梅毒感染的实验室检测流程及策略(上海2015.8.7)

1、浙江大学医学院附属第二医院浙江大学医学院附属第二医院检验科检验科 陶志陶志华华E-mail: E-mail: 梅毒感染的实验室检测梅毒感染的实验室检测流程与策略流程与策略n 梅毒流行病学简介梅毒流行病学简介n 梅毒实验室检测流程梅毒实验室检测流程n 罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果n梅毒实验室检测策略梅毒实验室检测策略主要内容据最新估计，全球每年有1200万新发梅毒感染病例，其中200万为孕妇WHO. 2011; WHO. 2012; WHO. 2011; WHO. 2012; UNICEF. 2011. UNICEF. 2011. 梅毒感染新发病例(单位：百万)全

2、球梅毒流行现状 梅毒起源于美洲，然后从美洲到西班牙，从欧洲到亚洲印度，15051505年年从印度传入广东岭南（“广东疮”），后传到全国各地。少数民族地区居民梅毒感染率 = 10%牧区人群梅毒感染率 = 48%部分城市地区人群梅毒感染率 = 5%部分农村地区人群梅毒感染率 = 2-3%（此幻灯片内容源自中国疾病预防控制中心性病控制中心陈祥生教授）我国梅毒流行现状 通过三大措施，梅毒在我国实现基本消灭n 健康教育和宣传运动健康教育和宣传运动n 免费梅毒筛查（梅毒血清制动试验、荧光抗免费梅毒筛查（梅毒血清制动试验、荧光抗体试验）体试验）n 治疗治疗我国梅毒基本消灭我国梅毒基本消灭(1950-1964

3、(1950-1964年年) ) 作为重大防治成就、学术成就，作为重大防治成就、学术成就，赢得国际上的广泛认可。赢得国际上的广泛认可。n19781978年获得全国科学大会奖年获得全国科学大会奖n发表论文发表论文我国对梅毒的控制和我国对梅毒的控制和消灭消灭、梅毒的传播及在中国梅毒的传播及在中国的消灭的消灭（此幻灯片内容源自中国疾病预防控制中心性病控制中心陈祥生教授）我国梅毒流行现状6中国梅毒报告发病趋势中国梅毒报告发病趋势n梅毒报告病例数梅毒报告病例数448 620448 620例，居甲乙类传染病第例，居甲乙类传染病第3 3位位n梅毒报病较梅毒报病较20112011年增长年增长4.41%4.41%

4、，隐性梅毒增长的贡献率，隐性梅毒增长的贡献率99.6%99.6%（此幻灯片内容源自中国疾病预防控制中心性病控制中心龚向东教授）我国梅毒流行现状梅毒是一个可以临床治愈的传染病病例诊断依据n病史病史n症状症状n实验室检查实验室检查实验室检查结果对梅毒诊断及判愈有决定性意义实验室检查结果对梅毒诊断及判愈有决定性意义我国梅毒流行现状我国政府梅毒控制相关政策我国政府梅毒控制相关政策l卫生部于2010年6月3日下发了关于中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）l卫生部2011年2月12日下发预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播工作实施方案l国务院2012年1月13日中国预防控制艾滋病五年行动计划（2101

5、1-2015年）l2013年1月实施性病防治管理办法梅毒控制主要措施：梅毒控制主要措施：提高梅毒实验室检测质量提高梅毒实验室检测质量加强梅毒筛查力度加强梅毒筛查力度我国梅毒流行现状n 梅毒流行病学简介梅毒流行病学简介n 梅毒实验室检测流程梅毒实验室检测流程n 罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果n梅毒实验室检测策略梅毒实验室检测策略主要内容常用梅毒实验室检测方法n 病原学检测病原学检测n 血清学检测血清学检测病原学检查病原学检查原理：原理：一期、二期梅毒时一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组黏膜斑等皮损

6、部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。其特殊形态和运动方式进行检测。方法：方法： （1 1）暗视显微镜检查）暗视显微镜检查 （2 2）镀银染色法）镀银染色法 （3 3）核酸检测（血液标本？）核酸检测（血液标本？）注：梅毒螺旋体目前体外人工培养还没有获得成功，注：梅毒螺旋体目前体外人工培养还没有获得成功，仅能通过接种兔睾丸等部位进行有限增殖。仅能通过接种兔睾丸等部位进行有限增殖。 病原学检查的临床意

