实验21外界因素对酶活性的影响

1、实验二一外界因素对酶活性的影响一、实验目的了解外界因素对酶活性及酶促反应速度的影响。加深对酶特性的认识。二、实验原理酶的化学本质是蛋白质，它极易受外界条件的影响而改变它的构象及性质， 因而也必然会影响到它的催化活性。酶对温度、pH值、酶浓度及某些离子浓度 等变化很敏感。（一）pH值对酶活性的影响酶的活性受环境pH的影响极为显著，通常各种酶只有在一定的pH范围内才 能表现它的活性。一种酶表现其最高活性时的pH值称为该酶的最适pH。高于或 低于最适pH值时，酶的活性降低。酶的最适pH值受酶的纯度、底物的种类和浓 度、缓冲液的种类和浓度以及环境温度等条件影响。（二）温度对酶活性的影响每种酶都有其最适

2、温度，高于或低于此温度酶的活性都降低。一般而言，若 酶处于过高的温度环境中，会使酶活性永久地丧失；而若处于极低温度的环境中 只会使酶活性受到抑制，一旦温度适宜，酶又会全部或部分地恢复其活性。（三）酶浓度对酶促反应速度的影响在其它条件不变的情况下，若反应物浓度大大高于酶浓度时，则反应速度随 酶浓度增加而增加，两者间成正比关系，即：V=kE但若反应底物浓度较低，而且酶的浓度足够高时，增加酶浓度，反应速度基 本不变。（四）离子对酶活性的影响就唾液淀粉酶而言，低浓度Cl-可以增加酶活性，高浓度的Cl-或者低浓度 的CU2+则会抑制酶的活性，而低浓度的Na+、SO 2-等对酶活性没有影响。不同的酶 4对

3、不同的离子具有不同的效应。三、实验用品（一）材料 淀粉、唾液淀粉酶。（二）器材 冰箱、电炉、恒温水浴锅和铜水浴锅、试管架及试管、移液管 架及移液管、锥形瓶。（三）试剂0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液 称取35.61g含2个结品水的磷酸氢二钠， 用水定容至1 L。0.1 mol/L柠檬酸溶液 称取21.01g含1个结品水的柠檬酸，用水定容 至1 L。唾液淀粉酶 将唾液分别稀释10倍，50倍和100倍，得三种浓度的酶 液。O.5%淀粉的0.5%氯化钠溶液0.5 g可溶性淀粉和0.5g氯化钠，溶于100 ml蒸馏水（需加热）。0.1%淀粉液0.1g可溶性淀粉，加到100ml蒸馏水中，加热溶解。碘液1

4、5g碘化钾和12.7g的碘，加少许水使碘完全溶解后，再用水稀 释至200ml。1%氯化钠溶液。0.1%硫酸铜溶液。四、实验操作（一）pH对酶活性的影响1 .缓冲溶液的配制取6只洁净的三角烧瓶，按表21-1编号和加试剂：表21-1磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液的配制三角烧瓶号123456pH值5.46.26.87.O7.48.O0.2 mol/L 磷酸氢二钠(ml)11.1513.2215.4516.4718.1719.450.1 mol/L 柠檬酸(ml)8.856.784.553.531.83O.552.取6支洁净试管，分别编号后，按表21-2操作:表21-2 pH对酶活性的影响管 号12345

5、6pH值5.46.26.87.O7.48.O缓冲液量（ml）333333含NaCl的0.5%淀粉(ml)222222稀释100倍唾液（ml）222222充分摇匀37r保温，1 min后，用滴管从3#管中吸1滴反应液，放白瓷板用碘液检验 （1滴）。以后每隔1min检验 次。当3#管反应液遇碘液呈淡黄色时，立即向 6支管中加碘液碘液（滴）222222充分摇匀实验结果（二）温度对酶活性的影响取3支洁净试管，按表21-3操作:表21-3温度对酶活性的影响管 号123pH6.8磷酸缓冲液（ml）222含NaCl的O.5%淀粉液（ml）222立即处理温度OC100 C37C另取3支试管1，2，3，稀唾液1

6、： 50(ml)111处理温度OC100 C37C平衡时间10 min将1,、2,、3,试管的稀唾液分别倒人1、2、3管中作用时间10 min分别从1、2、3支试管中取出一滴在白瓷板上用碘液检 验结果改变处理温度全37 C37 C作用时间10 min再分别从1、2、3管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验 结果酶浓度对酶活性的影响取3支洁净试管，编号，按表21-4加入淀粉液，缓冲液，加毕后放人 37C恒温水浴中保温5 min。表21-4酶浓度对酶活性的影响管号含 NaCl 的 0.5% 淀粉液pH6.8的缓冲液稀释唾液褪色时间lO倍50倍100倍13 ml2 ml1ml23 ml2 ml1ml33

7、ml2 ml1ml保温后，快速加不同浓度的稀释唾液，摇匀，立即放入37C恒温水浴中。 计时，并每隔1min从各管中取出1滴，用碘液检验，记录从加进酶液至碘液检 验为橙黄色所需时间。离子对酶活性的影响取3支洁净试管，编号后按表21-5操作：表21-5离子对酶活性的影响管 号1231%NaCl (ml)10.1%CuSO4(ml)1蒸馏水(ml)1O.1%淀粉液(ml)333100倍稀释唾液(ml)l1137C恒温15min，然后冷却碘液（滴）22结果五、实验建议因各人的唾液淀粉酶活性有所差异，若某一碘液检验结果为全部变为淡 黄色，或无一变为淡黄色，则需增大或减少唾液稀释倍数，或者改变酶作用时间。配制缓冲液时，吸量要准确。检验离子对酶活性影响时，切勿吸错或污染了试剂。六实验报告及作业以反应速度为纵坐标，pH值、温度或酶浓度为横坐标，作出反应速度和 pH，温度或酶浓度的关系图。唾液淀粉酶的最适pH和最适温度是多少？如何进一步确定？温度为0C和100C两支试管中反应液遇碘呈蓝色，其原因有何不同？若 恢复最适温度，其结果为什么有差异？如何确定氯化