农业微生物配套实验实验二培养基的制备和灭菌

1、农业微生物学实验1实验二培养基的制备和灭菌 1本实验的目的和要求 了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解加压蒸汽灭菌的原理，并掌握其具体操作方法。2实验二 培养基的制备和灭菌2实验内容和原理 马丁氏培养基的配制 手提式高压蒸汽灭菌锅的使用 生理盐水的配制3实验二培养基的制备和灭菌马丁氏培养基 马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。4马丁氏培养基配方如下： 葡萄糖 10g蛋白胨 5g KH2PO4 1g MgSO47H2O 05g 琼脂 1520g 水 -1000ml pH 自然 此培养液1000ml加1%孟加拉红水溶液3.3ml。临用时每100ml培养基中加1%链

2、霉素液0.3ml。 5实验二培养基的制备和灭菌高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。6实验二培养基的制备和灭菌需用的仪器和试剂等 KH2PO4、MgSO47H2O、蛋白胨，葡萄糖、琼脂、孟加拉红、试管、三角瓶、烧杯、量杯、天平、手提式高压蒸汽灭菌锅，牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸等。7实验二培养基的制备和灭菌4实验步骤 培养基的配制 称量溶化

3、调pH过滤分装加塞包扎灭菌 无菌检查 8马丁氏培养基的配制1称量和溶化 按培养基配方，准确称取各成分，并将各成分依次溶化在少于所需要的水量中。待各成分完全溶化后，补足水分到所需体积。再将孟加拉红配成1%的溶液，在1000ml培养液中加入1%的孟加拉红溶液33ml，混匀后，加入琼脂加热溶化。 2分装、加塞、包扎、灭菌，无菌检查。 3链霉素的加入 由于链霉素受热容易分解，所以临用时，将培养基溶化后待温度降至45左右时才能加入。9灭菌操作步骤1首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。 2放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。

4、三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。 3加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。10灭菌操作步骤4加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。 本实验用 105kg/cm2，1213，25分钟灭菌。 5灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。6将取出的灭菌培养基放入 37温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。11实验二培养基的制备和灭菌生理盐水的配制 0.85%的氯化钠水溶液例如： 100ml生理盐水配制：称取0.85克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，定容到100毫升。12实验二培养基的制备和灭菌1. 制备培养基 马丁氏培养基 400ml/瓶，共3瓶 2.制备无菌生理盐水（供稀释平板计数用） 9ml/支 20支；90ml/瓶，4瓶（加玻璃珠）3.灭菌 121 25