高三上课稿(限制酶)

1、高三生物备课组高三生物备课组限限 制制 酶酶现有一长度为现有一长度为1000碱基对碱基对(by）的）的DNA分子，用限制性核分子，用限制性核酸内切酶酸内切酶Eco R1酶切后得到的酶切后得到的DNA分子仍是分子仍是1000 by，用用Kpn1单独酶切得到单独酶切得到400 by和和600 by两种长度的两种长度的DNA分分子，用子，用EcoRI,Kpnl同时酶切后得到同时酶切后得到200 by和和600 by两种两种长度的长度的DNA分子。该分子。该DNA分子的酶切图谱正确的是分子的酶切图谱正确的是D思考：该题考查的内容、突破点、你的分析过程以思考：该题考查的内容、突破点、你的分析过程以及正确

2、答案分别是什么？及正确答案分别是什么？1，试题来源，试题来源:这是这是07年广东高考卷年广东高考卷2，题目立意，题目立意:考查能力考查能力（1）理解能力）理解能力 能用文字、图表以及能用文字、图表以及数学方式数学方式等多种表达形式准确地描述生物等多种表达形式准确地描述生物 学方面的内容。学方面的内容。 能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些 生物学问题进行解释、生物学问题进行解释、推理，作出合理的判断或得出正确的结推理，作出合理的判断或得出正确的结 论。论。（2）获取信息的能力）获取信息的能力 能从课外材料中能从课外材料中获

3、取相关的生物学信息，并能运用这些信息获取相关的生物学信息，并能运用这些信息， 结合所学知识解决相关的生物学问题。结合所学知识解决相关的生物学问题。3，知识连接，知识连接: 限制酶对限制酶对DNA的识别和的识别和切割切割作用（关注位点、序列和片断等）作用（关注位点、序列和片断等）4，解题的突破点及其分析过程，解题的突破点及其分析过程: 限制性酶的切割位点和片断，运用数学方法为主限制性酶的切割位点和片断，运用数学方法为主5，题目的难度系数，题目的难度系数: 稍难稍难 限制性内切酶在最近几年出现的题目较多，原来在限制性内切酶在最近几年出现的题目较多，原来在选择题中出现，但根据现在新课程的考纲，选修只

4、在选择题中出现，但根据现在新课程的考纲，选修只在选做题中出现。他们共同的特点：选做题中出现。他们共同的特点：主要与社会热点主要与社会热点基因工程紧密联系。基因工程紧密联系。限制性核酸内切限制性核酸内切酶（限制酶）酶（限制酶）概念概念发现和分布发现和分布作用部位作用部位作用特点作用特点（条件）（条件）作用作用概念概念发现发现来源来源化学本质化学本质作用作用作用特点作用特点作用部位作用部位注意点注意点微生物（细菌和霉菌）微生物（细菌和霉菌）1970年美国科学家首先从大肠杆菌中分离出了这种酶年美国科学家首先从大肠杆菌中分离出了这种酶蛋白质蛋白质特异性：识别特定的核苷酸序列；切割特定的位点特异性：识别

5、特定的核苷酸序列；切割特定的位点磷酸二酯键磷酸二酯键能够识别和切割能够识别和切割DNA分子内一小段特殊核苷酸序列的酶分子内一小段特殊核苷酸序列的酶催化作用；用于催化作用；用于DNA的切割获取目的基因和切割载体的切割获取目的基因和切割载体切割目的基因和载体要求用同一种限制性内切酶；切割目的基因和载体要求用同一种限制性内切酶；不同的限制性酶切割获得的黏性末端不一定不同，不同的限制性酶切割获得的黏性末端不一定不同，但切割点肯定不同；但切割点肯定不同；不同的不同的DNA可以用同一种限制性酶切割，同一个可以用同一种限制性酶切割，同一个DNA也可以用不同的限制性酶切割。也可以用不同的限制性酶切割。 结果结

6、果 形成黏性末端形成黏性末端1基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点的识别序列和切点是是GGATCC一，限制酶一，限制酶II的识别序列和切点是一的识别序列和切点是一GATC一。根据图示一。根据图示,判断下列操作正确的是：判断下列操作正确的是： A质粒用限制酶质粒用限制酶I切割，目的基因用限制酶切割，目的基因用限制酶II切割切割 B质粒用限制酶质粒用限制酶II切割，目的基因用限制酶切割，目的基因用限制酶I切割切割 C目的基因和质粒均用限制酶目的基因和质粒均用限制酶I

7、切割切割 D目的基因和质粒均用限制酶目的基因和质粒均用限制酶II切割切割A2.下列所示的黏性末端是由几种限制性内切酶作用产生的下列所示的黏性末端是由几种限制性内切酶作用产生的 A1种种 B2种种 C3种种 D4种种D3下面是下面是5种限制性内切酶对种限制性内切酶对DNA分子的识别序列和剪分子的识别序列和剪切位点图（切位点图（表示剪切点、切出的断面为黏性末端）：表示剪切点、切出的断面为黏性末端）：限制酶限制酶1：GATC； 限制酶限制酶2：CATG；限制酶限制酶3：GGATCC； 限制酶限制酶4：CCGCGG；限制酶限制酶5：CCAGG。请指出下列哪组表达正确请指出下列哪组表达正确A限制酶限制酶

