2018yfc多中心共建样本库研究方案v

1、研究者临床研究方案同意页主要研究者：我同意按照本方案设计及规定开展此项临床研究，我对本研究的实施负有责任，我同意亲自参与或监督整个临床研究的实施过程。我同意确保参与本研究的所有都明确他们应承担的义务，并确保整个研究过相关研究者能够获得准确恰当的。我将接受监督、稽查员及科技部、及总后的稽查环和监督，确保研究质量。各临床研究中心主要研究者签名：2目录临床研究方案11. 研究背景51.1 获益/风险评估52. 研究目的63. 研究设计64. 研究人群84.1 样本量84.2 研究对象84.2.1 入组标准84.2.2 排除标准84.2.3标准84.3 错误入选受试者的处理流程95. 研究步骤95.1

2、 临床数据收集概况95.2 标本收集概况95.3 样本的与销毁：115.4 样本及的调取：115.5 研究进度时间表125.6 样本质量126. 安全性13及严重不良的定义13的136.1 不良6.2 不良6.3 基于体征和症状的安全性146.4 基于样本的安全性146.5 疾病进展或之前的情况146.6 不良报告156.7 严重不良报告15与法律要求157.7.1 受试者和知情同意书157.2和. 158. 数据管理168.1 数据收集工具：168.2 样本及运送：168.3 数据安全169. 研究的监督和稽查（见合作协议） （合作协议已补充）1610. 方案修改1611. 研究结束1611

3、.1 提前终止研究1712. 发表与数据共享约定(见合作协议) （合作协议已补充）1713. 参与与任务分工17314. 参考文献1815. 附件1915.1.附件 1： 临床登记表1915.2 附件 2：生物样本留取种类2015.3 附件 3：样本标准操作流程（SOP，参考呼吸疾病生物资源库-管理规范与标准操作流程）2215.4 附件 4：技术路线31设施准备3215.5 附件 5:15.6 附件 6: 编码流程33部署实施37表4015.7 附件 7: 生物样本库15.8 附件 8: 样本15.9 附件 9: 样本销毁申请表4115.10 附件 10: 样本销毁表4215.11 附件 11

4、: 样本使用申请表4315.12 附件 12: 样本出库4415.13 附件 13: 经费预算说明4515.14 附件 14：项目组织实施协议4741.研究背景我国生物样本库尤其是呼吸系统疾病生物样本资源库的建设尚处于初级阶段, 普遍缺乏标准化操作流程、生物样本质量体系与规范化的管理系统、样本库管理无序、分散而不集中, 封闭而不开放、化管理也较为空白, 临床资料残缺不全、样本使用率不高、共享率低, 严重浪费资源库有限的空间, 并造成样本库维护的极大浪费。呼吸疾病生物资源库是一个集生物样本及临床资料数据，专为今后的研究分析而建立的一个资料完整、管理科学的临床科室与中心数据共享平台。生物资源库作为

5、基础研究与临床研究的宝贵资源，对促进医学发展、提高精准医学研究水平、推进临床诊疗技术开发进程都具有重要的现实意义。1.1 获益/风险评估本研究旨在建立国内首个相对成熟规范的全国范围呼吸系统疾病生物样本资源库，集生物样本及临床资料为一身。对所有受试者可能没有直接的益处。作为基础研究与临床研究的宝贵资源，对促进医学发展、提高精准医学研究水平、推进临床诊疗技术开发进程都具有重要的现实意义。潜在风险在样本过可能出现的并发症如哮喘急性发作、气胸、等。过的临床操作均为常规临床诊疗过必要操作，增加额外的身体，且基于研究的严密监视和观察，相关风险会降到最低。52. 研究目的2.1 总体目标：建立我国呼吸系统疾

6、病临床研究大数据及生物样本平台，实现跨中心、区域协作及交互共享，并以此平台为基础开展应用研究，为后续平台更充分的利用建立示范效应。建立规范统一、可共享的容纳 10 万例的呼吸系统疾病生物样本库。建立呼吸系统疾病生物样本、出入库化管理、质量、化共享等资源库管理的技术标准和规范，完成呼吸系统疾病临床医学研究的共享，使生物样本资源利用最大化。并利用已有平台完成示范性应用研究一例。2.2 主要目标：建立规范统一、可共享的容纳 10 万例的呼吸系统疾病生物样本库。建立呼吸系统疾病生物样本、出入库化管理、质量、化共享等资源库管理的技术标准和规范。2.3 次要目标：完成呼吸系统疾病临床医学研究的共享，使生物

