第4章胚胎培养

1、第第4 4章章 胚胎培养胚胎培养 大大 家家 好好 ！植物组织培养植物组织培养第第4 4章章 胚胎培养胚胎培养(3学时学时)胚胎培养胚胎培养是指将植物的胚胎与母体分离，培是指将植物的胚胎与母体分离，培养在人工的培养基上形成幼苗的过程，包括养在人工的培养基上形成幼苗的过程，包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养。养以及子房培养。第第4章章 胚胎培养胚胎培养胚培养胚培养胚乳培养胚乳培养胚珠和子房培养胚珠和子房培养本章内容本章内容l(1)掌握胚培养和胚乳培养的操作步骤；掌握胚培养和胚乳培养的操作步骤；l(2)了解胚珠培养和子房培养的操作步骤。了

2、解胚珠培养和子房培养的操作步骤。本章教学目的与要求本章教学目的与要求第第4章章 胚胎培养胚胎培养 克服远缘杂种的不育性，克服远缘杂种的不育性， 使胚胎发育不完全的植株获得后代，使胚胎发育不完全的植株获得后代， 缩短育种年限，提高育种效率。缩短育种年限，提高育种效率。第第4章章 胚胎培养胚胎培养胚胎培养的意义：胚胎培养的意义：种子的结构种子的结构胚的发育胚的发育第第4章章 胚胎培养胚胎培养第一节、胚培养胚培养：胚培养：采用人工的方法将胚从种子、子房或胚珠采用人工的方法将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，再放在无菌的条件下，让其进一步中分离出来，再放在无菌的条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的

3、过程。生长发育，以至形成幼苗的过程。第第4章章 胚胎培养胚胎培养一、培养类型一、培养类型1 1、幼胚培养、幼胚培养2 2、成熟胚培养、成熟胚培养二、培养过程：二、培养过程： 1、幼胚培养过程：、幼胚培养过程：l取子房取子房l常规表面消毒常规表面消毒l解剖镜下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。解剖镜下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。l固体培养固体培养l幼胚的发育方式：幼胚的发育方式：l 1）胚性发育；胚性发育；l 2）早熟发育；早熟发育；l 3）产生愈伤组织产生愈伤组织第一节、胚培养第一节、胚培养2、成熟胚培养过程、成熟胚培养过程-以玉米成熟胚培养为例以玉米成熟胚培养为例1）玉米种子消毒）玉米种子

4、消毒2）在黑暗条件下，将种子放在无菌湿润的含滤纸的）在黑暗条件下，将种子放在无菌湿润的含滤纸的培养皿中培育培养皿中培育6hr。3）将吸涨的种子在无菌培养皿内将胚分离出来将吸涨的种子在无菌培养皿内将胚分离出来4）无菌水冲洗）无菌水冲洗3次次5）在）在MS培养基中暗培养。培养基中暗培养。6）观察：）观察：2d出现胚根，出现胚根，3-4 d出现胚芽，出现胚芽，10d长成长成幼苗。幼苗。玉米成熟胚的培养玉米成熟胚的培养第一节、胚培养第一节、胚培养三、培养基与培养条件三、培养基与培养条件1、培养基、培养基2、培养条件：培养条件： 1 1）糖类：）糖类： 2 2）附加成分）附加成分 3 3）光照）光照 4

5、 4）培养方式：）培养方式：l 幼胚培养适于液体培养，幼胚培养适于液体培养，l 成熟胚适于固体培养成熟胚适于固体培养 第一节、胚培养第一节、胚培养四、胚培养的应用四、胚培养的应用1)1)在远缘杂交育种中在远缘杂交育种中: :克服杂种胚不能正常发育克服杂种胚不能正常发育2)2)克服珠心胚的干扰克服珠心胚的干扰, ,提高育种效率提高育种效率3)3)缩短育种周期缩短育种周期4)4)测定休眠种子的萌发率测定休眠种子的萌发率5)5)理论研究中的应用理论研究中的应用第一节、胚培养第一节、胚培养胚乳培养胚乳培养是指将胚乳从母体上是指将胚乳从母体上分离出来，在无菌的环境条件分离出来，在无菌的环境条件下培养，使

6、其生长发育形成幼下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。苗的过程。第二节、胚乳培养第二节、胚乳培养第第4章章 胚胎培养胚胎培养n胚乳外植体制备胚乳外植体制备:种子消毒种子消毒-取出胚乳取出胚乳n培养培养:WhiteWhite或或MSMS诱导培养基诱导培养基-25-2725-27- -暗或弱暗或弱光光n发育发育:诱导形成愈伤组织诱导形成愈伤组织-再分化形成胚状体或再分化形成胚状体或不定芽不定芽-生根培养生根培养-植株。植株。一、胚乳培养过程一、胚乳培养过程 胚乳培养过程胚乳培养过程胚乳胚乳胚状体发育成苗胚状体发育成苗不定芽苗不定芽苗愈伤组织愈伤组织形态发生形态发生胚乳植株染色体数目的检查胚乳植株染色

