【中药药理学】实践教学

1、中 药 药 理 实 验 指 导 云南中医学院中药学院中 药 药 理 实 验 室第一章 作用于消化系统药理实验消化系统由消化道和与其相连的许多消化腺组成，消化道通过运动将消化道内容物得到混合并向消化道远端推送，消化腺通过分泌消化液消化食物，使食物被分解为小分子物质有助于吸收。统消化系统药物研究主要包括消化器官运动实验、消化器官分泌实验、抗溃疡、抗肝损伤、利胆等药理实验方法。消化器官运动实验方法分为离体消化道器官标本运动实验和在体消化道器官运动实验。离体器官标本运动实验: 一般选用兔、豚鼠和大鼠的胃、肠、胆囊等器官的肠段或肌片,在恒温及充氧的营养液中通过拉力传感器与记录仪连接,将药物直接加入浴柄槽

2、内，描记胃肠平滑肌收缩振幅、收缩频率、收缩张力的变化。在体器官运动实验:胃排空,肠推进,压敏传感器测定囊内压,贴壁传感器测定胃、肠壁平滑肌或胆囊舒缩运动,以及生物电研究消化器官电生理变化等方法。消化器官分泌实验主要通过插管或造瘘等方法收集胃液、肠液、胰液及胆汁,然后对上述消化液进行分析。胃酸测定可用酸碱滴定法或酸度计测定法,胃蛋白酶测定可用凝乳法、麦特 (Mett)毛细玻管法、hmon-Mimhy 改良法等, 糜蛋白酶测定可用分光光度法、合成多肽法等。抗溃疡实验是在建立实验性溃疡模型的基础上,观察药物对胃黏膜损伤的保护作用。引起实验性溃疡的方法分为急性溃疡与慢性溃疡两大类。急性溃疡模型有： 幽

3、门结扎性溃疡、应激性溃疡(水浸、寒冷、失血性休克)、药物诱发必型溃疡 ( 非甾体类抗炎药、组胺、利血平等) 、黏膜坏死物质型溃疡(100%乙醇、0.6N HC、25%NC)等；慢性溃疡模型有：醋酸烧灼性溃疡，热烧灼性溃疡等，使用动物多为大鼠。同时还可测定胃组织中相关活性物质的含量,如前列腺素、氨基己糖、 CAMP、5- 羟色胶、组胺、胃黏膜血液量等物质，可对药作用机制进行研究 。引起实验性肝损伤的方法有:急性中毒性肝炎、肝坏死模型： 四氯化碳肝损伤模型、扑热息痛肝损伤模型、D-半乳糖胺肝损伤模型等。脂肪肝、肝纤维化、肝硬化模型:乙硫氨酸脂肪肝模型、二甲基亚硝胺肝纤维化模型、四氯化碳反复给予肝硬

4、化模型等。阻塞性黄疸模型:一茶异硫氨酸醋或胆管结扎均可致胆汁郁积型黄疸模型。免疫性肝损伤模型:取异种或同种动物的肝提取物作为抗原免疫纯系小鼠可制备该模型。可检测的指标有血清或肝脏AST 、AIT 活性,P-450 活性,肝糖原、血清总蛋白、白蛋白含量,血NH3、胆红素浓度等。作为抗脂肪肝、肝硬化药物,还可检测肝脏胶原蛋白含量、凝血酶时间等,同时可进行病理组织学观察。利胆实验主要有正常大鼠的胆汁流量测定,离体胆囊肌片舒缩活动描记、整体动物的胆道内压测定, 由细菌造成化脓性胆管炎后对模型动物的胆汁流量、胆汁成分含量、 od 氏括约肌张力等指标进行测定,对胆石标本进行胆固醇、钙、胆红素等成分的含量测

5、定等。涉及消化系统药理实验方法研究的常见中药有理气药、温里药、补气健脾药。第一节 药物对小鼠胃肠运动的影响一、药物对小鼠胃排空的作用【目的】 学习小鼠胃排空的实验方法。观察胃动力药及健脾行气药物对胃排空功能的影响。【原理】胃排空是指胃内食糜由胃排入十二指肠的过程。 进食后近端胃可通过迷走神经调节而出现受容性舒张，起到暂时容纳与储存食物的作用，然后通过缓慢持续地收缩，压迫其内容物向胃窦方向移动，再依赖胃窦收缩及胃和十二指肠协调运动而排空。通过观察胃动力药吗丁琳及健脾行气药枳术丸对小鼠定量灌服营养性半固体糊剂20分钟后，胃全重和胃净重之差的胃内残留物重量,计算胃内残留物占所灌半固体糊的重量百分比为

6、胃内残留率，可了解药物对胃排空运动的影响。【材料】动物:小鼠,体重1822g。药品:lmg/ml吗丁琳混悬液、1g/ml枳术丸水煎剂。营养性半固体糊剂: 16g奶粉、8g葡萄糖、8g淀粉，搅拌均匀，加以蒸馏水至300ml搅拌均匀。主要器材:手术器械、电子天平、小烧杯、小鼠灌胃器。【方法】取小鼠 , 禁食不禁水18h 后,称重, 编号,随机分成三组。各组均按0.2 ml/10g体积灌胃给药，空白对照组给予等容积蒸馏水，50 min后各组均ig给予营养性半固体糊 0.6 ml/只。20min后脱颈椎处死动物，剖开腹腔，结扎胃贲门和幽门后，取胃，用滤纸拭干后称全重，然后沿胃大弯剪开胃体，洗去胃内容物

