04.PCT测定试剂盒(荧光免疫层析法)工艺规程

1、 编制人：日期：年月日审核人：日期：年月日批准人：日期：年月日生效日期：年月日颁发部门：质量部颁发份数：2份分发部门：生产部、质量部受控编号：降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）1。产品名称、剂型、注册分类、规格、定义、组成及用途中文名称：降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）规格：25人份/盒、40人份/盒剂型：诊断试剂注册分类：二类6840体外诊断试剂定义、组成及预期用途：本产品采用高度特异性的抗原抗体反应及免疫层析分析技术，通过夹心法检测原理来体外定量测定人血清、血浆样本中降钙素原（PCT）的含量。依据：降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）产品技术要求#合格合

2、格合丄格合格半成品检验化学试剂探针配制样品垫处理样品垫制作#划线（NC膜）NC膜干燥#贴膜组装不合格不合格品控制切条压卡装袋不合格不合格品控制贴签、组装:关键工序:质量控制点#:湿度W30%入库2.试剂卡制备生产工艺2。1工序一：样品垫制作2。2工序二：NC膜制备2.3工序三：样本稀释液制备2。4工序四：贴膜组装BSA及其他化学试剂BSA及其他化学试剂干燥环境#羊抗兔IgG抗体探针稀释液配制鼠抗PCT抗体兔IgG抗体微球偶联物鼠抗人PCT抗体微球偶联物1r包被液（C线配制1包被液（T4配制线BSA及其他化学试:剂1F样品垫处配卜理液制样本稀释液配制1分装洁标准曲线制作烧数据卡不合格品控制不合格

3、成品检验不合格品控制不2。5工序五：切条2.6工序六：压卡装袋2。7工序七：烧数据卡2.8工序八：降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）试剂盒组装2.1工序一:样品垫制作2。1。1探针稀释液2。1.1。1标准配方名称物料名称配制1000m1使用量75人份使用量探针稀释液三羟甲基氨基甲烷2。4228g0.12ml调节PH=8.40.2蔗糖150g牛血清白蛋白5g吐温-205mlProclin3000.3ml纯化水定容至1000ml2。1。1.2配制方法按照标准配方准确称取三羟甲基氨基甲烷2。4228g,放入洁净烧杯中，加纯化水800ml,放入1个洁净的磁力搅拌子，置磁力搅拌器上搅拌至充分

4、溶解后，使用多参数测试仪测量PH值应在8。40。2范围内，再依次加入蔗糖150g、牛血清白蛋白5g、吐温一205ml、Proclin3000。3ml,置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，将溶液缓缓倒入容积为1000ml的容量瓶中，用纯化水反复冲洗3次烧杯，所有溶液倒入上述容量瓶中，用纯化水定容至1000ml.混合均匀430C保存备用，有效期7天。2.1。2样品垫处理液2.1.2。1标准配方名称物料名称配制1000m1使用量75人份使用量样品垫处理液十二水合磷酸氢二钠5.73g40ml二水合磷酸二氢钠0。62g调节PH=7.40。2纯化水定容至1000ml2.1.2.2配制方法按照标准配方分别准确称

5、取十二水合磷酸氢二钠5。73g、二水合磷酸二氢钠0.62g,放入洁净烧杯中，加纯化水800ml，放入1个洁净的磁力搅拌子，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，使用多参数测试仪测量PH值应在7.40.2范围内，将充分溶解并调好pH的溶液缓缓倒入容积为1000ml的容量瓶中，用纯化水反复冲洗3次烧杯，所有溶液倒入上述容量瓶中，用纯化水定容至1000ml,混合均匀430C保存备用，有效期7天。2。1。3样品垫制作2.1.3.1样品垫处理(1)将玻璃纤维平铺到水平槽内，倒入足量样品垫处理液，应让玻璃纤维完全浸泡入样品垫处理液中；浸泡至少15分钟，保证玻璃纤维完全浸透，玻璃纤维表面无气泡；玻璃纤维浸透后，将

6、玻璃纤维取出，45度恒温干燥4一6小时；干燥完成后430C封存备用，有效期7天。2。1。3.2样品垫制作(1)处理后的样品垫裁切成29mm宽度；兔IgG抗体微球偶联物：鼠抗人NT抗体微球偶联物：探针稀释液=1:3:20的比例配制探针溶液；按4口l/cm喷量，将配制好的探针溶液均匀喷点到已裁切的样品垫上。在45度恒温干燥、湿度小于30%的环境下干燥4-6小时.注：干燥湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在30%以下。干燥完成后430C封存备用，有效期14个月。注：干燥后应避免长时间放置于430C环境。2.2工序二：NC膜制备2.2。1包被液2.2.1。1标准配方名称物料名称配制1000m

