实验动物模型(四)

1、Strong, dense boneFragile, osteoporotic bone骨质疏松流行病学流行病学 我国我国60岁以上人群达岁以上人群达60，随着我国老龄人口的增，随着我国老龄人口的增加，骨质疏松病人必将迅速增加。加，骨质疏松病人必将迅速增加。 据统计，全球据统计，全球5070的骨质疏松症分别发生在亚的骨质疏松症分别发生在亚洲国家和发展中国家，我国既是发展中国家，又地洲国家和发展中国家，我国既是发展中国家，又地处亚洲，人口基数最大，老龄速度最快，这些因素处亚洲，人口基数最大，老龄速度最快，这些因素均决定了骨质疏松症已成为我国一个严重的公众健均决定了骨质疏松症已成为我国一个严重的公

2、众健康问题。康问题。 调查发现，我国骨质疏松症总患病率为调查发现，我国骨质疏松症总患病率为16.1。原。原发性骨质疏松症总患病率为发性骨质疏松症总患病率为12.4（其中（其中80%是女是女性性 ）。）。 6069人群骨质疏松发病率：女性人群骨质疏松发病率：女性5070，男性：，男性：30。 骨质疏松相关骨折发生率：骨质疏松相关骨折发生率：27.532.6。 目前我国约有骨质疏松症患者目前我国约有骨质疏松症患者6000-8000万以上。万以上。并且有并且有1亿多人需要采取必要的预防措施，即亿多人需要采取必要的预防措施，即16000万人。万人。 骨质疏松症的危险因素骨质疏松症的危险因素长期低钙饮食

3、：每日长期低钙饮食：每日600mg。绝经或卵巢切除雌激素下降，骨吸收增加，肠钙吸收下降。绝经或卵巢切除雌激素下降，骨吸收增加，肠钙吸收下降。长期卧床：见阳光少，骨缺乏肌肉活动刺激，成骨活性下降。长期卧床：见阳光少，骨缺乏肌肉活动刺激，成骨活性下降。营养缺乏：如缺维生素营养缺乏：如缺维生素D及及K、Ca等，但蛋白质过高，产酸等，但蛋白质过高，产酸过多，使尿呈酸性，尿钙排泄增加，亦可促进骨质疏松。过多，使尿呈酸性，尿钙排泄增加，亦可促进骨质疏松。糖尿病：尿钙增加。糖尿病：尿钙增加。 过度饮酒：使尿钙增加。过度饮酒：使尿钙增加。大量吸烟、饮咖啡、浓茶：均使尿钙增加，骨吸收增加。大量吸烟、饮咖啡、浓茶

4、：均使尿钙增加，骨吸收增加。长期使用皮质激素、巴比妥、肝素均可影响钙的吸收，尿钙长期使用皮质激素、巴比妥、肝素均可影响钙的吸收，尿钙排泄增加，促进骨量丢失。排泄增加，促进骨量丢失。 骨质疏松基本预防措施骨质疏松基本预防措施骨组织细胞骨质骨细胞成骨细胞骨祖细胞破骨细胞有机质无机质 骨单位的形成是先由破骨细胞分解吸收陈骨单位的形成是先由破骨细胞分解吸收陈旧骨质，形成一锥形隧道，在隧道最宽处出旧骨质，形成一锥形隧道，在隧道最宽处出现一转变区，此处破骨细胞消失，成骨细胞现一转变区，此处破骨细胞消失，成骨细胞前体形成成骨细胞，开始形成粘合线并分泌前体形成成骨细胞，开始形成粘合线并分泌类骨质，钙化形成骨板

5、。类骨质，钙化形成骨板。骨代谢骨代谢正常骨转换过程正常骨转换过程 1 1 去卵巢致大鼠骨质疏松去卵巢致大鼠骨质疏松 2 2 药物致大鼠骨质疏松药物致大鼠骨质疏松 3 3 废用性骨质疏松废用性骨质疏松 妇女绝经或卵巢切除后，由于体妇女绝经或卵巢切除后，由于体内雌激素水平降低，而使骨代谢呈负内雌激素水平降低，而使骨代谢呈负平衡平衡 骨吸收增强，骨量逐渐丢失，骨吸收增强，骨量逐渐丢失，形成骨质疏松。形成骨质疏松。1212月龄雌性大鼠月龄雌性大鼠麻醉麻醉腹位固定腹位固定纵行切口纵行切口（躯干下（躯干下1/31/3，距脊柱两侧各，距脊柱两侧各1-2cm1-2cm）切除双侧卵巢切除双侧卵巢缝合缝合测定测定