7、后拭干，称净重。以胃全重和胃净重的差值为胃内残留物重，胃内残留物重占所灌半固体糊的重量百分比为胃内残留率。胃中残留率 (%)=胃中残留物/所灌半固体糊X100%实验结束后数据作全班统计,计算各组胃中残留率的平均数 (X) 和标准差 (s), 以t检验统计法进行组间比较。【结果】将结果填入表 7-1-1 中。表 7-1-1 吗丁啉对小鼠胃排空的影响组别 剂量 (g/kg) 动物数 (n) 胃中残留率 (%)'空白对照组 吗丁琳组枳术丸组【注意事项】实验前小鼠必须严格禁食18h, 最好将小鼠置于能漏出粪便的代谢笼内。解剖分离胃体的部位应尽量仔细, 以胃内容物漏出影响实验结果。如是观察浓度较

8、大中药煎剂的作用要注意药物殘留也会影响实验结果。胃内容物的性状与化学成分均可影响胃排空和速度。【思考题】吗丁琳的主要药理作用有哪些 ? 其促进胃排空的作用机制是什么 ?从药理学的角度解释枳术丸组为什么常用于功能性消化不良的治疗？二、药物对小鼠小肠运动的影晌【目的】学习用炭未推进法测定动物小肠运动的实验方法。观察M受体阻断药阿托品和泻下药芒硝对小肠运动的影响。【原理】消化管内容物的移动速度与胃排出时间、小肠的运动及消化管内容物的流动性有关。小肠的运动受肠神经及外来神经的控制，当机械和化学的刺激作用于肠壁感受器时，可通过局部的壁内反射而引起小肠蠕动增加，而副交感神经兴奋时可增强小肠运动，交感神经兴

9、奋则产生抑制作用。利用口服炭末在肠道不被吸收的原理,以炭末作为指示剂,测定在一定时间内炭末在肠道的推进距离,可观察M受体阻断药和泻下药对小肠推进的作用。【材料】动物 : 小鼠,体重 1822g 。药品 :用含有2%阿拉伯胶的水溶液制成12%活性炭末混悬液、生理盐水、盐酸阿托品、100%芒硝水溶液。主要器材 : 手术剪、眼科慑、直尺、注射器、灌胃针。【方法】取禁食不禁水20h 的小鼠, 随机分组, 称重,编号。各给药组动物分别皮下注射阿托品(10/)，灌胃给予200%芒硝水溶液(0.2/10)，空白对照组给予等容积蒸馏水。灌胃体积均为0.2ml/10g，20 min后各组均灌胃给予10%的炭黑混

10、悬液0.6 ml/只。20min后脱颈椎处死动物，剖开腹腔，分离肠系膜，剪取上端至幽门 ,下端至回盲部的肠管，轻轻将小肠拉直，准确量取小鼠幽门至炭黑推进前沿的长度以及小鼠小肠总长，按下式计算推进百分率。炭黑推进百分率(炭未从幽门部到推进前沿的移动距离/小鼠小肠总长)×100%实验结束后数据作全班统计 , 计算各组炭末推进百分率的平均数 (X) 和标准差 (s), 以t检验统计法进行组间比较。【结果】将结果填入表 7-2-1 中。表 7-2-l 阿托品、芒硝对小鼠小肠运动作用的影响组别 剂量 (g/kg) 动物数 (n)碳末移动距离() 小肠全长() 碳末推进率 (%)空白对照组盐酸阿

11、托品组芒硝水溶液组【注意事项】给药至处死动物的间隔以及处死至取出肠管的时间时间必须一致。剪取肠系膜、肠管以及拉直肠管时动作轻柔,不可用力牵拉。当因禁食不完全肠道内可能出现食物残留或与药物颜色难于分辨时,可剪破一点肠管, 挤出肠内容物,炭末为黑色颗粒状,食物等残留则为褐色软糊状,可加以区别。【思考题】中药泻下药根据泻下作用机制可分为几类 ? 芒硝属于哪一类 ?阿托品的药理作用、临床运用及不良反应是什么？三、药物对家兔在体胃肠运动的影响【目的】学习在体胃肠运动的实验方法。观察胆碱酯酶抑制新斯的明对家兔胃肠运动的影响。【原理】胃以蠕动的形式对胃内食物进行机械性消化，再将食糜排入十二指肠，小肠通过分节

12、运动与蠕动使肠内容物得到充分混合并被推向肠的远端。将肠运动换能器直接缝在胃壁或肠壁上，能把胃肠运动时平滑肌张力的变化和运动的频度客观地记录下来。【材料】动物:家兔,体重22.5 kg。药品:新斯的明。试剂: 乌拉坦溶液、生理盐水。主要器材:手术器械、胃肠运动换能器、生物机能实验系统、家兔手术固定台、注射器、纱布、缝合针线。【方法】取禁食18 h家兔，随机分组, 称重,编号。用乌拉坦按500mg/kg耳缘静脉缓慢注入，麻醉后将兔背位固定于家兔手术固定台，在兔右下腹回盲部作一34cm切口，止血后暴露回盲部45cm的回肠段，将胃肠运动换能器按与环行肠平行的方向固定于回肠。换能器的信号输入端与BL42

13、0E生物机能实验系统相连接。描记回肠收缩的胃肠运动换能器装置固定后稳定30分钟，先记录正常回肠收缩曲线，然后分别腹腔注射新斯的明(0.1/)和生理盐水，观察2小时内回肠收缩曲线的变化。比较收缩频率和收缩幅度的变化，波动次数为收缩次数，上下波动的距离为收缩幅度。【结果】将结果填入表 7-2-2 中。表 7-2-2 新斯的明对家兔在体胃肠运动的影响 收缩频率(次/分) 收缩幅度(cm)组 别 剂 量 给药前 给药后 给药前 给药后生理盐水组新斯的明组【注意事项】缝合固定胃肠运动换能器时不要过度损伤胃肠管。手术以钝性分离为主，避免出血过多。【思考题】 在体实验与离体实验各有什么优缺点、新斯的明的药理

