TS-7131-00培养基适用性检查验证方案

1、四川省府庆制药有限公司确认与验证页 码： 8文件编码： TS-7131版 本 号： 00题 目：培养基适用性检查验证方案项目负责人：验证类别：方法验证验证领导小组审查汇签：姓 名部 门职务或岗位签字日期总经理质量受权人质量部经理生产技术部经理设备动力部经理物料管理部经理质量部QA主管质量部QC主管生产技术部提取车间主任生产技术部制剂车间主任1.主题内容细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。2.适用范围本方案适用于我公司培养基适用性检查方法的验证。3.简介3.1概述：细菌、霉菌及酵母菌计数用的

2、培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。为保证营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定，故对该培养基的适用性进行验证。3.2验证依据验证依据验证与确认管理规程、验证与确认SOP、中国药典2010版一部附录 C微生物限度检查法。4.验证目的确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。部门人员姓名职责及分工质量部QC主管负责起草验证方案并组织实施，总结验证结果、起草验证报告。质量部经理负责审核验证方案及报告，负责验证工作的组织实施。确认/验证管理员负责验证工作的组织与协调。5.实施验证人员及职责6.变更和偏

3、差处理验证过程中如果出现偏差和变更，应立即通知确认与验证小组并对偏差和变更进行详细记录（参见偏差处理单，变更处理单），分析偏差产生的根本原因并提出解决方法。所有偏差和变更得到有效处理后，验证方可进入下一步骤。偏差处理单和变更处理单经过批准后其原件必须附在验证报告中。变更和偏差处理记录 本次验证无变更和偏差情况 本次验证发生变更和偏差差情况 出现阶段变更和偏差说明处理措施处理结果备注检查人/日期： 复核人/日期：7.验证内容7.1 试验材料被验证产品：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基7.2仪器设备7.2.1 LDZX-50KB立式压力蒸汽灭菌器7.2.2 BSC-1300-A2生物安全柜 7.

4、2.3 SW-CJ-1D单人净化操作台 7.2.4 SPX-250B-Z生化培养箱7.2.5 DH-400电热恒温培养箱7.2.6 Kxh-202-2A恒温干燥箱7.3 验证用培养基 名称生产厂家批号营养琼脂培养基营养肉汤培养基玫瑰红钠琼脂培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基营养琼脂对照培养基玫瑰红钠琼脂对照培养基酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基7.4验证用菌株：(第 代)验证菌株培养基培养温度培养时间（小时）大肠埃希菌营养肉汤30351824金黄色葡萄球菌营养肉汤30351824枯草芽孢杆菌营养肉汤30351824白色念珠菌改良马丁培养基23282448黑曲霉菌改良马丁琼脂培养基232857（

5、天）7.577.5培训验证方案起草人在方案批准后对本次验证相关人员进行培训，并记录在相关附件中。如果在验证中涉及到其他培训，培训记录的复印件附在验证报告中。培训内容培养基适用性检查验证方案培 训 老 师单 位是否外聘老师是 否职称或职务培训开始时间培训结束时间序 号受 训 人签 到序 号受 训 人签 到1熊丹82杨泽明93王淇104颜敏11512613714应到人数实到人数授课人意见（培训是否达到效果、对下次培训有何建议等）： 授课人签名： 日期：7.6验证方法7.6.1菌液制备 7.6.1.1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于3035培养1824

6、小时。取经3035培养1824小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-610-7约为50100cfuml的菌悬液备用。7.6.1.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于2328培养2448小时。取经2328培养2448小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5约为50100cfuml的菌悬液备用。7.6.1.3接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于2328培养57天，加入35ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9

7、%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50100cfuml的菌悬液备用。7.7菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别取1ml接种至营养琼脂培养基中，置3035培养48小时；白色念珠菌、黑曲霉分别取1ml接种至玫瑰红钠琼脂培养基，置2328培养72小时。菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表菌落计数结果（cfuml）试验次数10-5稀释10-6稀释10-7稀释123123123大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉7.8适

8、用性检查： 7.8.1.取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置3035培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置2328培养72小时，计数。7.8.2取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置3035培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置2328培养72小时，计数。 7.8.3结果见附表7.9.验证周期原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。附表：计数培养基适用性检查验证记录试验时间 年 月 日 完成时间 年 月 日验证菌株平皿号供试品组cfum