7、样本资源利用最大化。利用已有平台完成示范性应用研究一例。3. 研究设计该研究是一项以住院患者为受试对象的全国性、多中心的临床应用研究。研究者根据住院患者的相关、治疗中需要进行的相关化验及检查,留取患者相关化验标本（如血清、血在不影响诊疗相关的标本留取情6浆、上下呼吸道、支和肺组织、肺泡液、胸腔积液、尿液等），及时更新患者相关临床，建立呼吸系统疾病生物资源库（10 万例）（见图 1）。建立我国呼吸系统疾病生物样本、出入库化管理、质控、化共享等资源库管理的技术标准和规范。依托于呼吸系统疾病临床医学研究中心-分中心-网络本管理标准体系对患者生物样本及临床体系，根据呼吸系统疾病生物样进行管理，建立国际

8、标准化的呼吸系统疾病生物样本库资源共享平台。技术流程详见附件 3 及呼吸疾病生物资源库-管理规范与标准操作流程。图 1. 呼吸系统疾病生物资源库与建设流程74.研究人群4.1 样本量本研究样本量计划总量为 10 万例，但是具体入组人数会根据临床情主要负责收集 500 例病况改变。退组患者将会被剔除。每家课题协作和生物样本（不少于 5000 份生物样本/每家）。例患者的临床4.2 研究对象4.2.1 入组标准1. 确诊呼吸系统疾病的住院患者。注：呼吸系统疾病气道疾病如慢性咳嗽、哮喘、COPD；肺实质病变如支扩张、支或肺、不具有传染性的肺部；间质性肺病；肺疾病如肺栓塞、肺动脉高压；睡眠呼吸；胸膜疾

9、病如气胸、胸腔积液及其他呼吸系统罕见病等。2.新增入库的样本，需取得样本提供者的知情同意。4.2.2 排除标准1.具有传染性的呼吸系统疾病患者。2.无法理解本研究、未签署知情同意书者（适用于新增入库的样本）。3.不能/不愿回答问卷、提供病历、检查报告等相关资料的患者。4.经临床医生评估不符合此研究入选标准者。4.2.3标准1.捐赠后要求撤回知情同意、停止参加研究的受试者。2.没有遵守研究工作的患者。83.住院期间确诊具有传染性疾病的患者。4.3 错误入选受试者的处理流程若受试者入组后要求撤回捐赠，可相关，并签署一份撤回捐赠的，样本库将再进行任何同工作相关的或数据收集,并随即销毁库中该受试者样本

10、, 并清除其病案资料，但在收到受试者书面要求之前已经完成的研究结果,将被保留。若受试者入组后符合排除及标准，样本库将再进行任何同工作相关的或数据收集，由专职审核后定期销毁相关样本及病案资料。5. 研究步骤生物样本库建立由区域中心和各参与共同完成。主要步骤为各受试者临床数据收集，知情同意书签署，样本收集，样本留取、处理、编码归档、运送、样本，必要时和销毁。在样本库建立过研究中心定期对各个流出现的问题进行讨论改进。5.1 临床数据收集概况各参与根据标准化收集简表收集患者临床基本如：人口学和学特征、（如症状、体征、拟诊等）、治疗（如治疗、种类、给药方式、疗程等）。亦可通过医院病历系统导出相关资料整理

11、。标准化收集表存档纸质版及各一份。患者基本登记表见附件 1。5.2 标本收集概况5.2.1 样本留取部分：9受试者住院后行常规化验不影响诊疗需要的标本留取情，留取受试者的血液、尿液、痰液标本，对不同呼吸系统疾病类型，有条件情相应增加留取肺泡液、组织、咽拭子及胸腔积液标本，具体留取标本项目见附件 2，留取标本操作流程见附件 3。5.2.2 编码归分：各参与根据样本源和样本的编码规则，在患者基本登记表上先进行编码，后根据登记表上的在生物样本库（云端）上，生成打印条码贴于对应样本管，各参与根据实际情况设置冰箱模型，使样本管实现系统的虚拟入库，同步放入冰箱。样本编码规则和样本位置编码规则（如需手动编码

12、）详见附件 6，生物样本库（云端）部署与实施方案详见附件 7。5.2.3 运送部分：有样本预处理和贮存能力的可以在本实施相关工作，并使用统一的生物样本库进行管理和登记，无需运送至区域中心；条件处理标本，但不能长期储存的医院，可将处理标本储-20 （1-2），再转运到区域中心；无条件进行样本预处理的，标本后，由指定的样本配送公司运送到同市区域中心进行处理。运送前填写样本表，并打印两份，一份装入防水袋中，随样本一起；一份由发出方保留原件存档备查；根据需要样本的具体情况，按照规定的包装要求和注意事项，选择合适的包装和样本方式，保证期间样本始终处于状态。样本表详见附件8。105.2.4 储存部分：各区