14、作用及临床运用。第二节 药物抗胃溃疡作用的影响1、药物对大鼠胃黏膜的保护作用【目的】学习造成大鼠急性胃溃疡的实验方法。观察理气药木香及调和肝脾药痛泻要方对胃黏膜的保护作用。【原理】乙醇可通过减少胃黏膜中前列腺素、氨基已糖含量、降低胃黏膜血流量，减少胃黏膜跨膜电位差、破坏主细胞减少黏液分泌、引起胃黏膜微循环障碍等，从而破坏了胃黏膜屏障的完整性导致溃疡。观察药物对乙醇所致急性胃黏膜损伤程度，可了解药物对胃黏膜的保护作用。【材料】动物:大鼠 , 体重 200 250go药品:0.4/木香丙酮提取物(用5倍量丙酮浸泡木香24h, 浸泡期间振摇数次,过滤,滤液挥尽丙酮后,将剩余物用适量阿拉伯树胶及蒸镏水

15、研磨,制成所需浓度的药液 )、1.2g/ml 的痛泻要方水煎液 (炒白术4Og 、炒白苟32 g、炒陈皮 19g 、防风29g ,水煎成100ml, 纱布过滤,滤液用适量阿拉伯树胶混悬 即得)。试剂:无水乙醇、福尔马林溶液、生理盐水。主要器材:大鼠固定板、大鼠灌胃器注射器、手术剪器械、直尺。 【方法】取大鼠,禁食不禁水 24h 后随机为三组, 称重,编号。分别灌服5%阿拉伯的水溶液及受试药物，1小时后每只大鼠灌服无水乙醇(1/100)，再过1小时用CO2处死动物，形取胃，结扎贲门，由幽门注入1%的福尔马林溶液液10，结扎幽门, 再将胃浸泡于1%福尔马林溶液中10分钟, 以固定胃内外层。沿胃大弯

16、剪开胃,用自来水轻轻冲洗去胃内容物,将胃平展在玻璃板上,用棉球轻轻拭去附挂于胃黏膜上的血丝, 观察腺胃部的胃黏膜损伤程度，可见黏膜充血、水肿、纵行深褐色条索状溃疡,。将每只大鼠所有损伤长度的总和作为 该大鼠的溃疡指数。也可用打分的半定量方式表示溃疡指数:瘀血点为1分,线状痕血长度小于lmm 者为2分, 12mm 者为3分 ,34mm 者为4分,大于5mm 者为 5 分,全胃分数的总和为该鼠的溃疡指数,以下列公式计算溃疡抑制百分率和溃疡发生百分率。溃疡抑制百分率(%)溃疡=对照组溃疡指数-给药组溃疡指数/对照组溃疡指数X100%溃疡发生百分率(%)溃疡 =形成溃疡动物数/实验动物数X100%幽门

17、实验结束后作全班数据统计,计算各组溃疡抑制百分率和溃疡发生率的平均数 ( X) 和标准差 (s), 以 t 检验统计法进行组间比较。【结果】将结果填入表 7-1-1 中。表 7-1-1 木香、痛泻要方对大鼠乙醇型粘膜损伤的影响组别 剂量(g/kg) 动物数 (n) 溃疡指数 溃疡抑制率 (%) 溃疡发生率 (%)空白对照组 木香组痛泻要方组【注意事项】胃黏膜损伤程度与乙醇浓度及灌服时间有关。注入胃内的福尔马林溶液量要准确，以免影响实验结果。【思考题】胃黏膜屏障保护药有哪些？结合实验结果分析木香、痛泻要方理气及调和肝脾的药理机制。第二节 药物对大鼠胆汁流量的影晌【目的】学习收集麻醉大鼠胆汁的实验

18、方法。观察利胆药物对大鼠胆汁流量的影响。【原理】胆汁由肝细胞持续分泌，储存于胆囊，在脂肪的吸收与消化过程中起重要作用，胆汁分泌与排泄障碍可引起消化系统症状，高浓度的胆盐是强烈的致炎物质，形成早期的化学性炎症，为细菌入侵引起急性感染提供有利条件。大鼠无胆囊,其肝脏分泌的胆汁经肝管、胆总管直接进入十二指肠。通过观察利胆药去氢胆酸及理气药青皮对胆汁流量变化的影响，能客观地反应肝脏分泌胆汁的能力。【材料】动物:大鼠,雄性,体重200g以上。药品 :2%去氢胆酸纳溶液、2g/m青皮水煎液。试剂 :10% 乌拉坦溶液、生理盐水。主要器材:手术剪、眼科剪、眼科慑、胆汁引流管 ( 直径1mm塑料管)、带刻度的

19、小试管、大鼠手术固定板、注射器、纱布。【方法】取禁食不禁水12h 的大鼠, 随机分组, 称重,编号。以乌拉坦 (1g/kg)麻醉,仰位固定,开腹后在右上腹找到胃幽门部,以幽门部为标准,翻转十二指肠,即可见到白色的十二指肠乳头部,从乳头部追踪到胆总管,用眼科慑将覆盖在表面的被膜剥离少许以暴露出胆总管, 结扎下端。然后在接近十二指肠开口处的胆总管,向肝脏方向剪"V" 形小口,将胆汁引流管插入胆总管,插入引流管后可见淡黄色液体顺管流出即是胆汁,结扎固定,手术后用止血钳夹闭腹腔,以生理盐水湿润的纱布覆盖夹闭部位,稳定10分钟后,用带有刻度的小试管收集胆汁30分钟作为给药前的胆汁流量

