5-无菌及微生物检查方法验证ppt课件

1、无菌检查及微生物检查方法. 引见内容一、微生物的根底知识二、无菌检查方法. 微生物根底知识 微生物microorganism, microbe是一些 肉眼看不见的微小生物的总称。 微生物microorganism包括细菌、支原 体、螺旋体、衣原体、立克次体、病毒及真菌 霉菌、酵母菌和放线菌等。. 细菌bacterium属于原核细胞型微生物，其特点是具有细胞壁、原始的核质，以二分裂方式繁衍。. 细菌的形状细菌体积微小，是无色半透明的，用肉眼直接观 察难以看到，其构造和外形须经过显微镜放大数百 倍至上千倍才干察看。普通以微米m作为丈量单位。在细菌学中，按其形状可分为球菌、杆菌、弧菌 和螺杆菌。经革

2、兰染色法Gram stain可将细菌分成两大类：即革兰阳性菌G+和革兰阴性菌G-。. 真菌fungus；eumycetes 是具有真核和细胞壁的生物。种类很多，已报道的种超越10万个。大多是由纤细管状菌丝构成的菌丝体。许多菌丝在一同统称菌丝体。菌丝体在基质上生长的形状称为菌落。. 真菌的形状具有多样性，大小不一，大的用肉眼可以看到，小的用普通光学显微镜放大数倍乃至千倍方可察看到。其形状分单细胞、多细胞，单细胞呈圆形或卵圆形，如酵母菌yeast。多细胞由菌丝和孢子组成，并交错成团。 . 药品污染常见的真菌 毛霉属、根霉属、曲霉属、青霉属、木霉属 一、毛霉属Mucor Micheli ex Fri

3、es毛霉属在自然界分布很广，常用于发酵工业。并引起水分高的粮食及食品的霉烂蜕变。 .根霉属RhizopusEhrenberg 根霉属广泛运用于发酵工业，在潮湿的粮食及食品上能迅速蔓延生长，引起粮食及食品的腐烂。. 曲霉属Aspergillus 曲霉属的菌丝无色、淡色或外表凝聚有色物质，为有隔的多细胞。本属的常见产毒霉菌有8个种，具有剧烈的致癌性。 . 青霉属菌丝无色或有色，为有隔的多细胞。分生孢子梗从菌丝垂直生出，无足细胞，顶端不膨大，无顶囊，产生一轮至数轮分叉，在最后一级分枝的小梗上，长出成串的分生孢子，形似扫帚状，称为帚状枝。本属的常见产毒霉菌有9个种，其中展青霉可产生展青霉素，是一种神经

4、毒素，并具有致畸、致突变和致癌性；. 霉菌菌落形状. 霉菌在孟加拉红培育基上的形状. 酵母菌显微镜下形状. 无菌检查法 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、及其他种类能否无菌的一种方法。假设供试品符合无菌检查法的规定，仅阐明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 . 无菌保证 实验环境 检验根据 . 隔离系统的运用 运用隔离系统重要的目的是维护产品免受外源性污染，包括操作人员、操作环境及外包装等的污染，保证无菌实验结果的可靠性，实现一次检出的要求。是维护操作人员免受实验过程中的有害物质带来的污染。 隔离系统应按相关的要求进展验证，其内部环境的干净度须符合无菌检查的要

5、求。 日常检验还需对实验环境进展监控。. 培育基 硫乙醇酸盐流体培育基 改良马丁培育基 0.5%葡萄糖肉汤培育基 . 制备培育基的要求 培育基的装量与容器高度的比例应符合培育结 束后培育基氧化层粉红色不超越培育基深度1/2。 培育基氧化层颜色不得超越培育基深度的1/5，否那么，须经100水浴加热至粉红色消逝不超越20分钟，迅速冷却，只限加热一次。 配制好的培育基应采用验证合格的灭菌程序灭菌。. 培育基的储存 制备好的培育基应在2-25、避光保管； 保管在非密容器中，应在3周内运用；保管在密闭容器中，可在1年内运用。. 培育基的适用性检查 无菌性检查 每批培育基随机取不少于5支，培育14天应无菌

6、生长。实验可与无菌实验同时进展。灵敏度检查. 菌 种 菌液制备黑曲霉菌液的制备培 养 基 接 种参照中国药典2021版. 结果判别 空白对照应无菌生长，假设加菌的培育基管均生长良好，判该培育基的灵敏度检查符合规定。 实验同时应做空白对照. 稀释液、冲洗液 0.1%蛋白胨水溶液 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 根据供试品的特性，可选用其他阅历证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。 如需求，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后参与外表活性剂或中和剂等。. 阳性对照 根据供试品特性选择阳性对照菌： 无抑菌作用及抗革兰阳性菌 抗革兰阴性菌 抗厌氧菌 抗真菌 加菌量 结果判别. 阴性对照 供试品无菌检查