7、1使用量75人份使用量包被液磷酸氢二钾1.82g0。06ml二水合磷酸二氢钠0.22g氯化钠8.76g调节PH=7。20.2蔗糖30g纯化水定容至1000ml2。2.1。2配制方法按照标准配方分别准确称取磷酸氢二钾1.82g、二水合磷酸二氢钠0。22g、氯化钠8.76g，放入洁净烧杯中，加纯化水800ml，放入1个洁净的磁力搅拌子，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，使用多参数测试仪测量PH值应在7。20.2范围内，再加入蔗糖30g,置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，将充分溶解并调好pH的溶液缓缓倒入容积为1000ml的容量瓶中，用纯化水反复冲洗3次烧杯，所有溶液倒入上述容量瓶中，用纯化水定容至10

8、00ml，混合均匀430C保存备用，有效期7天。2。2.2C线包被液使用包被液将羊抗兔IgG抗体稀释成终浓度为1mg/ml.充分混合后保存备用。注：现用现配2。2.3T线包被液使用包被液将鼠抗人PCT抗体稀释成终浓度为1mg/ml。充分混合后保存备用。注：现用现配25mm251mm2Sfmm2.2.4NC膜划线（1）按左图所示，将PVC底板摆好；除去PVC底板中间25mm处的保护纸,沿上面保护纸的下边缘，将硝酸纤维素膜（NC膜）贴在该区;注：1.粘贴上下边缘与相邻区上下边缘齐平;2.粘贴时注意动作轻柔，避免用手直接按压硝酸纤维素膜（NC膜）表面。（2）贴吸水滤纸：按27mm的宽度将吸水滤纸切割

9、成条，除去PVC底板上端25mm处的保护纸，将切好的吸水滤纸贴在该区;注：吸水滤纸下边缘超出该区2mm覆盖硝酸纤维素膜（NC膜）；上边缘与底板边缘齐平。（3）使用划线包被机按照1口l/cm包被量将C线包被液及T线包被液包被至NC膜适当位置;C、T线区域间距应调节足够宽度以保证检测仪可以显著区分，习惯上C线距NC膜上边缘距离为10mm，CT线之间间距为6mm，T线与NC膜下边缘间距为9mm。注：1、贴膜和包被过程应注意避免膜的污染。2、划线时的湿度条件是NC膜制备的要点之一，湿度应控制在45%65%.3、制备前需将C线包被液、T线包被液与硝酸纤维素膜（NC膜）平衡至相同温度。2.2。5NC膜干燥

10、将包被的NC膜放置在相对湿度W30%（环境温度18C26C）条件下干燥.NC膜干燥时间至少6小时。干燥完成后封存备用，有效期14个月。注：1、干燥时，湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在W30%。干燥后应避免长时间放置于430C环境。2.3工序三：样本稀释液制备2.3.1标准配方名称物料名称配制1000m1使用量75人份使用量样本稀释液磷酸氢二钾1.82g22O5ml二水合磷酸二氢钠0。22g氯化钠8.76g调PH至7.40.2S910gProclin3000.3ml牛血清白蛋白5g2。3.2配制方法按照标准配方分别准确称取磷酸氢二钾1.82g、二水合磷酸二氢钠0.22g、氯化钠8。

11、76g，放入洁净烧杯中，加纯化水800ml,放入1个洁净的磁力搅拌子，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，使用多参数测试仪测量PH值应在7.40.2范围内，再依次加入S910g、Proclin3000.3ml、牛血清白蛋白5g，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，将溶液缓缓倒入容积为1000ml的容量瓶中，用纯化水反复冲洗3次烧杯，所有溶液倒入上述容量瓶中，用纯化水定容至1000ml,混合均匀后4-30C保存备用，有效期7天。2。3。3分装将上面配制好的样本稀释液按照3001/支的装量进行分装，4-30C条件下保存，有效期12个月.2.3.4标签打印、贴签2.3。5质控项目和标准项目标准外观样本稀释液