7、义n 螺旋体检查是诊断早期梅毒螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。传染源都有十分重要的意义。n 如未见到梅毒螺旋体，并不如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。能排除患梅毒的可能性。梅毒血清学检测方法n非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体非特异性梅毒抗体）n 梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体特异性梅毒抗体）两类方法。）两类方法。非梅毒螺旋体抗原血清学检测方法包括：方法包括： （1 1）快速血浆反

8、应素环状卡片试验）快速血浆反应素环状卡片试验 ( (RPRRPR) ) （2 2）甲苯胺红不加热血清试验（）甲苯胺红不加热血清试验（TRUSTTRUST） （3 3）性病研究实验室试验）性病研究实验室试验 ( (VDRLVDRL) )等。等。基本成分是基本成分是心磷脂心磷脂 卵磷脂和胆固醇卵磷脂和胆固醇抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见上述方法的敏感性和特异性都基本相似上述方法的敏感性和特异性都基本相似梅毒螺旋体抗原血清学检测n 抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺旋体重组特抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺旋体重组特异抗原），检

9、测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体异抗原），检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。抗原的抗体。n 感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则阳性，则患者终身阳性患者终身阳性。梅毒螺旋体抗原血清学试验方法n梅毒螺旋体颗粒凝集试验梅毒螺旋体颗粒凝集试验 ( (TPPATPPA) )n 梅毒螺旋体血球凝集试验梅毒螺旋体血球凝集试验 ( (TPHATPHA) )n 梅毒酶联免疫吸附试验（梅毒酶联免疫吸附试验（ELISAELISA）n 化学发光免疫分析法化学发光免疫分析法（CLIACLIA）n 梅毒免疫层析法梅毒免疫层析法- -梅毒快速检测梅毒快速

10、检测 ( (RTRT) )n 荧光螺旋体抗体吸收试验（荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABSFTA-ABS）n 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WBWB）梅毒螺旋体免疫学检测的发展历程1980s2000EIA被FDA批准用于确认试验和血液筛查英国公共健康实验室指南：EIA可以作为替代VDRL/RPR+TPHA的选择之一2001FDA批准EIA用于临床诊断2008欧盟指南推荐：EIA/CIA/TPPA用于筛查，不再推荐VDRL/RPR2009美国CDC-APHL报告：EIA/CIA用于筛查. .European guideline on

11、 the management of syphilis 2008European guideline on the management of syphilis 2008STD treatment guideline 2006 US CDC STD treatment guideline 2006 US CDC 2014欧洲梅毒管理指南自动化的化学发光检测已经用于许多大型的欧洲实验室，尤其适合对无症状的人群和献血者进行高通量的筛查。该检测流程更能检测非常早期的梅毒感染。European guideline on the management European guideline on the

12、management of syphilis 2014of syphilis 2014美国梅毒检测类型的变化 化学发光的测试数量逐年增加为何选择ECLIA/CLIA? ECLIA/CLIA? n 自动化（高通量）n 低成本（高样本量的情况下）n 更少的实验室职业危害n 没有假阴性n 结果客观n 检测IgMIgM抗体，可用于诊断非常早期的感染VSUS CDC: reverse sequence US CDC: reverse sequence syphilis screeningsyphilis screening检测原理: 双抗原夹心法(DAGS) ，检测时间18 分钟IgG:IgG:样本中，

13、抗样本中，抗- -TpN17TpN17, , 或抗或抗- -TpN15TpN15抗体抗体钌标记的钌标记的TpN17TpN17, , TpN47TpN47抗抗原原9 9 分钟分钟测定测定IgM:IgM:样本中，抗样本中，抗- -TpN17TpN17, , 或抗或抗- -TpN47TpN47抗体抗体生物素标记的生物素标记的TpN17, TpN17, TpN15TpN15抗原抗原9 9 分钟分钟快速高效全自动电化学发光(ECLIAECLIA)免疫检测原理n 梅毒流行病学简介梅毒流行病学简介n 梅毒实验室检测流程梅毒实验室检测流程n 罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果n梅毒实