6、个月后个月后骨密度指标骨密度指标骨矿成分测定骨矿成分测定骨组织形态指标骨组织形态指标骨代谢有关的生化指标骨代谢有关的生化指标1 1、手术应注意无菌操作。、手术应注意无菌操作。2 2、卵巢应尽量切除干净。、卵巢应尽量切除干净。 维甲酸是维生素维甲酸是维生素A的一类衍生物，的一类衍生物，是用于肿瘤和银屑病等治疗的药物，是用于肿瘤和银屑病等治疗的药物，但对骨质有明显影响，具有致骨质疏但对骨质有明显影响，具有致骨质疏松的副作用。松的副作用。3 3月龄大鼠月龄大鼠灌胃给予维甲酸灌胃给予维甲酸7.5mg/kg/7.5mg/kg/日日停用停用常规饲养常规饲养测定测定2 2周后周后 由于运动受限和功能障碍，如

7、器由于运动受限和功能障碍，如器官疾病、骨折固定卧床或失重等因素，官疾病、骨折固定卧床或失重等因素，一段时间内引起骨骼肌活动量减少，一段时间内引起骨骼肌活动量减少，会引起废用性骨质疏松。会引起废用性骨质疏松。8 8月龄大鼠月龄大鼠切断坐骨神经切断坐骨神经即成即成8 8周后周后制动法制动法悬吊法悬吊法成年大鼠成年大鼠尾部悬吊尾部悬吊2929天后天后即成即成 固定固定剥离气管剥离气管接输液装置接输液装置0.1%肾上腺素肾上腺素0.3ml/kg剥离颈动脉剥离颈动脉剥离颈静脉剥离颈静脉测定血压测定血压备用备用夹住气管夹住气管缝皮针穿入剑突处缝皮针穿入剑突处测定呼吸测定呼吸麻醉麻醉处死处死开胸开胸取肺取肺

8、结扎气管分叉处结扎气管分叉处观察测定观察测定2 2切开肺脏，注意观察有无切开肺脏，注意观察有无粉红色泡沫样液体流出。粉红色泡沫样液体流出。计算肺系数计算肺系数 2. 2.动物对注入肾上动物对注入肾上 腺素的耐受性个腺素的耐受性个 体差异较大，有些动物需注入较多量体差异较大，有些动物需注入较多量 的肾上腺素才出现急性肺水肿。的肾上腺素才出现急性肺水肿。 1.1.解剖取出肺时，注意勿损伤肺表面解剖取出肺时，注意勿损伤肺表面 和挤压肺组织，以防止水肿液流出，和挤压肺组织，以防止水肿液流出， 影响肺系数值；影响肺系数值； NREMSREMS1期期2期期3期期4期期 SWS（非快速眼球运动睡眠）（快速眼

9、球运动睡眠）睡眠时相睡眠时相对机体的发育和疲劳的恢复起 着重要的作用 与脑的发育和智力的发达关系密切 SWSREMS研究新型催眠药物的途径选择性增加SWS，同时能够保证REMS正常比例的药物。 肌电input 脑电Filter 觉醒觉醒浅睡浅睡 肌电input 脑电Filter SWS 肌电t 脑电Filter REMS 肌 电 -6.000000 脑 电er 平台睡眠剥夺技术平台睡眠剥夺技术强迫运动睡眠剥夺法强迫运动睡眠剥夺法轻柔刺激法轻柔刺激法药物睡眠剥夺法药物睡眠剥夺法电刺激法电刺激法单平台睡眠剥夺法单平台睡眠剥夺法多平台睡眠剥夺法多平台睡眠剥夺法改良多平台睡眠剥夺法改良多平台睡眠剥夺法

10、水平转盘睡眠剥夺法水平转盘睡眠剥夺法旋转圆筒睡眠剥夺法旋转圆筒睡眠剥夺法咖啡因、去氧麻黄碱、神经毒素咖啡因、去氧麻黄碱、神经毒素 刺激参数：电流刺激参数：电流0.5mA,0.5mA,波宽波宽15ms,15ms,频率频率1Hz,1Hz,时间时间30s/30s/次次 将大鼠置于失眠刺激器内将大鼠置于失眠刺激器内, ,通过通过笼底部的电栅刺激大鼠足底部八小时笼底部的电栅刺激大鼠足底部八小时, ,在刺激期间在刺激期间, ,脑电记录可自动中断脑电记录可自动中断, ,由由电刺激引起的大鼠失眠被认为是接近电刺激引起的大鼠失眠被认为是接近于人类失眠的合适病理模型。于人类失眠的合适病理模型。成年大鼠成年大鼠麻醉