20、,之后给药组与空白对照组由十二指肠分别给予2%去氢胆酸纳1m/100g或同容量的生理盐水,给药后每 3分钟收集胆汁1次,共 23 次,记录胆汁流量,并计算给药后胆汁流量增加百分率。胆汁流量增加百分率 (%)= (给药后胆汁流量 -给药前胆汁流量)/ 给药前胆汁流量×100%实验结束后作全班数据统计,计算各组胆汁流量增加百分率的平均数 ( X ) 和标准差(s), 以 t 检验统计法进行组间比较。中药可选 2 g /m的青皮水煎液,灌服量为lm/100g。其他方法同上。 【结果】将结果填入表 7-3-1 中。表 7-3-l 去氢胆酸纳对大鼠胆汁流量的影响组别 药前胆汁流量 (m) 药后

21、胆汁流量(m) 胆汁流量增加百分率() 30 60 90 30 60 90 空白对照组 去氢胆酸纳组【注意事项】大鼠胆总管直径仅 0.5mm1.Omm, 应选择合适的插管。由于胆汁流量的差异较大 , 故常用自身前后比较的方法。由于体内雌激素水平会影响胆汁流量及胆汁中成分的比例,最好选用雄性大鼠。巴比妥类药物可增加胆汁分泌和胆酸等物质的含量,故一般不用于该实验的动物麻醉。胆总管切口应接近十二指肠壶腹部,插管顶端应接近肝脏。 【思考题】利胆药的作用方式有哪一些 ? 分别有哪些代表药物 ?理气药治疗气滞、气逆的药理学基础是什么？第三章 中药镇痛作用的实验方法 凡能选择性地缓解或消除疼痛的药物称为镇痛

22、药(analgesics)。包括麻醉性镇痛药和非麻醉性镇痛药。 实验资料证明，许多祛风湿药，祛瘀止痛药常具有不同程度的镇痛作用。它们除在中药复方中配伍应用外，其中延胡索、秦艽、牛膝、徐长卿、防己、苍耳子、七叶莲，白屈莱(山黄连)均已制成不同剂型用于头痛、肌肉痛、关节痛、神经痛以及胃肠痉挛性疼痛。疼痛作为主观的感受和体验，是一种复杂的生理心理反应。动物实验只能间接借助由于伤害性刺激引起的痛反应作为测量标准。筛选镇痛药的方法按刺激性质可分为四大类，即热刺激法，电刺激法、机械刺激法和化学刺激法。初筛常用方法1 热刺激法 利用一定的温度刺激动物体表的某个部位，使产生疼痛反应。最常用的是小鼠热板法和大鼠

23、辐射热甩尾法。热刺激法用于筛选作用较强的镇痛药较为适宜。 小鼠热板法 原理 把小鼠放在事先加热到55C的金属盘(铁皮，铝、铜均可)上以舔后足作为“疼痛反应指标。观察给药前、后痛阈值的变化。 药品 延胡索提取物 操作方法 小鼠分为3组：（空白、阳性、给药组），给药组小鼠灌胃延胡索0.1ml/10g,30min后将恒温水浴调节至55±05C，金属盘的底部接触水面，加热后作为热刺激，用秒表记录小鼠自投入热板至出现舔后足的时间(s)作为该鼠的痛闽值。给药前先测定每只小鼠的痛闻(共测二次，以平均值不超过30s者为合格)。给药后每隔121h测定一次，连续数次，如痛阈值超过60s,即停止测试而按6

24、0s计(时间过久，易烫伤足部)。实验结束，按所测之痛阈平均值计算痛阈提高百分率。 以时间为横座标，痛阈提高百分率为纵座标，绘出镇痛作用时程曲线，以分析药物的作用强度、作用开始时间和持续时间。评价 本法简便易行，痛感指标明确易观察，对组织损伤最小，动物可反复利用，故为常用的方法之一。但对作用较弱的镇痛药不太敏感。注意点 动物体重对结果有影响，小鼠以20g左右为宜。 小鼠个体差异大，应挑选痛阈值在530s以内者为合格，不到s9或超过30s或喜跳跃者均剔除. 小鼠以雌性为好，雄性因阴囊受热后易松弛，与“热板接触而致反应过敏。 室温对实验有影响，过低小鼠反应迟钝，过高则敏感，易引起跳跃。思考题 延胡索

25、的镇痛机理及主要成分是什么。第四章 作用于心血管系统药理实验心血管系统药物研究主要包括强心、降压、抗心律失常、抗心肌缺血等药理实验方法。强心实验方法可分为离体心脏实验法和在体心脏实验法。离体心脏实验法：经典方法有斯氏法和八木氏法灌流离体蛙心或蟾蜍心脏、Langendorff法灌流哺乳类动物离体心脏，近年来，离体乳头肌实验、离体心房肌实验和体外心肌培养实验方法更为常用。在体心脏实验法：可用蛙、大鼠、兔、猫、犬的在体心脏同步观察药物对心肌收缩力、频率、节律、血压、心电图等影响。血压的测定有直接测压法(插管法)和间接测压法(大鼠尾动脉测压法、犬颈动脉皮鞘法)。降压药的研究常分为三个步骤：首先观察药物

26、对正常麻醉动物的急性降压作用：将动物麻醉后，直接测量其颈动脉或殷动脉的血压。此法简单，但由于与临床实际有距离，所以仅用于初筛。慢性实验治疗法：用高血压模型动物来观察药物的治疗作用动物的高血压模型有肾型、神经型、内分泌型和遗传性等，血压测定常采用间接测压法。此法接近临床实际情况，主要用于复试。降压作用机制研究：通过上述实验证明药物有降压作用后，近一步通过对中枢、神经节、递质、受体、血管平精肌、水盐代谢等方面试验来分析药物的作用环节。引起实验性心律失常的方法有：药物：乌头碱、哇巴因、钮盐、钙盐、氯仿、肾上腺素等。电刺激法。结扎冠状动脉法。药物用上述模型进行初筛后，再进一步应用电生理方法和心肌培养技

27、术研究药物作用的分子机制。抗心肌缺血的实验方法有：心脏和冠脉血流测定。心肌氧代谢实验。药物诱发心肌缺血实验：垂体后叶索、麦角碱、异丙肾上腺素或肾上腺素。冠状动脉结扎弓I起心肌梗死实验。心脏灌流实验。涉及心血管系统药理实验方法研究的常见中药有温里药、平肝息风药、活血化瘀药、补益药和理气药。第一节 药物对离体蛙心的作用目的学习斯氏(Straub)离体蛙心灌流法。观察药物对离体蛙心收缩强度、节律和心输出量的影响。原理强心苷在一定剂量下能直接抑制心肌细胞膜上Na+-K+-ATP酶的活性，使细胞内游离钙离子增多，产生正性肌力、负性频率作用。此作用在心力衰竭心脏更明显。动物：蛙。药品：5洋地黄溶液(或0.