7、时，应取相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。. 无菌检查法 包括薄膜过滤法和直接接种法。 只需供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。. 薄膜过滤法 过滤器应优先选择封锁式薄膜过滤也可运用普通薄膜过滤器。 选择滤膜材质时应思索供试品及其溶剂的特性。.可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和黏性油剂供试品。水溶性供试品直接过滤。可溶性固体制剂供试品。装有药物的注射器供试品和具有导管的医疗器具的供试品。. 直接接种法 供试品按规定量分别接入含培育细菌和真菌培育基的容器中，除另有规定外，每个容器中的培育基量应符合接种的供试品体积不得大于培育基体积的10%。同时硫乙 醇酸盐培育基不得少

8、于15ml、改良马丁培育基不得少于10ml，培育基用量和高度应经方法验证。. 培育及察看 培育14天，假设培育基浑浊或培育14天后从外观不能判别能否长菌，可取该培育液适量转种至同种培育基或斜面上，培育细菌2天、真菌3天，察看有无菌生长或镜检进展判别。 阴性对照不得有菌生长。. 结果判别 假设供试品管均廓清，或虽显浑浊无菌生长，判供试品符合规定。 假设供试品中任何1管显混浊并确证有生长供试品不符合规定。 除非能充分证明，检出的微生物非供试品所含。 当符合以下至少一个条件时，方可判复试。 . 对无菌检查实验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求。 回想无菌实验过程，发现有能够引起微

9、生物污染的要素； 阴性对看管有菌生长。 供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证微生物生长是因无菌实验中所运用的物品和或无菌操作技术不当引起的。实验假设经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品，依法重试，假设无菌生长，判供试品符合规定，假设有菌生长判供试品不符合规定。. 方法验证的必要性为保证检验结果的可靠性，真实性，选择正确的检验方法是至关重要的。因此实验前必需对选择的方法进展验证。 证明所采用的方法是适宜的，确认所采用的方法适宜于被检供试品的微生物污染的检验。 药品无菌检查和微生物检查方法验证. 检验结果的影响要素供试品的组分 环境影响 检验方法检验条件.我国无菌和微生物检验方法验证的概略

10、国外无菌和微生物检验方法验证的概略国外无菌和微生物检验方法验证的概略 . 药品微生物检验方法验证的根本要求 验证实验的设计需综合全面思索，主要有以下几方面；供试品特性检验目的 实验全方面验证 . 当验证实验符合要求时，就可以为在该实验条件下该供试品对微生物无抑菌作用或抑菌作用可忽略不计，供试品检验结果可真实的表达。. 重新验证 药品的消费工艺、制剂组分、检验方法或检验条件发生改动时，应重新进展验证，以确认所发生的变化不影响该药品中的微生物检查。. 验证实验用菌株的要求 验证实验用菌株应有代表性。 实验菌株应选择非致病性菌株。实验菌宜选择比较稳定、重现性强的菌株。 菌株传代次数不得超越第五代。

11、. 实验用菌株的贮藏 菌种保藏的原那么 根据微生物菌种的生理、生化特性，在人工发明的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞根本上处于休眠形状，生长繁衍遭到抑制但不至于死亡，以减低菌种的变异率。. 规范菌株的复活或培育物的制备应按供应商提供的阐明或按验证的方法进展。 . 低温、枯燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都可以 抑制微生物的代谢和生长繁衍，因此低温、干 燥和真空是菌种保藏的重要手段。 规范贮藏菌株经纯度和特性确认后保管时，可将 培育物等份悬浮于抗冷冻的培育基中，并分装 于小瓶中,建议采用低温冷冻枯燥，液氮储存， 超低温冷冻(低于-70)等方法保管。 . 冷冻菌株一旦解冻转种制备任务菌株后,不得重新冷冻或再次运用。 任务菌株不可替代规范菌株，规范菌株的商业衍生物仅可用作任务菌株。. 不同的微生物，应根据其生物特征来选择最适宜的保藏方法，菌种的保藏方法普通分四个阶段：.挑选特征典型的纯菌菌落。确定保藏的适宜菌体形状。选择最适宜的方法保藏。定期对保藏的菌种进展检查。. 菌种的传代和运用 任务菌种的传代次数应严厉控制，不得超越5 代，从菌种保藏中心获得的规范菌株为第0代 防止过度的传代呵斥菌种变异。 1代是指将活的培育物接