12、为无色透明液体，无悬浮物及沉淀物。净含量样本稀释液净含量应在标示值的90%110%之间。pH在7。40.2范围内。2。4工序四：贴膜组装(湿度W30%)贴样品垫：将样品垫贴在已包被好的NC膜底板28mm处;注：样品垫上边缘1mm覆盖NC膜；下边缘与底板边缘齐平。贴好后，应如下图所示；1、避免混淆是本工序的要点，确保指令、样品垫标示和包被好的NC膜三者之间的完全一致。未经清场，不得贴膜组装不同批号、规格、品种的产品。2、清场在本岗位必须得到强调。3、湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在湿度W30%.2.5工序五：切条(1)接通切条机电源，设定切条程序，设定切割宽度为4mm;(2)将大卡

13、平放入切条机平台轨道中，正面朝上，调节切条机上的螺丝，调节卡槽宽度与大卡宽度相同按操作面板上“连动”键，开始切条；将所有大卡头尾相接，慢慢放于切条机上，收集切好的条子，除去有标记(不合格)的条子。注：湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在W30%.2.6工序六：压卡装袋(1)装条：将切好的条子放置在底卡的卡槽内，面板加样孔位置对应样本垫；注：不得直接按压中间部位，如条子上出现划痕，按不合格品处理。(2)盖面板：将面板与底板对合，用力按压,使面板与底板吻合。压卡：按平板压壳机操作规程压卡注：压卡时应使卡竖向排列在传送带上，并严禁将卡重叠放置.装袋:将1份试剂卡、1袋干燥剂装入铝箔袋中，按

14、封口机操作规程封好铝箔袋.标签打印、贴签.4-30C条件下保存，有效期12个月。质控项目和标准。项目标准线性范围试剂的线性范围为(0。160)ng/mL,在此线性范围内，线性相关系数r应不小于0.990。准确度回收率在85%115%之间.注：1、避免混淆是本工序的要点。确保指令、包装物标示和待包装产品三者之间的完全一致。未经清场，不得包装不同批号、规格、品种的产品。2、清场在本岗位必须得到强调.3、湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在W30%。2。7工序七：烧数据卡2o7o1产品才校准品赋值用PCT工作校准品检测我公司的PCT试剂，使用10个浓度点工作校准品，每个浓度点重复检测3次，

15、分别求出测定结果的均值，以浓度点为自变量，以测定结果均值为因变量求出线性回归方程，做曲线.随机抽取的同一批号的不同浓度的PCT产品校准品各重复测定10次，分别计算每个浓度的平均值，即为该批PCT产品校准品的值。测量不确定度：U二Uc（y）*K，包含因子K=2,置信水平约95%。2o7o2产品校准品确认用PCT工作校准品和PCT产品校准品同时定标我公司相同批号的PCT试剂后，分别测定30例血清样本，并计算两组测定数值间的相关系数r及系统偏差，要求相关系数r应不低于0。975，且系统偏差应不超过15%若满足以上要求，则该批PCT产品校准品的值确定；若无法满足，则需重复赋值过程，以确定该批PCT产品

16、校准品的值。2.7.3产品校准品做曲线用产品校准品检测待检半成品试剂盒，每个浓度点分别在四台荧光仪上【信号测试】模块平行检测三次并点击【EXCEL】即保存成EXCEL格式，将所得每个浓度12个检测卡的T/C数值汇总到一个EXCEL中并计算每个浓度点的T/C平均值；然后将每个浓度点的浓度值和T/C平均值复制到四台荧光仪中的任一个荧光仪软件【测试实验】模块中，根据需要在【拟合算法】中选择拟合方式并点击【拟合】即生成曲线.2o7o4数据卡的生成在【生成ID文件】模块中点击左下方【生成ID文件】；然后在【HEX查看】中点击【写ID】，此曲线即烧制到数据卡（ID卡）中.2.7.5烧制工序用SnartPR

17、O智能通用编辑器烧数据卡，具体见相关SOP。2.7.6质控项目和标准项目标准线性范围试剂的线性范围为（0。160）ng/mL，在此线性范围内，线性相关系数r应不小于0。990o准确度回收率在85%115%之间。2.8工序八：降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）试剂盒组装2。8.1本试剂盒内容物由以下组分构成：组分25人份/盒40人份/盒试剂卡1人份/袋25袋/盒1人份/袋40袋/盒样本稀释液300口1/瓶25瓶/盒300口1/瓶40瓶/盒数据卡1张1张说明书1份1份注：1、避免混淆是本工序的要点。确保指令、包装物标示和待包装产品三者之间的完全一致。未经清场，不得包装不同批号、规格、品