28、1毒毛旋花苷G溶液)、生附子水煎醇沉液lg/ml、制附子水煎醇沉液1g/ml、四逆汤水煎醇沉液1g/ml。试剂：任氏液、低钙任氏液(其中CaCl2含量为一般任氏液的1/4)。主要器材：手术器械一套、蛙板、探针、八木氏蛙心插管、蛙心夹、铁支架、双凹夹、长柄木夹、小烧杯、滴管、棉线、生物信号采集系统(或多道生理记录仪)、张力换能器。方法取蛙或蟾蜍1只，用探针毁脑及脊髓，仰卧位固定于蛙板上。正中间剪开胸部皮肤，然后开胸，剪开心包，暴露心脏。在主动脉分叉处下穿一线，打个松结，备结扎插管之用。于主动脉分叉稍上方的左主动脉上剪一“v”形小口，将盛有任氏液的蛙心套管插入主动脉，并通过主动脉球转入左后方左心室

29、，然后将套管用线应结扎固定在套管小钩上(离体蛙心制备见图81一1)。将管内带血的任氏液吸出，以防止血块堵塞套管。心脏搏动时，可见液面随着在管内上下波动。剪断主动脉，提起心脏。于静脉窦下方将其余血管一起结扎(勿伤及或结扎静脉窦)。分离周围组织使心脏离体，并用任氏液连续换洗直至无血色。将蛙心套管固定于铁架台，用蛙心夹在心舒期夹住心尖部，连接于机械张力换能器并与生物信号采集系统相连，待收缩稳定后开动记录仪。进入“蛙心灌流”界面，选择适当的实验参数，即可进行实验。记录正常的心脏活动曲线，然后按以下顺序加药或试剂，注意观察图形的变化：换入低钙任氏液。当心脏收缩显著减弱时，向套管内加入5洋地黄溶液(或0.

30、1毒毛旋花苷G溶液)0.2ml。中药可用：生附子水煎醇沉液1g/ml、制附子水煎醇沉液1g/ml、四逆汤水煎醇沉液1g/ml，方法同上。结果剪贴或复制心脏的收缩曲线，再将具体分析平均值填人表5-1-1。表5-1-1药物对离体蛙心收缩功能的作用心跳次数（次/min）振幅（mm）图形比较情况正常低钙任氏液强心苷溶液注意事项本实验青蛙重量最好在50g以上。在整个实验过程中应保持管套内液面高度不变，以保证心脏固定的负荷。在实验过程中，基线的位置、放大倍数、描记速度应始终一致为防止血液凝固堵塞蛙心管口，可在任氏液中加入适量抗凝剂肝素。可在1000ml任氏液中加入2ml肝素注射液配制成肝素任氏液。思考题通

31、过本实验可推测强心苷具有哪些药理作用?第五章 溶血试验 原理 某些中草药注射剂，由于含有皂甙或物理，化学与生物等方面的原因，在注入血液后可产生溶血作用。也有些注射剂中含有少量鞣质等杂质，注入局部会引起胀痛，注入血液可产生血球凝聚，引起血液循环机能障碍等不良反应。因此，尤其是供静脉注射用的中草药注射剂，必须作溶血试验。一般说来，肌肉注射剂由于剂量小，肌注后逐渐吸收，逐渐被血液稀释，影响不大。 操作方法 (1)血球悬浮液的配制：取兔血(或羊，犬血)5lOml，加入洁净干燥的小烧杯中，并用竹签或玻棒搅拌除去纤维蛋白元。再加生理盐水lOml，摇匀，离心、倾去上清液、如此反复几次至上清液不呈红色为止。量

32、取血球，加生理盐水稀释成2的混悬液供试验用。 (2)测试方法，取试管6只，按下列顺序加入各种溶液。试管编号1 2 3 4 5 6检验柄液(m1)0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0生理盐水(m1)2.4 2.3 2.2 2.1 2.0 2.52%血球混悬液(ml)2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 第6管为对照管。将各管溶血轻轻摇匀，置37恒温箱中(或25270室温中)，观察并记录12、1、2、3h的结果。如溶液变清并染红色，即表示溶血。必要时，可用显微镜观察红血球是否破裂。如药液0.3ml，在半小时内引起溶血者即不宜作注射用。最好是药液0.3ml在3h内不引起溶血。 如有红

33、细胞凝聚的现象，可按下法进一步判定，即凝聚物在试管振摇后又能均匀分散，或将凝聚物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴生理盐水，在显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，其制品可供临床使用。若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚，其制品不宜供临床使用。第6章 益母草对大鼠子宫平滑肌的影响益母草苦泄辛散，主入血分，善于活血祛瘀调经，为妇科经产要药，又因其具有活血化瘀作用，临床广泛应用。现将其药理作用及临床应用介绍如下。用于治疗妇科病益母草为治疗妇科病的要药。妇女产后子宫内胎盘或胎膜组织残留，子宫复位不全，恶露不尽，子宫炎症等皆属于中医的血瘀范畴。益母草辛苦微寒能活血祛瘀，是治疗妇科因瘀而致