11、麻醉脑立体定位仪固定脑立体定位仪固定成年大鼠成年大鼠麻醉麻醉头部剪毛、消毒头部剪毛、消毒脑立体定位仪固定脑立体定位仪固定剥离骨膜剥离骨膜剪开皮肤剪开皮肤成年大鼠成年大鼠麻醉麻醉头部剪毛、消毒头部剪毛、消毒脑立体定位仪固定脑立体定位仪固定安装电极安装电极剥离骨膜剥离骨膜剪开皮肤剪开皮肤成年大鼠成年大鼠麻醉麻醉头部剪毛、消毒头部剪毛、消毒脑立体定位仪固定脑立体定位仪固定安装电极安装电极剥离骨膜剥离骨膜剪开皮肤剪开皮肤牙科水泥固定牙科水泥固定成年大鼠成年大鼠麻醉麻醉头部剪毛、消毒头部剪毛、消毒脑立体定位仪固定脑立体定位仪固定安装电极安装电极剥离骨膜剥离骨膜剪开皮肤剪开皮肤牙科水泥固定牙科水泥固定单笼

12、饲养单笼饲养成年大鼠成年大鼠麻醉麻醉头部剪毛、消毒头部剪毛、消毒脑立体定位仪固定脑立体定位仪固定安装电极安装电极剥离骨膜剥离骨膜剪开皮肤剪开皮肤牙科水泥固定牙科水泥固定7 7天天腹腔注射青霉素腹腔注射青霉素单笼饲养单笼饲养置于失眠刺激置于失眠刺激器内器内成年大鼠成年大鼠麻醉麻醉描记脑电描记脑电9 9：30173017：3030头部剪毛、消毒头部剪毛、消毒脑立体定位仪固定脑立体定位仪固定安装电极安装电极剥离骨膜剥离骨膜剪开皮肤剪开皮肤牙科水泥固定牙科水泥固定7 7天天腹腔注射青霉素腹腔注射青霉素单笼饲养单笼饲养置于失眠刺激置于失眠刺激器内器内成年大鼠成年大鼠麻醉麻醉描记脑电描记脑电9 9：301

13、73017：3030头部剪毛、消毒头部剪毛、消毒脑立体定位仪固定脑立体定位仪固定安装电极安装电极剥离骨膜剥离骨膜剪开皮肤剪开皮肤牙科水泥固定牙科水泥固定7 7天天腹腔注射青霉素腹腔注射青霉素单笼饲养单笼饲养置于失眠刺激置于失眠刺激器内器内1 1免疫系统免疫系统肝肝病毒 1 1药物性肝损伤药物性肝损伤: : CCLCCL4 4、D-D-氨基半乳糖氨基半乳糖 2 2免疫性肝损伤免疫性肝损伤 3 3 嗜肝嗜肝DNADNA病毒感染病毒感染: :灵长类、鸭灵长类、鸭、树鼩等树鼩等同种免疫性肝损伤同种免疫性肝损伤体外免疫性肝损伤体外免疫性肝损伤 卡介苗加脂多糖卡介苗加脂多糖异种免疫性肝损伤异种免疫性肝损伤

14、 四氯化碳进入动物体内后，在肝内四氯化碳进入动物体内后，在肝内被氧化酶代谢，生成活波的三氯烷基自被氧化酶代谢，生成活波的三氯烷基自由基和氯自由基。这些自由基可与细胞由基和氯自由基。这些自由基可与细胞内和细胞膜的大分子发生共价结合，使内和细胞膜的大分子发生共价结合，使酶的功能丧失，细胞膜脂质过氧化，导酶的功能丧失，细胞膜脂质过氧化，导致细胞损伤坏死。致细胞损伤坏死。成年大鼠成年大鼠 腹腔或皮下注射腹腔或皮下注射CCLCCL4 4原液原液1ml/kg1ml/kg 灌胃灌胃40% CCL40% CCL4 4 橄榄油橄榄油0.81.6ml/kg0.81.6ml/kg处死动物处死动物1624h1624h