8、2和和4识别的序列都包含识别的序列都包含4个碱基对个碱基对 B限制酶限制酶3和和5识别的序列都包含识别的序列都包含5个碱基对个碱基对C限制酶限制酶1和和3剪出的黏性末端相同剪出的黏性末端相同 D限制酶限制酶1和和2剪出的黏性末端相同剪出的黏性末端相同C限制性核酸内切限制性核酸内切酶（限制酶）酶（限制酶）概念概念发现和分布发现和分布作用部位作用部位作用特点作用特点（条件）（条件）作用作用与限制酶有关的其他知识与限制酶有关的其他知识与限制酶有关的知识与限制酶有关的知识2，与酶有关的内容（，与酶有关的内容（合成、本质、特性、影响因素合成、本质、特性、影响因素等）等）3，与，与DNA酶、解旋酶、酶、解

9、旋酶、DNA聚合酶、聚合酶、DNA连接酶连接酶等酶的等酶的 区别区别1，与基因工程有着直接的、密切的、主要的联系，与基因工程有着直接的、密切的、主要的联系（一）与其他酶的联系（一）与其他酶的联系1下图为下图为DNA分子在不同酶的作用下发生的变化，图中分子在不同酶的作用下发生的变化，图中依次表示限制性内切酶、依次表示限制性内切酶、DNA聚合酶、聚合酶、DNA连接酶、解连接酶、解旋酶作用的正确顺序是（旋酶作用的正确顺序是（ ） A B C DC2.下列各项中下列各项中a、b、c、d代表的结构正确的是代表的结构正确的是 A a-质粒质粒RNA Bb限制性外切酶限制性外切酶 Cc-RNA聚合酶聚合酶

10、Dd一目的基因一目的基因B3.关于下图关于下图DNA分子片段的说法，正确的是分子片段的说法，正确的是 A限制性内切酶可作用于限制性内切酶可作用于部位，解旋酶作用于部位，解旋酶作用于部位部位B处的碱基缺失将导致染色体结构的变异处的碱基缺失将导致染色体结构的变异C把此把此DNA放在含放在含15N的培养液中复制的培养液中复制2代，子代中含代，子代中含 15N的的DNA占占34D该该DNA的特异性表现在碱基种类和（的特异性表现在碱基种类和（AT）（）（G C）的比例上）的比例上A与限制酶有关的知识与限制酶有关的知识1，与基因工程有着直接的、密切的、主要的联系，与基因工程有着直接的、密切的、主要的联系2

11、，与酶有关的内容（合成、本质、特性、影响因素等），与酶有关的内容（合成、本质、特性、影响因素等）3，与，与DNA酶、解旋酶、酶、解旋酶、DNA聚合酶、聚合酶、DNA连接酶等酶的连接酶等酶的 区别区别4，限制性内切酶与，限制性内切酶与目的基因的插入目的基因的插入关系关系（二）限制性内切酶与目的基因的插入关系（二）限制性内切酶与目的基因的插入关系1.右图为重组质粒形成示意图。右图为重组质粒形成示意图。 将此重组质粒导入大肠将此重组质粒导入大肠杆菌，然后将大肠杆菌放在四种培养基中培养：杆菌，然后将大肠杆菌放在四种培养基中培养：a-无抗生无抗生素的培养基，素的培养基，b-含四环素的培养基，含四环素的培

12、养基，c-含氨苄青霉素的培含氨苄青霉素的培养基，养基，d-含四环素和氨苄青霉素的培养基。含重组质粒的含四环素和氨苄青霉素的培养基。含重组质粒的大肠杆菌能生长的是大肠杆菌能生长的是 A.a 和和d B.a和和c C.a和和b D.b和和c B2.质粒是基因工程中常用的运载工具，某质粒上有两种抗药基因可质粒是基因工程中常用的运载工具，某质粒上有两种抗药基因可作为标记基因，作为标记基因，a、b、c为三个可能出现的目的基因插入点，如左为三个可能出现的目的基因插入点，如左下图所示。如果用一种限制酶将目的基因和质粒处理后，再合成重下图所示。如果用一种限制酶将目的基因和质粒处理后，再合成重组质粒。将重组质粒

13、导入某高等植物受体细胞后，用含有药物的培组质粒。将重组质粒导入某高等植物受体细胞后，用含有药物的培养基筛选受体细胞，预计结果如下表。下列选项正确的是养基筛选受体细胞，预计结果如下表。下列选项正确的是A如果出现如果出现结果，说明两个抗药基因都没有被破坏，转基因实结果，说明两个抗药基因都没有被破坏，转基因实验获得成功验获得成功B如果出现如果出现结果，说明限制酶的切点在结果，说明限制酶的切点在c点，目的基因接在点，目的基因接在c点点的断口处的断口处C如果出现如果出现或或结果，说明转基因实验失败结果，说明转基因实验失败D转移到受体细胞中的转移到受体细胞中的a、b基因的遗传遵循孟德尔规律基因的遗传遵循孟