34、病的要药。益母草的活血祛瘀作用能使子宫兴奋并能加强其作用的有效成分是益母草碱。实验研究发现益母草对子宫有明显的收缩兴奋作用，如益母草煎剂作用于动物离体子宫，无论有孕无孕，早孕晚孕，或是产后子宫，浓度在1:5001:1000时皆产生兴奋作用，表现为子宫张力增强，收缩幅度增大，节律加快。临床用益母草单方或复方治疗妇产科诸瘀症，作用及疗效确切，妇女产后必服益母草煎膏已为常规。 动物：健康成年SD雌性大鼠，体重在200-240g之间，试剂与仪器(1)已烯雌酚注射液：广州明兴制药厂生产，批号920426-2，2mg/支(1ml)(2)BL-420型4道生理记录仪 药品 益母草提取液 营养液 方法将健康成

35、年(SD)大鼠实验前24小时皮下注射已烯雌酚0.2mg/100g，人工造成动情期以提高子宫平滑肌对药物敏感性。实验时颈椎脱臼处死大鼠，剖腹取出子宫，立刻置于盛洛氏液的玻璃皿中，轻轻剥离子宫上附着的脂肪组织与结缔组织。剪取约3cm长之子宫，结扎阴道端并固定于“L”型通气管小钩上，置盛有洛氏液的麦氏槽内，浴槽内温度保持在37±0.5，连续通入O2(约80个气泡/分)，另一端与肌力换通器相连，加予1g负荷，用生理记录仪记录子宫收缩活动时间常数DC，滤波(Hz)10次方，灵敏度1mv/cm，纸速0.5mm/s，待收缩平稳后记录一段正常收缩曲线(10分钟)，之后分别加入益母草提取液（由小剂量开

36、始），记录加药后每10分钟的平均子宫收缩幅度，频率及活动力(频率×幅度)，进行自身前后比较及变化率(给药后-给药前)/给药前×100%的组间比较。结果 列表比较思考题益母草兴奋子宫的成分及机理是什么？不同剂量对子宫的作用有何不同？药理学实验常用仪器及使用 BL-410微机型生物信号采集、处理系统计算机是一种现代化、高科技的自动信息分析、处理设备。利用计算机采集、处理生物信息，让计算机进入药理学实验室是科学技术发展的必然。现将对BL-410微机信号采集、处理系统（简称BL-410）作简要介绍。一、计算机在药理学实验中的应用 （一）计算机应用的一般过程 通常人们把电子的、机械的

37、、以及磁性的各种部件所组成的计算机实体称为“硬件”，如输入设备、中央处理器（CPU）、内存储器、外存储器、输出设备等。而把指挥计算机工作的各种程序和数据称为“软件”。在实际使用时，首先从输入设备键盘、鼠标、磁盘等将程序及数据送入内存，再输入让程序运行的命令，这时中央处理器就按照内存中程序的安排，从中取出数据到运算器内进行运算、处理，并将结果送回内存中保存。同时将运行的结果按照要求通过输出设备显示、打印出来，也可以送到磁盘上储存起来。由此可见，计算机是按照人们的要求来完成程序规定的任务。（二）、计算机采集、处理生物信息的基本原理首先将原始的生物机能信号，包括生物电信号和通过传感器引入的非生物电信

38、号进行放大（有些生物电信号非常微弱，比如减压神经放电，其信号为微伏级信号，如果不进行信号的前置放大，根本无法观察）、滤波（由于在生物信号中夹杂有众多声、光、电等干扰信号，比如电网的50Hz信号，这些干扰信号的幅度往往比生物电信号本身的强度还要大，如果不将这些干扰信号滤除掉，那么可能会因为过大的干扰信号致使有用的生物机能信号本身无法观察）等处理，然后对处理的信号通过模数转换进行数字化并将数字化后的生物机能信号传输到计算机内部，计算机则通过专用的生物机能实验系统软件接收从生物信号放大、采集卡传入的数字信号，然后对这些收到的信号进行实时处理，一方面进行生物机能波形的显示，一方面进行生物机能信号的存贮

39、，另外，它还要根据使用者的命令对数据进行指定的处理和分析，比如平滑滤波，微积分、频谱分析等。对于存贮在计算机内部的实验数据，生物机能实验系统软件可以随时将其调出进行观察和分析，还可以将重要的实验波形和分析数据进行打印。生物机能实验系统原理图二、BL-410微机型生物信号采集、处理系统（一）、BL-410微机型生物信号采集、处理系统的基本构成本系统由计算机、BL-410的硬件及软件组成。BL-410是一种智能化的四通道生物信号采集、处理显示系统。它具有记录仪、示波器、放大器、刺激器、心电图仪等传统的生理仪器的全部功能。该系统以中文操作Win95、Win98、Win2000为软件平台，实现全图形化

40、界面的鼠标操作。此外，它具有自动分析、参数预置、中文显示等功能。（二）、BL-410微机型生物信号采集、处理系统的功能特点（1）采用4通道12位、40KSPS采样率的A/D转换器；（2）4通道高性能、全程控的生物电信号采集放大器；（3）程控全导联心电选择；（4）记滴和耳机监听功能；（5）抗干扰能力强，工作稳定可靠；（6）低噪声、高增益范围（2-50000倍）的生物放大器，适应各种强弱不同的生物电信号；生物电放大器的增益、耦合方式（AC/DC）、时间常数（高通滤波）、高频滤波（低通滤波）、回零控制等均由程序控制；（7）最高采样率达60kHz，精度远大于传统的机械式记录仪；（8）功能完善的高性能、