15、取血测定、取血测定、肝病理切片肝病理切片 1 1四氯化碳剂量要选择合适四氯化碳剂量要选择合适2 2四氯化碳蒸汽和液体可由四氯化碳蒸汽和液体可由呼吸道、皮肤吸收，对人体有呼吸道、皮肤吸收，对人体有一定毒性，操作时应注意。一定毒性，操作时应注意。 预先给小鼠注射卡介苗可使中性粒预先给小鼠注射卡介苗可使中性粒细胞或巨噬细胞聚集于肝，继后再用低细胞或巨噬细胞聚集于肝，继后再用低剂量大肠杆菌脂多糖攻击注射，可激活剂量大肠杆菌脂多糖攻击注射，可激活这些细胞释放对肝细胞有毒性作用的因这些细胞释放对肝细胞有毒性作用的因子，造成免疫性肝损伤。子，造成免疫性肝损伤。小鼠小鼠 尾静脉注射卡介苗尾静脉注射卡介苗0.2

16、ml(100.2ml(108 8活菌活菌/ ml)/ ml)1212天后天后10h10h后后取血和肝组织取血和肝组织尾静脉注入尾静脉注入7.5g7.5g脂多糖脂多糖每批卡介苗所含活菌数有所差每批卡介苗所含活菌数有所差异，实验前应做活菌数的检测。异，实验前应做活菌数的检测。 1 1药物性肝损伤药物性肝损伤: : CCLCCL4 4、D-D-氨基半乳糖氨基半乳糖 2 2免疫性肝损伤免疫性肝损伤 3 3 嗜肝嗜肝DNADNA病毒感染病毒感染: :灵长类、鸭、灵长类、鸭、树鼩树鼩等等同种免疫性肝损伤同种免疫性肝损伤体外免疫性肝损伤体外免疫性肝损伤 卡介苗加脂多糖卡介苗加脂多糖异种免疫性肝损伤异种免疫性

17、肝损伤一、病因和发病机制一、病因和发病机制病毒性肝炎：病毒性肝炎：乙型慢性活动性肝炎，我国多见。乙型慢性活动性肝炎，我国多见。慢性酒精中毒：慢性酒精中毒：NADNADH脂肪氧化脂肪氧化脂肪合成脂肪合成肝脂变肝脂变肝细胞肝细胞坏死坏死营养缺乏：营养缺乏：蛋白质蛋白质酶结构受损酶结构受损+酶活性酶活性 肝肝细胞抵抗力细胞抵抗力易受损害易受损害坏死坏死蛋氨酸蛋氨酸胆碱胆碱磷脂磷脂脂蛋白脂蛋白脂肪肝脂肪肝毒物中毒：毒物中毒：毒物毒物肝细胞损伤坏死肝细胞损伤坏死肝硬化肝硬化 实验动物由于炎症、中毒、营养实验动物由于炎症、中毒、营养不良等不同原因，使肝脏受到长期、不良等不同原因，使肝脏受到长期、反复而且广

18、泛的损害时，可引起肝细反复而且广泛的损害时，可引起肝细胞变性和坏死，继而由于肝细胞的再胞变性和坏死，继而由于肝细胞的再生和纤维组织增生，使肝脏组织结构生和纤维组织增生，使肝脏组织结构破坏，质地变硬，发生肝硬变。破坏，质地变硬，发生肝硬变。雄性大鼠雄性大鼠皮下注射皮下注射40%40%CCLCCL4 4橄榄油橄榄油0.5ml/100g0.5ml/100g第一天第一天每隔四天每隔四天皮下注射皮下注射CclCcl4 40.3ml/100g0.3ml/100g30%30%乙醇乙醇混合饲料混合饲料喂饲喂饲79.5%79.5%单纯玉米单纯玉米粉粉20%20%猪油猪油 0.5%0.5%胆固醇胆固醇雄性大鼠雄性大鼠皮下注射皮下注射40%40%CCLCCL4 4橄榄油橄榄油0.5ml/100g0.5ml/100g第一天第一天每隔四天每隔四天皮下注射皮下注射CclCcl4 40.3ml/100g0.3ml/100g30%30%乙醇乙醇混合饲料混合饲料喂饲喂饲4242天即成天即成致病因素致病因素 1、肾血流动力学障碍、肾血流动力学障碍 2、肾小管管腔堵塞、肾小管管腔堵塞 3、组织缺氧、组织缺氧 4、肾内皮细胞功能失常、肾内皮细胞功能失常 5、体内与急性肾衰发病机制密切相关的物质、体内与