14、验室检测策略梅毒实验室检测策略主要内容国际多中心研究Clinical and Vaccine Immunology January 2015 Volume 22 Number 1意大利德国（3家中心）土耳其中国（华西医院）泰国奥地利全球共8家研究中心（6个国家）国际多中心研究 研究设计 ElecsysElecsysLiaisonLiaison SerodiaSerodiaImmuliteImmuliteArchitectArchitectLiaisonSerodiaImmuliteArchitect敏感性评估特异性评估VitrosEnzygnost样本信息特异性评估样本来源干扰样本8079例3

15、500常规样本225HIV91EBV10Lyme病4579献血员敏感性评估确诊样本干扰样本928例922阳性228合并HIV6阴性国家/ /中心样本量ElecsysElecsysLiaisonLiaison SerodiaSerodia ImmuliteImmulite ArchitectArchitectTMTM德国 lab1301100%100%100%德国 lab283100%100%98.8%98.8%意大利218100%100%100%泰国124*100%100%中国202100%总体928928* *100%100%100%100%100%100%99.67%99.67%99.51

16、%99.51%研究结果 敏感性结果* * Elecsys Elecsys 梅毒检测试剂在所有实验室中的敏感度结果均达到 100%100%* 2例样本结果为“不确定”，4例为“无反应性”梅毒分期样本量确认阳性ElecsysElecsysI期梅毒101101100%II期梅毒124124100%隐性梅毒470470100%未知分期229227*100%总体924#922*100%研究结果 梅毒分期样本的敏感性结果* * Elecsys Elecsys 梅毒检测试剂在能100%100%检测出不同分期梅毒样本# 排除4例疑似操作错误的样本最终计算结果时排除2例确证试验结果为未确定的样本* 排除2例确证

17、试验结果为未确定的样本样本Lot P1Lot P1Lot P2Lot P2Lot P3Lot P3常规样本99.80 %99.90 %100.00 %献血员样本99.93 %99.82 %99.82 %总体特异性99.88 %99.85 %99.89 %研究结果 总体特异性结果（3批次试剂）* Elecsys Elecsys 梅毒检测试剂的总体特异性大于 99.85%99.85% 研究结果特异性结果-献血员样本* * Elecsys Elecsys 梅毒检测试剂在献血员样本中的总体特异性达到 99.93%99.93% 研究结果特异性结果-常规样本* * Elecsys Elecsys 梅毒检测

18、试剂在常规样本中的总体特异性达到 99.80%99.80% 研究结果干扰样本结果* * Elecsys Elecsys 梅毒检测试剂在可能的干扰样本中的敏感性和特异性均更高EBV (+) / Syphilis (-)EBV (+) / Syphilis (-)特异性HIV HIV (+)(+) / Syphilis (-) / Syphilis (-)EBV-Lyme (+) / Syphilis (-)EBV-Lyme (+) / Syphilis (-)n=225, 100%n=81, 100%n=20, 100%100.090.080.0敏感性HIV HIV (+)(+) / Syphi

19、lis ( / Syphilis (+ +) )n=228（%）（%）中国多中心研究广西海南黑龙江济南杭州安徽武汉湖南山西内蒙古西安甘肃青海成都贵州西藏乌鲁木齐北京* *2 2南京上海长春昆明南宁广州* *2 2福州* *2 2牵头单位：四川大学华西医院王兰兰主任/陶传敏教授研究中心：15家 研究中心医院名称主要研究者负责人四川大学华西医院王兰兰陶传敏昆明市第三人民医院李晓非吕松琴第四军医大学西京医院郝晓柯皇海首都医科大学附属北京佑安医院娄金丽陈俊梅北京大学第三医院张捷崔丽艳/梁永明吉林大学第一医院续薇高丹丹山东省立医院张炳昌邹建文第二军医大学长海医院邓安梅陈园园浙江大学医学院附属第二医院陶志