7、体数目的检查l取根尖、幼叶或愈伤组织取根尖、幼叶或愈伤组织l0.2%-0.5%秋水仙素碱溶液在秋水仙素碱溶液在25浸泡浸泡4-8hrl流水冲洗流水冲洗5-10minl卡诺氏液或卡诺氏液或FAA液固定液固定l1mol盐酸，盐酸，60 水浴水浴8-10minl染色、压片、镜检、计数染色、压片、镜检、计数二、培养基与培养条件二、培养基与培养条件培养基培养基培养条件培养条件三、胚乳再生植株的染色体倍数三、胚乳再生植株的染色体倍数l稳定型：稳定型：三倍体三倍体l畸变型：畸变型：除少数是三倍体，多数是由多种倍性除少数是三倍体，多数是由多种倍性细胞组成的嵌合体细胞组成的嵌合体四、胚乳培养的应用四、胚乳培养的

8、应用1 1、胚乳培养胚乳培养可得到三倍体植株，产生无籽果可得到三倍体植株，产生无籽果实。或加倍形成六倍体植株进行育种。实。或加倍形成六倍体植株进行育种。2 2、胚乳培养胚乳培养可得到倍性不同的愈伤组织，可可得到倍性不同的愈伤组织，可分离和筛选各种类型的非整倍体植株。分离和筛选各种类型的非整倍体植株。第三节第三节 胚珠和子房培养胚珠和子房培养一、胚珠培养一、胚珠培养定义：是指将胚珠从母体上定义：是指将胚珠从母体上分离出来，在无菌的人工环分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。育形成幼苗的过程。倒生胚珠倒生胚珠胚珠培养类型：胚珠培养类型：1、受精胚

9、珠的培养、受精胚珠的培养2、未受精胚珠的培养、未受精胚珠的培养示胚珠的位置示胚珠的位置（二）、培养基：（二）、培养基：White,Nitsch,MSWhite,Nitsch,MS（三）、胚珠的发育：三）、胚珠的发育：A A 受精胚珠：一是形成种子；二是形成愈伤组织受精胚珠：一是形成种子；二是形成愈伤组织B B 未受精胚珠：形成单倍体植株。未受精胚珠：形成单倍体植株。（一）、胚珠培养的基本过程：（一）、胚珠培养的基本过程：雌蕊与子房的类型雌蕊与子房的类型二、子房培养二、子房培养定义定义：子房培养是指将子房从子房培养是指将子房从母体上分离出来，在无菌的母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使

10、其人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。生长发育形成幼苗的过程。类型类型授粉子房的培养授粉子房的培养未授粉子房的培养未授粉子房的培养（一）子房培养的培养过程（一）子房培养的培养过程l1 1、制备外植体、制备外植体：在开花前后适宜时期取子房：在开花前后适宜时期取子房或幼花，消毒或幼花，消毒l2 2、子房培养、子房培养：固体或液体培养均可：固体或液体培养均可（二）培养基（二）培养基:N6,MSp性细胞（卵细胞、助细胞、极核、反足细性细胞（卵细胞、助细胞、极核、反足细胞）胞）-胚状体或愈伤组织胚状体或愈伤组织-单倍体植株；单倍体植株；p体细胞（珠被、子房壁）体细胞（珠被、子房壁）-胚状体或

11、愈伤胚状体或愈伤组织组织-二倍体植株；二倍体植株；（三）培养子房的发育：（三）培养子房的发育：三、胚珠和子房培养的应用三、胚珠和子房培养的应用（二）子房培养的应用（二）子房培养的应用l1 1、授粉子房培养目的授粉子房培养目的：挽救杂种胚：挽救杂种胚l2 2、未授粉子房培养目的未授粉子房培养目的：获得单倍体植株。：获得单倍体植株。（一）胚珠培养的应用（一）胚珠培养的应用l 1 1、受精胚珠培养目的受精胚珠培养目的： 一是打破种子的休眠；一是打破种子的休眠； 二是挽救胚的发育，以获得杂交种。二是挽救胚的发育，以获得杂交种。l 2 2、未受精胚珠培养目的未受精胚珠培养目的：获得单倍体植株。：获得单倍体植株。l(1)胚胎培养包括：幼胚培养、成熟胚培养、胚珠培养、胚胎培养包括：幼胚培养、成熟胚培养、胚珠培养、子房培养和胚乳培养等。子房培养和胚乳培养等。l(2)胚胎培养的意义。胚胎培养的意义。l(3)离体胚培养方法：成熟胚和幼胚培养。离体胚培养方法：成熟胚和幼胚培养。l(4)未成熟胚培养，三种不同的生长方式，