生理科学实验-实验24肠肌20130308

1、实验24. M胆碱受体和H1组胺受体激动剂对离体豚鼠回肠的作用唐法娣（)浙江大学医学院2013.3Experiment 24. Effects of M-cholinergic receptor and H1- receptor Agonists on isolating guinea pig ileum 预习要求1.预习：理论-方法2.实验设计：根据提供的三个未标记的已知药乙酰胆碱、组胺和氯化钡，利用阿托品和氯苯那敏对三个药品进行识别，要求根据实验目的设计实验。观察胆碱能神经递质acetylcholine (Ach、乙酰胆碱），炎症介质histamine (His、组胺）对离体豚鼠回肠平滑肌

2、的作用。观察M胆碱受体拮抗剂atropine(阿托品)和组胺H1受体拮抗剂chlorpheniramine(氯苯那敏、扑尔敏）对乙酰胆碱、组胺的拮抗作用。 实验目的激动剂与拮抗剂的作用机制：乙酰胆碱：小剂量时有M胆碱受体激动作用。Ach与M-受体结合，使平滑肌Ca2+通道开放，Ca2+内流，肌浆Ca2+，平滑肌收缩幅度增高。大剂量时也有.N胆碱受体激动作用，使胃肠道平滑肌兴奋。阿托品：为M胆碱受体拮抗剂。阿托品与平滑肌细胞膜M-受体结合，阻断乙酰胆碱与M-受体结合，从而阻断乙酰胆碱对M-受体的激动作用。 实验原理3. 组胺:组胺是一种血管活性胺。与平滑肌细胞膜H1受体结合，通过激活G蛋白-磷酸

3、脂酶C系统，使细胞内Ca2+增高，平滑肌收缩。4. 氯苯那敏（扑尔敏）：为组胺H1受体拮抗剂。扑尔敏与平滑肌细胞膜H1受体结合，从而阻断组胺对H1受体的激动作用。 实验原理5. 氯化钡：肌肉兴奋剂。Ba2+经钙通道进入胞浆，使肌浆Ca2+，平滑肌收缩幅度增高，另一方面BaCl2兴奋胆碱能N受体， N受体有神经型和肌肉型， N受体激动时改变Na+、 K+、 Ca2+通道的电生理学特性，使肌肉收缩。 实验原理1. 材料1.1 实验动物 Dunkin-Hartley 豚鼠(guinea pig) 1. 材料1.2 药品与试剂未标记的激动剂：A，B，C。10-2g/L氯化乙酰胆碱（acetylchol

4、ine chloride）溶液；10-2g/L磷酸组织胺（histamine phosphate）溶液；10g/L BaCl2溶液。拮抗剂：1g/L硫酸阿托品（atropine sulfate）溶液； 10-3g/L氯苯那敏（chlorpheniramine）溶液。台氏液（Tyrode) g/L: NaCl 8.0, KCl 0.2, MgCl2 0.1, CaCl2 0.2, NaH2PO4 0.05, NaHCO3 1.0, 葡萄糖 1.0。1.3 仪器： 离体装置： 双层玻璃浴槽（20ml）、张力换能器 、微距调节夹 恒温水浴箱、多道生理信号采集处理系统 RM6240生物信号采集处理系统

5、1. 材料2.1 准备 清洗浴槽：清洗后,将台氏液装至刻度； 检查温度：370.5 ； 检查通氧: 单个小泡溢出; 打开电脑：选中桌面RM6240图标 选择“实验”-生理科学实验-肠肌 2. 方法清醒豚鼠轻击头部后股动脉放血打开腹腔取出回肠制作回肠标本一端固定在通气钩上置含有37台氏液的浴槽中通氧另一端固定在换能器上与多道生理信号采集处理系统的连接连接RM6240生物信号采集处理系统选择“实验”-生理科学实验-肠肌归零调节换能器张力（1g）稳定20分钟2. 方法2.2 实验步骤：找到回盲部，在离回盲部1cm处剪断回肠，取出回肠约15cm左右一段，置于盛有台氏液的培养皿中，将回肠剪成1-1.5c

6、m的小段。2.3 制作回肠标本：1-1.5cm线长50cm左右2. 方法回肠标本放入麦氏浴槽中将回肠标本的上端连线打一活结，勾在张力换能器的悬臂梁钩上将回肠标本的下端连线系于标本固定钩上，选中桌面RM6240图标选择“实验”-生理科学实验-肠肌 工具-快速归零（按右上快速归零Z）-调 “ 0”旋转调节螺母，调张力至1g。（见左上显示平均1g左右）调节螺母将RM6240系统处在记录状态；2.4 回肠标本张力调节2. 方法信号记录按钮实验项目预设：实验生理科学实验肠肌测量方式选择信号显示记录区剪辑图 RM6240系统软件窗口2. 方法1.实验-生理科学实验- 肠肌2.记录、实验中用暂停, 实验结束

7、用停止，停止后一定要另存为d或e盘。3.标记：在标记窗内打上药名，加药时做好标记。4.测量方法：选测量方法选择键-峰峰值测量5.剪辑：按剪辑图标-选中-剪切6.导出：文件-当前屏图像输出-到word标记窗2.5 RM6240系统的使用：停止暂停 待离体回肠稳定10min，记录一段正常收缩曲线。加A药0.3ml，观察并记录其收缩曲线，加入拮抗剂阿托品 0.3ml,曲线稳定后加A药，记录一段曲线后，用台氏液连续冲 洗浴槽3次换液，稳定5min。加B药0.3ml，观察并记录其收缩曲线，待曲线稳定后，加入 拮抗剂氯苯那敏0.3ml,观察5min，加B药，换液，稳定5min。加C药0.3ml，观察并记录

8、其收缩曲线，待曲线平稳后，加入 拮抗剂阿托品0.3ml,观察3min，加C药，记录曲线。 请根据实验结果考虑进一步设计实验，并继续实验。2. 方法2.6 实验观察记录2. 方法2.8 数据处理1.数据测量：从加药前的基线到最高点的收缩幅度，测得峰峰值。2.收集数据：离体豚鼠回肠实验10个小组的原始数据收集3.导出实验图：文件-当前屏图像输出2.9 统计2. 方法参考生理科学实验教程 p30应用Excel进行数据统计分析 t-检验以x s 表示注意事项：实验结束将资料另存为D盘或E盘，不要存在C盘或桌面，以免误退出程序时实验数据丢失。3. 结果3.1 药物对离体豚鼠回肠作用曲线图3.2 离体豚鼠回肠实验10个小组的原始数据列表 药物对离体豚鼠回肠平滑肌张力的影响(数据统计表）收集数据4.讨论1.A、B、C药分别为什么药？2.阿托品的作用和作用机制3.氯苯那敏的作用和作用机制实验24. M胆碱受体和H1受体激动剂对离体豚鼠回肠的作用1. 摘要（目的、方法、结果、结论）2. 材料和方法：3. 实验结果： 3.1 药物对离体豚鼠回肠作用曲线图（图题在图的下方） 3.2 表1 离体豚鼠回肠实验10个小组的原始数据列表实验报告要求：3.3 结果表2. 药物对离体豚鼠回肠平滑肌张力的影响3.4 结果叙述组别标本数收缩幅度（