41、高可靠性的电刺激器，具有电压输出（0-35V，最小步长5mV）和电流输出（0-10mA，最小步长1.0A）两种模式，使用方便；（9）为几乎所有的生理及大部分药理实验教学项目预设置了包括八大类共计32个实验模块。当您选择一个实验模块后，计算机会自动设置其所需参数，并启动数据采样，直接进入实验状态；（10）强大的数据分析功能：可对所采取的数据（积分、微分、频率直方图、频谱分析等）进行运算，并将运算结果与原始波形一起实时、同步地显示在计算机上；（11）强大的数据测量功能：可对数据进行实时测量、光标测量、选择区域测量、两点测量及区间测量，可得出生物信号的多种指标，如最大值、最小值、平均值信号频率等；（

42、12）可独立调节四个通道波形的扫描速度；（13）直观地设置增益、时间常数、滤波及程控刺激等各种参数；（14）可直观、方便设置显示波形、背景标尺以及波形背景的颜色等；（15）可对反演的数据进行原始数据导出、数据剪辑及图形剪辑。（16）可根据需要打印出单个或多个通道的实验波形及相关的实验数据。在打印时，还可进行图形比例压缩，确定打印位置。（三）、使用指南1、主界面和各部位的功能Biolap98生物信号显示与处理软件主界面（1）主界面的主要功能标题条 显示Biolap98软件的名称以及实验标题菜单条 显示所有的顶层菜单项，您可以选择其中的某一菜单项以弹出其子菜单。最底层的菜单项代表一条命令。工具条

43、一些常用命令的图形表示集合，它们使常用命令的使用变得方便与直观。控制、信息区切换按钮切换控制区和信息区控制区和信息区占据屏幕左边相同的区域时间显示窗口显示记录数据的时间在数据记录和反演时显示生物信号显示窗口显示生物信号的原始波形或数据处理后的波形，每一个显示窗口对应一个实验采样通道控制区及信息区控制区用于调节实验参数，信息区用于显示实验数据测量结果控制区和信息区采用分时复用技术使用相同屏幕资源数据查找滚动条用于实时实验和反演时快速数据查找核定位BL-410新增功能四个数据反演相关功能按钮用于反演时进行数据剪辑、图形剪辑以及波形的横向扩展和压缩BL-410新增功能状态条显示当前系统命令的执行状态

44、或一些提示信息设置刺激器参数对话框设置刺激器参数反演时消失（2）工具条的主要功能 该工具条按钮代表系统复位命令。该工具条按钮代表当前通道信号自动回零命令。该命令只对当前通道起作用。该工具条按钮代表当前通道信号直流平衡增档命令。该命令只对当前通道起作用。该工具条按钮代表当前通道信号直流平衡减档命令。该命令只对当前通道起作用。 该工具条按钮代表打开上一次实验设置命令。 该工具条按钮代表反演数据读取命令。 该工具条按钮代表打印当前通道图形命令。 该工具条按钮代表实时数据记录命令。 该工具条按钮代表启动波形显示命令。 该工具条按钮代表暂停显示命令(空格键也代表暂停显示命令）。 该工具条按钮代表停止数据

45、显示与记录命令。 该工具条按钮代表波形振幅扩大命令。 该工具条按钮代表波形振幅缩小命令。 该工具条按钮代表删除、添加背景标尺格线命令。 该工具条按钮代表启动刺激器命令。 该工具条按钮代表停止刺激器命令。 该工具条按钮代表50Hz滤波命令（禁止50Hz波形）。该命令只对当前通道起作用。 该工具条按钮代表取消50Hz滤波命令（允许50Hz波形通过），该命令只对当前通道起作用。 该工具条按钮代表添加标记命令。 该工具条按钮代表区间测量命令，该命令只对当前通道起作用。 该工具条按钮代表两点测量命令。2、操作步骤（1）开机 （2）图标选择 当进入Win98界面后，鼠标双击Pci410图标，出现BL-41

46、0封面，鼠标单击封面任何一部位，显示器进入Pci410软件主界面。（3）输入方式：输入方式1：BL-410软件的“输入信号”菜单中为需要采样与显示的通道设定相应的信号种类（如张力），然后从工具条中选择“启动波形显示”命令按钮或从“编辑”菜单中选择“启动波形显示”命令项（如需要多通道输入主要用这种方式，多通道输入时要重复以上的步骤）；输入方式2：是从“实验项目”菜单中选择自己需要的实验项目（如循环系统猫动脉血压的调节）。（4）参数调节 根据被观察信号大小及波形特点，选定要调节的通为当前通道，调节增益或滤波。具体操作：鼠标移动到参数调节区相对应的调节旋钮位置，然后单击鼠标的左键使参数值增中，单击鼠

47、标右键使参数值减小。扫描速度调节：鼠标移动到扫描速度调节区所调节通道位置。在黄色柱左边单击一次，速度减档一次；在黄色柱右边单击一次，速度增加一档。在一般情况下，不用调节这些参数。（5）记录 在BL-410软件的工具条上有一个“记录”命令按钮，其图形是一个红色的实心圆，这是一个双态命令按钮，所谓双态命令按钮是指每按下该按钮一次，其所代表的状态就改变一次，这就好像是一盏电灯的开关，这种命令按钮通过按钮的按下和弹起表示两种不同的状态。在BL-410软件中还有一些其它的双态命令按钮，比如“零速采样”和“格线显示”命令按钮等。（6）暂停 如果您想暂停一下波形观察与记录，比如，此时您正在配置新药，为了减少

48、无效数据占据磁盘空间，您可以暂停实验，只需从BL-410选择“暂停”命令按钮即可。当您完成本实验之后，您可以选择工具条上的“停止”命令按钮，这时，BL-410软件让您为本次实验的结果取一个名字以便于保存，然后结束本次实验。（7）添加实验标记 在实验过程中，您往往需要在实验波形有所变化的部分，比如加药前后添加一个实验标记，以明确实验过程中的变化，同时也为反演数据的查找留下依据。在BL-410生物机能实验系统中，有两种类型的实验标记供您选择，分别是通用实验标记和特殊实验标记。（8）刺激器的使用 一般情况下，刺激器的参数调节面板以最小化隐藏在主界面的右上方。需要使用刺激时，用鼠标单击“设备刺激器参数

