医学精品课件xb三、细胞工程的技术基础

1、第三章细胞工程的技术基础2021/7/15 星期四1第一节基本设备第二节基本技术2021/7/15 星期四2第一节基本设备一设备与器材二器材处理2021/7/15 星期四3一、设备与器材 大型设备类：无菌室、超净工作台、无菌箱、CO2培养箱、倒置显微镜、实体镜、高速离心机、超速低温离心机、冰箱、超低温冰箱、液氮装置。2021/7/15 星期四42021/7/15 星期四52021/7/15 星期四6培养箱2021/7/15 星期四72021/7/15 星期四82021/7/15 星期四9光照培养室2021/7/15 星期四102021/7/15 星期四11显微镜室2021/7/15 星期四12

2、2021/7/15 星期四132021/7/15 星期四142021/7/15 星期四152021/7/15 星期四162021/7/15 星期四172021/7/15 星期四182021/7/15 星期四19 消毒灭菌设备：蒸汽压力消毒器 、电热干燥箱、过滤除菌装置 、离子发生器、耐酸耐碱容器、吸管自动冲洗器、超声波清洗器；2021/7/15 星期四20灭菌室2021/7/15 星期四212021/7/15 星期四222021/7/15 星期四232021/7/15 星期四242021/7/15 星期四25 配液用具：水纯化装置 、离子交换树脂装置、电子天平、磁力搅拌器、蒸发器等； 制备、培

3、养、保存细胞用品：解剖器具、80200目尼龙网或不锈钢网、血细胞计数板、培养器皿、细胞培养板（不同孔数）、涡流混悬器、恒温水浴振荡器、细胞冻存管、玻璃安瓿、真空低温干燥器、厚质玻璃容器等。2021/7/15 星期四262021/7/15 星期四272021/7/15 星期四282021/7/15 星期四292021/7/15 星期四302021/7/15 星期四312021/7/15 星期四322021/7/15 星期四332021/7/15 星期四342021/7/15 星期四35二、器材处理 玻璃器皿的清洗：浸泡刷洗浸酸冲洗 橡胶用品的处理：冲洗碱煮冲洗浸酸冲洗蒸煮清洗除菌滤器的处理：高压

4、灭菌塑料器皿的清洗：冲洗碱浸冲洗酸浸冲洗漂洗金属器械的清洗：汽油去脂洗净酒精擦蒸煮或高压灭菌包装：包装纸、牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、玻璃等，避免消毒后再污染；消毒灭菌：干烤、高压蒸汽灭菌、滤过除菌、紫外线、射线、（甲醛）熏蒸消毒、化学消毒剂、抗生素消毒灭菌。2021/7/15 星期四36一、无菌技术1.各种灭菌方法及其适用范围A湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌法、常压蒸汽灭菌法、间歇灭菌法）B 干热灭菌法（火焰灭菌、干热灭菌）C电离辐射灭菌D 紫外线杀菌E过滤除菌F化学杀菌G熏蒸灭菌法第二节基本技术2021/7/15 星期四372.无菌操作过程A 清洗 玻璃器皿的清洗 实验材料的清洗B 灭菌 培养

5、材料的灭菌以药剂灭菌法为主主要考虑：药剂的灭菌效果、材料对药剂的耐受力2021/7/15 星期四382021/7/15 星期四392021/7/15 星期四40 培养基灭菌高压蒸汽灭菌过滤灭菌C 接种经过表面灭菌的材料，按不同的要求，经过剪切、整理后，移植到培养基上培养的过程。接种室（无菌操作室）的灭菌接种台的灭菌工作人员注意事项2021/7/15 星期四413.实验室生物安全概念：指那些用以防止发生病原体或毒素无意中暴露及意外释放的保护原则、技术及实践。传染性微生物的危险程度分4级1级、2级、3级、4级生物安全水平（BSL）相应的也分为4级BSL 1（基础实验室）BSL 2（基础实验室）BS

6、L 3（防护实验室）BSL 4（最高防护实验室）2021/7/15 星期四42二、细胞制备： 机械分散法 淋巴细胞分离：肝素抗凝血剂+Hanks 稀释 分级分离 吸取 加其它培养液单细胞悬 胰蛋白酶 细胞 T、B细胞分离：尼龙棉柱过滤 B细胞粘附 液的制备 酶消化法 分离法 T细胞过滤 胶原酶 CD4/CD8细胞分离：SephadaG-10柱或 流式细胞分选仪 螯合剂分散法 单核 / 巨噬细胞分离淋巴细胞不粘， （与玻面粘附） 单核 / 巨噬细胞粘附2021/7/15 星期四43三、细胞计数法：血细胞计数板或器 细胞分装；四、细胞培养与传代五、细胞形态学检查法： 一般形态观察利用倒置显 普通染色观察（Giemsa染核） 微镜观察法 特殊染色法：DNA（Feulgen反应）、 DNA- RNA （甲基-派洛宁）、 糖（PAS）、脂（苏丹红II）、 线粒体（詹纳斯绿B液）、 叶绿体（吖啶橙） 2021/7/15 星期四44 吖啶橙：DNA、RNA利用荧光显微镜观察法 扫描 免疫荧光染色 透射利用电子显微镜观察法：扫描或透射。六、无血清培养液的设计和合成七、细胞的冻存、复苏与运输八、细胞培养的放大试验（生产）九、细胞培养时污染的检测、排除2021/7/15 星期四45本章内容到此结束谢谢大家欢迎研讨2021/7/15 星期四46【复习思考题】常用的灭菌方