历年开题报告

1、IGF-1对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞生长及IGF-1R表达的影响2012级硕士 代佳灵指导教师 何为民教授概括研究背景发病机制的研究现状研究进展研究方案预期研究结果创新之处工作总体安排及进度研究经费 一种器官特异性自身免疫性疾病 （25%50%） 严重影响患者容貌、视力及生活质量 （28） 成年人最常见的眼眶病治疗手段有限：糖皮质激素、免疫抑制剂、眼眶放射治疗、手术治疗均不能逆转眼眶组织的改变甲状腺相关眼病（thyroid associated ophthalmopathy，TAO）研究背景炎症细胞T细胞激活OF眶脂肪组织及眼外肌间质水肿眶脂肪组织增多前脂肪细胞 细胞因子、生长因子发病机制

2、的研究现状：眼眶成纤维细胞(OF) 结合大量水分 增殖分化粘附分子靶细胞和效应细胞 增殖、分泌糖胺聚糖沉积透明质酸（HA）危险因素：I131治疗、甲亢或甲减、吸烟共同抗原被自身反应性T细胞识别促甲状腺激素受体研究最多的共同抗原01在TAO患者来源的OF上表达，表达水平与疾病活动度呈正相关0203 可能代表全身免疫和器官特异性自身免疫之间的 联系04 不能解释没有甲状腺疾病的TAO患者（10）05研究进展：共同抗原的认识（1）TSHROF上TSHR的活化促进了HA的合成和脂肪生成胰岛素样生长因子-1受体近10年得到了广泛关注的另一种TAO的自身抗原01酪氨酸蛋白激酶受体。促细胞有丝分裂、促细胞转

3、化、抗细胞凋亡02 免疫组化染色证明TAO患者眼眶局部组织有IGF-1 的表达03GD患者由于甲状腺机能亢进导致血清内IGF-l水平升高04研究提示眼眶局部IGF-I与病情活动度密切相关05研究进展：共同抗原的认识（2）IGF-1R 拟检测不同浓度的IGF-1对OF增殖及IGF-1R表 达的影响01拟检测不同浓度的IGF-1对TSHR表达的影响02研究目的的培养与鉴定1、实验组：TAO患者球后脂肪组织10例2、正常对照组：行眼袋手术、无甲状腺疾病患者眶隔后脂肪组织5例3、所有操作均经家属同意及伦理委员会批准取材采用组织块培养法对人眼眶成纤维细胞进行原代培养、传代、冻存培养1、显微镜观察细胞形态

4、：细胞成长梭形2、免疫组织化学染色进行细胞鉴定（对数生长期）：波形蛋白（vimintin）染色阳性；desmin、S-100、 myoglobin、CK染色阴性；说明细胞为间叶（中胚层）来源鉴定研究方案-细胞实验（1） OF如无眼睑退缩,则必须有甲状腺功能异常或调节异常并合并以下临床体征之一:眼球突出;视功能障碍;眼外肌受累，并排除其他原因引起类似的眼部体征 排除标准： TAO组：符合诊断,但有其他眼病和全身免疫性疾病,排除 近3月内应用激素、免疫抑制剂等患者 正常对照组:排除其他眼病及全身免疫系统疾病的非TAO患者如有眼睑退缩,只要合并下列客观检查证据之一可确诊:甲状腺功能异常或激素调节异常

5、;眼球突出;视神经功能障碍;眼外肌受累纳入标准: TAO组： 符合诊断条件,需要并同意手术治疗患者 正常对照组: 获得知情同意的非TAO患者研究方案-细胞实验（1-1）TAO的诊断标准（2）TAO的诊断标准（1） IGF-1对OF增殖及IGF-1R表达的影响12MTT比色法绘制OF生长曲线(4-8代)3流式细胞术检测IGF-1R蛋白水平,并与对照进行比较4流式细胞术检测TSHR蛋白水平,并与对照进行比较5研究方案-细胞实验（2）MTT比色法检测不同浓度重组人IGF-1对OF增殖作用 TAO组 正常对照组 实验组 拟加入IGF-1浓度分别为200、 150、100、50ug/L对照组 不加IGF

6、一1空白对照组 无细胞，仅加入培养液各组资料间比较应用成组设计的方差分析研究方案-细胞实验（2-2）拟统计方法实验组与对照组两两比较用两独立样本t 检验IGF-1促进OF生长及其IGF-1R的表达IGF-1对TSHR的表达没有明显影响预期研究结果创新之处IGF-1R与OF的生长关系研究国内少见报道，本课题有助于为IGF-1R在黄种人TAO发生中的作用提供实验依据本课题对同一患者同时检测IGF-1R和TSHR，有助于探讨两者在TAO发生机制中的关系 2014年9-10月：细胞分离培养、鉴定OF2014年12月： 查漏补缺，数据处理、分析，论文写作2014年8-9月： 实验材料及试剂准备2014年11-12月：培养基中加入干预措施，绘制OF生长曲 线，