番茄斑萎病毒系统侵染我国大蒜

1、番茄斑萎病毒系统侵染我国大蒜番茄斑萎病毒系统侵染我国大蒜 1.3 TSWV的ELISA检测 选取发病明显的4株大蒜，从顶部新叶叶片取0.1 g组织，加入PBS缓冲液500 L，旋涡振荡40 s，4下8 000 g离心3 min，取上清液。接受上海恒远生物科技有限公司TSWV ELISA Kit进行检测。对比设置：取感染TSWV的本氏烟叶片作为阳性对比，接种缓冲液的健康大蒜为阴性对比。1.4 TSWV的分子生物学鉴定选取发病明显的4株大蒜，从顶部新叶叶片取01 g组织，接受TRIzol法提取总RNA。取5 L RNA作为模板，接受诺唯赞生物技术公司两步法RTPCR/qPCR试剂盒合成cDNA。体

2、系20 L： RNAasefree ddH2O 2 L，RNA模板5 L，Random hexamers 1 L，2×RT Mix 10 L，HiScript Enzyme Mix 2 L。反应程序：50 45 min;85 2 min。以扩增TSWV N基因的特异引物TSWVNF2037：5CTGCTTTYAAGCAAGTTCTGC3与TSWVNR2825：5ATCATCATGTCTAAGGTTAAGCTC3对TSWV的核衣壳蛋白N基因进行扩增8。PCR反应体系50 L：cDNA 1 L，ddH2O 33 L，5×SF Buffer 10 L，dNTPs 1 L，上下游引

3、物各2 L，Phanta SuperFidelity DNA Polymerase 1 L。反应条件为95预变性3 min;95变性10 s，50退火30 s;72延长50 s，30個循环;72延长10 min。取5 L PCR产物于1%琼脂糖凝胶电泳检测。依据凝胶成像仪的结果，用OMEGA胶回收试剂盒对PCR产物进行回收，并送生工生物工程有限公司测序。2 结果与分析2.1 接种TSWV后症状观看2.2 TSWV的ELISA检测如表1所示，经空白对比调零后，阳性对比孔平均值1.00;阴性对比孔平均值0.10;说明试验有效。大蒜样品满足OD值高于临界值CUT OFF临界值=阴性对比孔平均值+0.

4、15和I/H值2.5，说明检测的4株大蒜的叶片均呈现阳性。以上数据说明该样品可能被TSWV侵染。2.3 TSWV的RTPCR检测接受TSWV N基因的特异性引物对4株ELISA呈现阳性的大蒜叶片进行RTPCR，产物经过1%琼脂糖凝胶电泳后，显示接种TSWV的大蒜叶片扩增出大约800 bp的条带，而接种缓冲液的对比大蒜没有扩增出条带。3 商量我国的大蒜产量在全世界居于首位9，大蒜也是我国创汇最多的蔬菜产品10。病毒病是影响农作物生产的重要因素，目前尚未有根治病毒病的有效方法，主要还是以预防为主。大蒜主要实行无性生殖的生殖方式，更简单造成病毒的积存和继代传播，对病毒的抗性逐步降低，最终造成蒜种的严

5、峻退化11，进而影响大蒜的产量与质量。病毒病现已成为影响我国大蒜生产的重要因素。因此确定侵染大蒜的病毒种类对大蒜病毒病的防治和提高大蒜产量尤为重要。TSWV主要通过西花蓟马传播，TSWV的扩大与西花蓟马的分布紧密相关12。我国大部分地区都适合西花蓟马生存13，我国自2021年首次在北京地区发觉西花蓟马后14，山东、吉林、湖南、贵州等地接连报道发觉西花蓟马1518。1986年在我国南方的花生上首次发觉了TSWV19。随着西花蓟马在我国快速传播，TSWV也随着蓟马的传播而快速扩张至全国，同时TSWV对我国农作物危害的面积和程度也在增加。到目前为止，TSWV在四川、广东、北京、山东2023等地区均有发觉，这与大蒜的主产区高度重合。TSWV寄主十分广泛，包括辣椒、番茄、花生、马铃薯等农作物。由于我国的地形与气候特点，我国蔬菜生产主要集中在华北地区、长江中下游地区、四川盆地、华南地区，因此大蒜主产区往往也广泛种植有TSWV的寄主农作物，极易造成TSWV的跨物种传播。西花蓟马又是为