18、种的产品。2、清场在本岗位必须得到强调。2.8。2质控项目和标准项目标准物理性状外观试剂卡外观平整，材料附着牢固；样本稀释液为无色透明液体，无悬浮物及沉淀物。净含量样本稀释液净含量应在标示值的90%110%之间.膜条宽度膜条宽度应不小于3.9mm。液体移行速度液体移行速度应不低于25mm/min。空白限W0。1ng/mL.线性范围试剂的线性范围为（0.1-60）ng/mL,在此线性范围内，线性相关系数r应不小于0。990。准确度回收率在85%115%之间。测量精密度重复性用质控品重复测试，所得结果的变异系数（CV）W15%.批间差用质控品重复测试3个批号的试剂盒，所得结果的变异系数（CV）W1

19、5%.稳定性试剂在4C30C密封避光保存，原包装存放的试剂有效期为12个月；取效期末的样品检测外观、膜条宽度、液体移行速度、空白限、线性范围、重复性、准确度,应分别符合其要求。质量控制点工序质量控制点质量控制项频次生产过程中间产品1、样品垫制作称量重量性状每批匕加样体积外观混合装量、时间、转速均匀度喷探针速度、喷量均匀度2、NC膜制备称量重量性状每批匕加样体积外观混合装量、时间、转速均匀度划线速度均匀度3、样本稀释液制备称量重量性状每批匕加样体积外观贴签品名、位置端正、牢固、无皱褶摆管数量与装配数目核外观分装对体积外观、体积准确度封盖紧密度、外漏紧密、无外漏物标签打印速度、位置位正、字迹清晰，

20、无错印、漏印贴签品名、位置端正、牢固、无皱褶4、贴膜组装贴膜位置端正、牢固每批匕5、切条切条速度、位置宽度每批匕6、压卡装袋压卡速度、位置过紧、过松每批匕封口速度、位置漏气标签打印速度、位置位正、字迹清晰，无错印、贴签品名、位置漏端正、牢固、无皱褶7、烧数据卡标准曲线制作精确、按照操作规程操作、需要复核准确写入数据、复核无误每批匕8、试剂盒组装装盒速度、组分组分齐全、无缺漏每批匕标签打印速度、位置位正、字迹清晰，无错印、漏印贴签品名、位置端正、牢固、无皱褶4。生产过程物料平衡的计算方法、数据处理4.1各工序分步收率本产品每个批次，每个关键工序生产结束都必须物料平衡，进行物料平衡是避免或及时发现

21、差错与混淆的有效措施.4.1。1NC膜物料平衡NC膜物料平衡二实际反应膜制备量/理论反应膜制备量X100%物料平衡限定范围95100%。注：理论反应膜制备量二液体配制量/30口1（板）4。1.2样品垫物料平衡样品垫物料平衡率二实际样品垫量/理论样品垫量X100%物料平衡限定范围95100%.注：理论样品垫量二液体配制量/120口I（板）4。1.3稀释液物料平衡稀释液物料平衡二实际分装瓶量/理论分装瓶量X100%物料平衡限定范围95100%.注：理论分装瓶量二稀释液总量/300口I4。1.4数据卡物料平衡数据卡物料平衡二实际烧数据卡量/理论烧数据卡量X100%物料平衡限定范围95-100%4.1

22、.5包材物料平衡包材物料平衡二实际包材用量/理论包材用量X100%物料平衡限定范围95-100%4.1.6成品物料平衡成品物料平衡二实际产量/理论产量X100%物料平衡限定范围95105%。4.2数据处理4.2.1凡收率在合格范围内的，方可“流转”投入下一工序。4.2。2凡收率高于或低于合格范围内，应立即贴“待验”标志，不能递交下工序，并由发现人填写偏差处理单，经质量管理部门按“生产过程偏差处理管理规程进行调查，采取处理措施，直至调查确认不影响产品最终质量的情况下，方可放行。包装要求、标签、说明书（附样本）与产品贮存方法及有效期5.1包装规格：25人份/盒、40人份/盒。5。1.1铝箔袋规格：1人份/袋.5.1。2试剂盒装量25T:检测卡25袋，说明书1张、样本稀释液25人份、数据卡1张。 04.PCT测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程40T:检测卡40袋，说明书1张、样本稀释液