49、”条的放大框，这时刺激器的参数调节面板将展开在主界面的左下方，该调节面板复盖在扫描速度调节区上。需要移动该面板的位置时，用鼠标单击“设置刺激器参数”条，该条变蓝，鼠标放置在蓝条上按住左键不放并拖动到面板需要放置的地方即可。刺激器各项参数展现在面板上，可根据实验需要调节。当需要给标本刺激时，鼠标单击工具条的“ ”启动刺激按钮。再单击时即停止刺激。（9）结束实验 当实验完成结束时，用鼠标单击工具条的“”停止键。如在实验中启动了记录，此时会弹出一个存盘对话框，提示你给刚才记录存盘的实验数据输入方文件名（文件名自定义，最长不得超过八个字符），否则，计算机将以Temp作用为当前文件名。中文输入可用键盘组

50、合键Ctrl+Shift选择合适的中文输入法进行中文文件名输入。（10）反演 反演数据的方法也非常简单，只需从工具条上选择“打开文件”命令，然后选择需要反演的文件名字，按“确定”按钮即可。对于反演的数据，您可以拖动显示窗口下面的滚动条来选择不同时间段的数据进行观察和分析。也可以通过窗口下方的滚动条和反演按钮窗口中的查找命令按钮查找您所需要的数据。（11）图形剪辑 鼠标单击返演控制调节区右下角的图形剪按钮，移动鼠标，选定图形的左上角为起点，按下鼠标左键不放，向右下方拖动鼠标，此时，屏幕上将出现一矩形虚框，框内图形就是你将要剪辑的图形。选定图形后，放开鼠标的左键，屏幕上将出现一张白色剪辑页，刚才剪

51、辑的图形位于左下角，可用鼠标移动到相应的位置，然后，按返回键，继续剪辑相应的图形。必要时可加上相应文字或对图形进行修改。（12）数据剪辑 选择数据剪辑按钮，当前通道出现一条垂直线，该线条随鼠标移动而左右移动，当线条移动到要剪辑数据的起始端时，单击鼠标左键确定，同时屏幕又出现另一直线，移动鼠标到该剪辑数据的尾端，再次用鼠标左键确定，此时，两线条之间的图形就是我们所剪辑的数据，同理可进行多次剪辑，当停止反演时可生成以cut为扩展名的文件。本文件是多次剪辑的集合。（13）实验人员及实验组号的输入 实验完成后，如需要在实验结果上打印实验人员名单及实验组号时，则需编辑输入。方法是用鼠标单击“实验人员编辑

52、”项，出现对话框，输入相应数据，按“OK”即可。（14）数据处理 区间测量 该命令用于测量当前通道图形的生意一段波形的频率、最大值、最小值、平均值以及面积等参数。按工具条上的区间测量按钮，此时通道内出现一条垂直线，线条随鼠标移动，单击鼠左键确定要测量的开始端，同时第二条直线出现，相同方法确定终端。在被测量图形段内出现一条水平线。用鼠标上下移动该直线，选定频率计数的基线，鼠标单确定，所要测定的参数自动显示在屏幕下方的信息区内，单击鼠标右键结束本次实验。 两点间测量 该命令用于测量任意通道内某个波形的最大值、最小值、及两点之间的时间及信号的变化率。方法是鼠标单击两点间测量按钮，移动鼠标将键头指向被

53、测波形的第一点单击确定，同样的道理确定第二点，此时一条随鼠标移动的红线连接在第一点与第二点之间，该信号线代表被测信号的路线轨迹。确定第二点之后，被测信号的参数就被显示出来。 单点测量 只要在实验图形显示时，在任何通道内的任何位置都可以用此方法来测量测定指定点值的大小。测量时，只需要在测量点上单击鼠标左键，所测的值则被自动显示在信息区的“当前值”栏目上。微分 如果需了解实验波形的变化，要对波形进行微分处理时，用鼠标单击菜单条的“数据处理”项，弹出下拉式菜单，按选定“微分”的选项，鼠标左键单击确定，此时将显示“微分参数设置”对话框。按实验所需的要求设定参数，然后按“OK”按钮，此时微分波形将开始显

54、示。如果对微分波形不满意，还可重复以上步骤对微分参数再次调节。 （15）打印 图形剪辑打印 当我们完成图形剪辑后，在图形剪辑页中，用鼠标单击“打印”按钮，即可由打印机打印出一张已剪辑的图形。数据图形打印 当我们在实时实验或者是反演过程中，如果需要打印图形，用鼠标单击菜单条的“打印”菜单项，弹出下拉式菜单，移动鼠标，首先选定打印比例，鼠标左键单击；重复上步骤，选定打印位置，再重复上步骤，选定打印通道。如要继续打印以后显示的图形，则鼠标单击“”启动波形显示，重复上述步骤，选定图形、打印位置和打印通道即可。（16）结束实验退出该系统 结束本次实验后，您又可以选择开始其它实验或者退出BL-410软件。退出BL-410软件的方法很简单，从“文件”菜单中选择“退出”命令或者单击窗口左上角的“关闭”命令（为一小叉按钮）均可以退出BL-410软件。当实验结束后，你可以为本次实验的数据文件取一个有意义的名字进行保存，以便于以后进行反演、分析和处理。三、生产厂家BL-410微机信号采集、处理系统由成都泰盟科技有限公司研制。 722型光栅分光光度计一、仪器的工作原理分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质具有其各自的吸收光谱，当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