高三生物一轮复习课件：分解纤维素的微生物的分离VIP

1、 专题2 微生物的培养与应用课题3 分解纤维素的微生物的分离基础知识 （一）纤维素与纤维素酶 纤维素是一种由 首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的 类物质。葡萄糖多糖阅读课本27页基础知识部分第一、二段，回答下列问题：1、纤维素在生物圈的分布状况？纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质。植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。 纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，植物每年产生的纤维素超过70亿吨，但却不会在地球上大量的积累，为什么？ 纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。思考 纤维素酶是一种 ，一般认为它至少

2、包括三种组分，即 、 、 。前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纤维素2、纤维素酶的组成及作用？复合酶C1酶(外切酶)CX酶(内切酶)葡萄糖苷酶3、纤维素的分解 能分解纤维素的微生物有各种细菌、真菌和少数放线菌。方法：滤纸崩溃法4、纤维素酶活性的测定实验：取二支20mL的试管纤维素酶分解纤维素的实验各加入一张滤纸条各加入pH4.8，物质量为0.1mol/L的醋酸醋酸钠缓冲液10ml甲 乙在甲、乙两支试管中分别加入1mL醋酸醋酸钠缓冲液和1mL纤维素酶。两支试管固定在锥形瓶中，放在140r/min的摇床上振荡1h结果：乙试管的滤纸

3、条消失 讨论：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？8在一支试管中添加纤维素酶，另一支试管不添加纤维素酶；思考1实验分析：P27的小实验是如何构成对照的？滤纸崩溃法（二）纤维素分解菌的筛选1、纤维素分解菌的筛选方法2、纤维素分解菌的筛选方法的原理阅读课本课本28页相关部分，回答下列问题：101、筛选纤维素分解菌的方法 。该方法可以通过_反应直接筛选。刚果红染色法颜色2、原理：刚果红可以与纤维素形成_，当纤维素被 分解后，红色复合物无法形成，出现以 为中心的_，可以通过 来筛选纤维素分解菌。红色复合物纤维素酶纤维素分解菌 透明圈是否产生透明圈（二）纤维素分解菌的筛选练一练：1、下列关于

4、纤维素酶的说法，错误的是A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种B. 纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖122、利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物 B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物D. 若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌13（三）实验设计土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别培养基挑选菌落什么样的环境取样? 培养的目的? 选择培养基的特点?挑选什么样的菌落?鉴别培养基的特点?如何鉴别?根据微生物对生存环境的

5、要求，到相应环境中去找 目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。刚果红染色法寻找纤维素分解菌的方法1、在富含纤维素的环境中如腐殖质中寻找。2、人工设置富含纤维素的环境。将富含纤维素的物质，如滤纸等埋在土壤中。经过30d左右，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解酶。土壤取样1、纤维素分解菌选择培养基属于_（固体、液体）培养基，原因是_阅读资料二“选择培养基”，回答以下几问题：液体没有添加琼脂2、该培养基对微生物_（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是_ _ 具有 以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖；选择培养16 若设置一个对照实验说明选择培

6、养的作用，应控制的变量是将_ _改为_。3、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？葡萄糖纤维素粉提示：自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照，或者将纤维素改为葡萄糖。4、操作方法：将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养12天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养。18 在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。5、为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基

7、进行等比稀释，稀释最大倍数到106梯度稀释1. 制备培养基:参照旁栏中的比例2. 涂布平板：将稀释度为104106的菌悬液各取0.1ml涂布在培养基上，30倒置培养将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C 370C培养，可获得纯培养。挑选产生透明圈的菌落刚果红染色法方法一：先 ，再加入刚果红，进行颜色反应。方法二：在 时就加入刚果红。培养微生物倒平板思考：这两种方法各有哪些优点与不足？这两种方法各有哪些优点与不足？染色法优点缺点方法一方法二颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作繁琐刚果红会使菌落

8、之间发生混杂操作简便,不存在菌落混杂问题1.产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈2.有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。P29旁栏思考题方法一中NaCl溶液的作用？思考： 漂洗作用，洗去与纤维素结合不牢的刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同？ 本实验流程与课题2的流程的区别如下。课题2是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为唯一氮源的选择性培养基上，直接分离得到菌落。本课题通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在选择培养基上。其他步骤基本一致。 1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落 （四）结果分析与评价对照的培养基在培养过程

9、中没有菌落生长则说明培养基制作合格。 如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。 为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行_ _实验，纤维素酶的发酵方法有_ _ 发酵和_ _ 发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的_ 含量进行定量测定。发酵产纤维素酶 液体 固体 葡萄糖 （五）课题延伸分解纤维素的微生物的分离纤维素酶种类、作用、催化刚果红染色筛选原理实验设计土壤取样选择培养涂布培养纯化培养前置染色法后置染色法富含纤维素土壤增大分解菌含量染色鉴别分离出分解菌课堂总结1.在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，符合下列哪一生物学观点( )A.生物结构与功能相适应的观点B.生物结构与功能整体性观点C.生物与环境相适应的观点D.生物发展进化的观点练一练：C2.从土壤中分离获得某种微生物的步骤是( )土壤取样梯度稀释选择培养 菌悬液涂布平板挑选出单个菌落A. B.C. D.B3. 有关选择培养正确的叙述是( )A. 可以增加纤维素分解菌的浓度B. 可以减少纤维素分解菌的浓