14、德尔规律含有青霉素含有青霉素的培养基的培养基含有四环素的含有四环素的培养基培养基能生长能生长能生长能生长不能生长不能生长能生长能生长能生长能生长不能生长不能生长B与限制酶有关的知识与限制酶有关的知识1，与基因工程有着直接的、密切的、主要的联系，与基因工程有着直接的、密切的、主要的联系2，与酶有关的内容（合成、本质、特性、影响因素等），与酶有关的内容（合成、本质、特性、影响因素等）3，与，与DNA酶、解旋酶、酶、解旋酶、DNA聚合酶、聚合酶、DNA连接酶等酶的连接酶等酶的 区别区别4，限制性内切酶与目的基因的插入关系，限制性内切酶与目的基因的插入关系5，与，与遗传规律遗传规律的关系的关系(三三)

15、与遗传规律的关系与遗传规律的关系 一对等位基因经某种限制性内切酶切割后形成的一对等位基因经某种限制性内切酶切割后形成的DNA片断长度存片断长度存在差异，凝胶电泳分离酶切后的在差异，凝胶电泳分离酶切后的DNA片段，与探针杂交后可显示出片段，与探针杂交后可显示出不同的带谱。根据该特性，就能将它作为标记定位在基因组的某一不同的带谱。根据该特性，就能将它作为标记定位在基因组的某一位置上。现有一对夫妇生了四个儿女，其中位置上。现有一对夫妇生了四个儿女，其中1号性状特殊（如右号性状特殊（如右图），由此可推知这四个儿女的基因型（用图），由此可推知这四个儿女的基因型（用D、d表示）正确的是表示）正确的是 A1

16、号为号为XdXd B2号为号为XDY C3号为号为XDXd D4号为号为DDD （10江苏卷）下表中列出了几种限制酶江苏卷）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈识别序列及其切割位点，圈l、圈、圈2中箭头表示相关限制中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：酶的酶切位点。请回答下列问题： （1）一个图）一个图1所示的质粒分子经所示的质粒分子经Sma 切割前后，分切割前后，分别含有别含有 个游离的磷酸基团。个游离的磷酸基团。 （2）若对图中质粒进行改造，插入的）若对图中质粒进行改造，插入的Sma酶切位点酶切位点越多，质粒的热稳定性越越多，质粒的热稳定性越 。0、2高高（3）用图中的

17、质粒和外源）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使构建重组质粒，不能使用用Sma 切割，原因是切割，原因是 。 （4）与只使用）与只使用EcoR I相比较，使用相比较，使用BamH 和和Hind 两种限制酶同时处理质粒、外源两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防的优点在于可以防止止 。Sma会破坏质粒的抗性基因、外源会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因中的目的基因质粒和含目的基因的外源质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化片段自身环化（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入段混合，并加入 酶。酶。

18、 （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。 （7）为了从）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在后在 的培养基中培养，以的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。完成目的基因表达的初步检测。蔗糖为唯一含碳营养物质蔗糖为唯一含碳营养物质DNA连接连接鉴别和筛选含有目的基因的细胞鉴别和筛选含有目的基因的细胞 （08海南卷）海南卷）3.图图为某种质粒表到载体简图，小为某种质粒表到载体简图，小箭头所指分别为限制性

19、内切酶箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，的酶切位点， ampR为青霉素抗性基因，为青霉素抗性基因，tctR 为四环素抗性基因，为四环素抗性基因，P启动子，启动子，T为终止子，为终止子，ori为复制原点。为复制原点。已知目的基因的两端分别有包已知目的基因的两端分别有包括括EcoRI、BamHI在内的多种在内的多种酶的酶切位点。酶的酶切位点。 据图回答：据图回答：（1）将含有目的基因的）将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用与质粒该表达载体分别用EcoRI酶酶切，酶切产物用连接酶进行连接后，其中由两个切，酶切产物用连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段片段之间连接形

20、成的产物之间连接形成的产物有有 、 、 三种三种 。若要从这些连接产物中分离出。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行重组质粒，需要对这些连接产物进行 。目的基因目的基因载体连接物载体连接物目的基因目的基因-目的基因连接物目的基因连接物 分离纯化分离纯化载体载体-载体连接物载体连接物（08海南卷，选做题）海南卷，选做题）3.图为某种质粒图为某种质粒表到载体简图，小箭头所指分别为限制表到载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，的酶切位点， ampR为青霉素抗性基因，为青霉素抗性基因，tctR 为四环为四环素抗性基因，素抗性基因，P启动子，启动子，T为终止子，为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的在内的