20、华张松照江苏省人民医院潘世扬徐华国南方医科大学南方医院裘宇容袁帅广东省中医院黄宪章黄妩姣福建省立医院伍严安沈菁广西医科大学附属肿瘤医院朱波黄文成福建医科大学附属第一医院欧启水陈静 研究设计参比方法1： Architect参比方法2： ELISA（2种品牌）参比方法3： 国产化学发光法-CLIA常规随机样本预留确诊样本“临界”样本* *干扰样本不一致结果RIBARIBA（免疫印迹）* * 临界样本（检测结果出现不一致结果可能性较大的区间）： Architect Architect：0.9 COI 50.9 COI 5 ELISA ELISA：0.75 COI 30.75 COI 3 国产化学发光

21、法：0.9 COI 50.9 COI 5 样本信息组别随机样本确诊样本临界样本干扰样本总数ArchitectArchitect6004359762106649ELISA-1ELISA-14820391754115697ELISA-2ELISA-22943253152373448CLIACLIA36551160623833总数17422174221119111916616692092019627196274种比对方法，4组样本* * 所有比对组共收集样本近2 2万例 研究结果Elecsys梅毒检测结果的阳性结果分布* * 在所有常规随机样本中的阳性率为4.974.97% %，剔除传染病院数据后的

22、阳性率为2.582.58% %Cut off 1.0例数检测结果区间 研究结果Elecsys与不同比对方法间的一致性* * Elecsys Elecsys 与所有比对方法在常规随机样本中的一致性达到 99.48%99.48%ElecsysElecsys阳性样本阴性样本总体ArchitectArchitect83.09%99.68%99.30%ELISA-1ELISA-196.12%99.83%99.30%ELISA-2ELISA-297.85%99.66%99.49%CLIACLIA95.15%99.85%99.56%总数99.4899.48Elecsys 比对试剂随机样本结果随机样本的敏感性

23、和特异性结果* Elecsys Elecsys 在所有比对组随机样本中的假阳性和假阴性结果均最少0202040011153946490246810121416ElecsysArchitectElecsysELISA-1ElecsysELISA-2ElecsysCLIA例数vsvsvsvs假阴性 假阳性假阴性 假阳性假阴性 假阳性假阴性 假阳性 研究结果随机样本的敏感性和特异性结果* * Elecsys Elecsys 在所有比对组随机样本中的敏感性均达到 100%100%，特异性也更优异 Elecsys vs. ArchitectElecsys vs. ArchitectElecsysElec

24、sys vs. vs. ELISA-1ELISA-1Elecsys vs. ELISA-2Elecsys vs. ELISA-2ElecsysElecsys vs. vs. CLIACLIA敏感性10098.2610099.1110099.77100100特异性99.8199.7499.9399.8099.8598.5699.8899.74NPVNPV10099.9710099.9610099.85100100PPVPPV91.2788.2898.6896.1298.5897.8598.1896.00 研究结果预留确诊样本的敏感性* * Elecsys Elecsys 及所有比对试剂均能 10

25、0%100%检测出不同分期的确诊梅毒样本 Elecsys vs. ArchitectElecsys vs. ArchitectElecsys vs. ELISA-1Elecsys vs. ELISA-1Elecsys vs. ELISA-2Elecsys vs. ELISA-2Elecsys vs.Elecsys vs. CLIA CLIA梅毒分期样本数ElecsysElecsysArchitecArchitect t样本数ElecsysElecsysELISA-1ELISA-1样本数ElecsysElecsysELISA-2ELISA-2样本数ElecsysElecsysCLIACLIA 一

26、期梅毒20100 %100 %100 %100 %4444100 %100 %100 %100 %2 2100 %100 %100 %100 %无分期信息 二期梅毒55100 %100 %100 %100 %7474100 %100 %100 %100 %2424100 %100 %100 %100 % 三期梅毒6100 %100 %100 %100 %2424100 %100 %100 %100 %6 6100 %100 %100 %100 % 隐性梅毒96100 %100 %100 %100 %149149100 %100 %100 %100 %5656100 %100 %100 %100

27、 %未分期182*100 %100 %100 %100 %100100100 %100 %100 %100 %165165100 %100 %100 %100 %116116100 %100 %100 %100 % 总数359359* *100 %100 %100 %100 %390390* *100 %100 %100 %100 %251251* *100 %100 %100 %100 %114114* *100 %100 %100 %100 % * 共6例样本检测结果不一致，RIBA结果为阴性或不确定，计统计时予以剔除。 研究结果预留干扰样本干扰样本类型： HBV HBV，HCVHCV，H

