酶促反应动力学实验---第一小组

1、酶促反应动力学实验实验目的实验目的通过完成一定的实验方案设计，以分析研究各种因素对酶促反应速率的影响，学习鉴定温度，抑制剂等影响酶促反应速率的方法和了解测定酶的KM值和VMAX值的方法。（一）温度对于唾液淀粉酶活性的影响（一）温度对于唾液淀粉酶活性的影响1.1.实验原理实验原理酶作为生物催化剂，在酶促反应开始时反应速率随温度升高而增快，达到最大反应速率时的温度称为某种酶的最适温度。达到最适温度后，随着温度的升高酶促反应速率下降。测定酶活性在最适温度下进行。本实验以唾液淀粉酶为例，利用淀粉水解过程中不同阶段的产物与碘有不同的颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在不同温度下的酶活性，并根据底物即淀粉水解的

2、快慢来判断酶活性的高低。淀粉经淀粉酶水解为葡萄糖的不同阶段，与碘试试剂作用的颜色反应如下：淀粉（蓝色）淀粉（蓝色）-紫色糊精（紫色）-红色糊精（红色）-无色糊精（无色）-麦芽糖（无色）-葡萄葡萄糖（无色糖（无色）2.2.实验实验步骤步骤 首先首先按如图所示在按如图所示在1 1到到6 6号试管中加入试剂号试管中加入试剂3.3.实验实验结果记录结果记录试管试管1 1试管试管3 3试管试管5 5褪色时间褪色时间 s s4.4.实验实验讨论讨论实际意义实际意义: :探究探究温度对酶的影响可方便提高酶活性温度对酶的影响可方便提高酶活性,延长酶活有效期延长酶活有效期.生产生产或实验中可使酶处于最适条件下能

3、提高产量和质量，或实验中可使酶处于最适条件下能提高产量和质量，也可阻止一些不利生产的酶的繁殖，而将条件提升到适合也可阻止一些不利生产的酶的繁殖，而将条件提升到适合有益酶的条件，择优或者达到两个酶都有益的条件，起到有益酶的条件，择优或者达到两个酶都有益的条件，起到协同作用，增加效益。协同作用，增加效益。琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制一、实验原理抑制剂和底物的结构相似，结合部位相同。 抑制效应与酶浓度有关，底物浓度不变时，酶活性的抑制程度随 抑制剂浓度的增加而增加；抑制剂浓度不变时，酶活性随底物浓度的增加而逐渐恢复。 琥珀酸脱氢酶的活性，在隔绝空气的条件下，可从加入的甲烯蓝的褪色情况来判断。 琥珀酸琥珀

4、酸脱氢酶脱氢酶 琥珀酸琥珀酸+ +甲烯蓝甲烯蓝 延胡索酸延胡索酸+ +甲烯白甲烯白 二.实验步骤1、酶提取液的制备：取大鼠骨骼肌适量，用冷水酶提取液的制备：取大鼠骨骼肌适量，用冷水洗洗3 3次，加入次，加入1/15MOL/L PH7.41/15MOL/L PH7.4的磷酸缓冲液，在高速的磷酸缓冲液，在高速组织捣碎机中进行捣碎，然后用纱布过滤，用干净的组织捣碎机中进行捣碎，然后用纱布过滤，用干净的烧杯收集过滤的备用。烧杯收集过滤的备用。2、取试管5支，编号，再按图所示步骤操作：酶提取酶提取液液（ml）磷酸缓磷酸缓冲液冲液（ml）0.2mol/L琥珀酸琥珀酸（ml）0.02mol/L琥珀酸琥珀酸（

5、ml）0.2mol/L丙二酸丙二酸溶液（溶液（ml）0.02mol/L丙二酸丙二酸溶液（溶液（ml）甲基蓝甲基蓝（滴）（滴）石蜡（石蜡（滴）滴）褪色时间褪色时间（分钟）（分钟）试管111.50.5_35试管2110.50.535试管3110.50.535试管4110.50.535试管511.5 0.5353、各管均在最后加入琥珀酸,并立刻将各试管溶液混匀，沿试管壁加入 液体石蜡，约0.5cm，各试管置于37C的水浴中保温，切勿摇动试管，随时观察比较各试管颜色的变化，记录蓝色消退时间。四、实验结果记录褪色时间（分钟）褪色时间（分钟）I/S试管1试管2试管3试管4试管5五、实验讨论实际意义:琥珀酸脱氢酶是唯一嵌入到线粒体内膜的酶，是线粒体内膜的一个重要部分，其它酶大多存在于线粒体的基质 ，作用于有氧呼吸过程。作为参与三羧酸循环的关键酶，琥珀酸脱氢酶是反