。（1）种子培养基 （2）发酵培养基 (四)按照培养基的使用目的分：第22页，共34页，2022年，

10、5月20日，14点5分，星期日三、培养基应具备的条件具有合适的营养物质，满足微生物对六大营养物质的需求；应始终保持在微生物发育的pH值范围内；任何培养基一旦配成，须立即灭菌后才能使用。第23页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日（一）目的明确（二）营养协调（三）营养适宜（四）条件适宜（五）经济节约四、配制培养基的原则第24页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日（一）目的明确培养何物？积累代谢产物？实验室或大规模发酵？培养菌体？第25页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日生理特点不同细菌放线菌霉菌营养要求不同（ ）培养基（ ）培养基（ ）培养

11、基（二）营养适宜自养微生物简单的无机物异养微生物至少提供一种有机物培养自生固氮微生物？培养乳酸菌？无氮培养基添加生长因子第26页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日（三）营养协调营养物质的浓度及配比合适 浓度过小 浓度过高水碳源氮源P 、SK、Mg生长因子第27页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日（三）营养协调一般培养基中C/N比为（100:0.52）但谷氨酸生产中较特殊： C/N 4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少；C/N3/1 时，菌体生长受抑制，而谷氨酸大量增加。第28页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日1. 渗透压等渗溶液高渗

12、溶液细胞发生（ ） 低渗溶液 细胞（ ）（四）条件适宜第29页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日 细 菌：7.08.0放线菌：7.58.5酵母菌：3.86.0霉 菌：4.05.82. pH pH 内源调节 缓冲液：K2HPO4/KH2PO4（pH 6.47.2）调节方式 固体碳酸盐：CaCO3 外源调节：流加酸或碱第30页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日加入CaCO3 “备用碱”：CO32 HCO3 H2CO3 CO2+H2O+H+H+H+H磷酸缓冲液：pH值从6.7.之间K2HPO4+HCl KH2PO4+KClKH2PO4+KOH K2HPO4+H2O2. pH第31页，共34页，2022年，5月20日，14点5分，星期日3.O2浓度的调节由微生物与氧气的关系形成了三类微生物： 专性好氧性微生物 专性厌氧性微生物 兼性厌氧的微生物实践对策： 专性好氧性微生物：空气提供氧气、工业上采用通气装置。 专性厌氧性微生物：采用理化方法除氧、向培养体系