28、IVHIV，EBVEBV，自身免疫病，淋巴瘤，多发性骨髓瘤，其他肿瘤，妊娠 Elecsys vs. ArchitectElecsys vs. Architect 仅在多发性骨髓瘤样本中发现： Elecsys: 1FP Architect: 1FPElecsys vs. ELISA-1Elecsys vs. ELISA-1 仅在HIV和肿瘤样本中发现： Elecsy: 3FP ELISA: 1FPElecsys vs. ELISA-2Elecsys vs. ELISA-2 仅在HBV和HIV样本中发现： ELISA: 1FP/1FN各组共收集920920例干扰样本，仅出现8 8例假阳或假阴结果，

29、基本无干扰 * * FN: false negative FP: false positiveFN: false negative FP: false positive 研究结果预留“临界”样本* * Elecsys Elecsys 在所有比对组”临界”样本中的假阳性和假阴性结果更少 Elecsys vs. ArchitectElecsys vs. ArchitectElecsys vs. ELISA-1Elecsys vs. ELISA-1Elecsys vs. ELISA-2Elecsys vs. ELISA-2结果区间样本数ElecsysElecsysArchitectArchitect

30、样本数ElecsysElecsysELISA-1ELISA-1样本数ElecsysElecsysELISA-2ELISA-2 1.0=1.0 =1.0 706 FP6 FP28 FP28 FP44441010 FP FP19 FP19 FP9 92 FP2 FP3 FP3 FP 总数72726 FP6 FP28 FP28 FP717115 FP15 FP19FP/2FN19FP/2FN15153 FP3 FP3 FP3 FP * FN: false negative FP: false positive* * 临界样本（检测结果出现不一致结果可能性较大的区间）： Architect Archi

31、tect：0.9 COI 50.9 COI 5 ELISA ELISA：0.75 COI 30.75 COI 3 国产化学发光法：0.9 COI 50.9 COI 5具有最佳的灵敏度与特异性灵敏度为100% （MCE结果）特异性为99.88（MCE结果）有效检出不同分期的梅毒感染即用型试剂即用型试剂18 分钟出检测结果分钟出检测结果仅需仅需10 ml 样本量样本量高精密度室间、仪器间、批内、批间精密度高无灰区准确区分样本，无需重测安全安全高效高效可靠可靠Elecsys Syphilis免疫检测降低确诊试验需求优化工作流程较高的血清转换特异性降低传播风险提高检测速度提高效率，节省成本n 梅毒流行

32、病学简介梅毒流行病学简介n 梅毒实验室检测流程梅毒实验室检测流程n 罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果n梅毒实验室检测策略梅毒实验室检测策略主要内容梅毒实验室检测策略初筛试验：初筛试验：EIA/TPPA(TPHA)EIA/TPPA(TPHA)46CLIACLIA+ +/EIA/EIA+ +/TPPA(TPHA)/TPPA(TPHA)- - 或或CLIACLIA+ +/ /EIAEIA+ +/TPPA(TPHA)/TPPA(TPHA)- -CLIACLIA+ +/EIA/EIA+ +/TPPA(TPHA)/TPPA(TPHA)+ +RPR TiterRPR Titer确

33、认试验：确认试验：IgG immunoblotIgG immunoblotanti-treponemal anti-treponemal IgM testIgM test梅毒排除梅毒排除RPR Titer 1:32RPR Titer 1:32RPR Titer 1:32梅毒活动期梅毒活动期不能排除梅毒活动期不能排除梅毒活动期+ + +- - -European guideline on the management European guideline on the management of syphilis 2014of syphilis 2014梅毒实验室检测策略n方法选择依据方法选择依据n敏感性、特异性（试剂评估）敏感性、特异性（试剂评估）n操作流程（可及性）操作流程（可及性）n试剂的价格、结果时间（可接收性）试剂的价格、结果时间（可接收性）47初筛初筛目的和方法选择目的和方法选择规范化梅毒实验室检测要求n 根据目的选择检测方法及检测策略。根据目的选择检测方法及检测策略。n 可采用任何一类梅毒血清学检测方法作可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验为筛查试验。非梅毒螺旋体抗原