13、域中心、参与接收样本后由操作核对、于对应的存储库中。尽量减少样本从中取出和处理的时间，如需长时间取出和处理，应用干冰临时。定期进行库存核实（至少一年一次），并进行详细。5.3 样本的与销毁：销毁标本需建立专门的样本销毁申请表和样本销毁表，在受试者要求实验、样本不合格等需要销毁样本经过该中心研究负责人批准后开始执行销毁的流程。根据需要销毁的样本，在系统中核对后，确定其位置，根据系统中的找到需销毁样本的位置，取出样本后需再次核对取出样本的，确认后去掉所有的。将要销毁的样本和直接接触样本的容器放入灭菌且防生物危害的销毁袋中。将装有样本或容器的销毁袋按照医院现行的处理进行销毁。在样本销毁表中样本销毁的

14、，批准和执行销毁的日期，以及执行销毁的。被销毁的样本，其所有相关和数据应从系统中删除，相关的文本也应销毁，仅保留销毁同意的申请和样本销毁的。样本销毁申请表和样本销毁表详见附件 9 和附件 10。5.4 样本及的调取：样本出库及样本对应的相关临床的调取需经过样本研究批准，在专门建立的生物样本库和呼吸疾病生物资源库共享平台中申请相应的样本调取及出库申请和样本出库表，登记具体的调取样本类型、数量及对应的编码。各中心根据样本调取及11出库申请中样本提供受试者的临床，必要要根据申请样本出库的研究的要求提供相应更详细的。样本使用申请表和样本出库可参考附件 11 和附件 12。5.5 研究进度时间表2019

15、.12-2021.12 呼吸系统疾病患者生物样本入库，收集 500 例临床病例/每，至少 5000 份生物样本/每2019-2021 年进度安排5.6 样本质量样本库构建期间每年需进行不少的样本质量。课题研究者与区域中心对样本的临床收集、编码管理、流程等各环节进行抽查。12时间研究内容2019.12-2021.12制定呼吸系统疾病生物样本资源库管理、资源共享规范及化平台建设对各生物样本操作流程、管理进行质量检测及调研交流呼吸系统疾病患者生物样本入库及临床登记管理6. 安全性各参与的主要研究者负责确保本所有参与研究的均熟悉本部分的内容。6.1 不良及严重不良的定义不良（adverse event

16、, AE）是指接受检查后中出现的不良医学状况或导致原有医学状况的恶化的迹象，该不一定与接受的检查有关。这种不良的医学状况可以是检查异常、症状（如咳嗽、）、疾病（如哮喘急性发作）等。在临床研究中，AE 可以包含任何时候发生的不良医学状况。分级是把AE 的严重程度进行归类。基于下述基础原则的基础上运用独特的临床描述将AE 的严重程度分为 15 级：1 级 轻度，无症状或轻度症状，仅临床或发现，无需治疗；2 级 中度，最小的、局部的或非侵入性治疗指征，相关工具性日常生活活动受限；3 级 重度或重要医学意义，但立即危及生命，住院治疗或延长住院时间指征，致残，自理性日常生活活动受限；4 级 危及生命，需

17、紧急治疗；5 级。其中 3、4、5 级不良为严重不良（seveverse event,SAE）。6.2 不良的AE 的收集时间段13从受试者签署知情同意到研究或标本出院这段时间收集所有与呼吸道相关的AE。每起AE 所收集的AE 的术语；AE 的起止日期、上报的时间；AE 严重程度（分级）；AE 是否造成受试者研究；结局。6.3 基于体征和症状的安全性推荐受试者的疑诊名称、留取相关样本的操作名称、操作过及操作后 48h 内受试者出现的考虑与该操作相关的一系列体征和症状。若其他和该操作无关的体征和症状，那么应额外表示并这些体征或症状。6.4 基于样本的安全性本研究原则上不收集具有高度致病性的生物标

18、本，若样本、处理、运送过相关操作者出现可疑该疾病传染的表现，该标本被当做高致病力样本处理，处理流程详见 5.3 样本的与销毁。6.5 疾病进展或之前的情况疾病进展可被认为是受试者原发疾病的加重。它可以是所研究疾病严重程度的加重和/或疾病症状的增多。疾病进展在本研究中AE 进行收集。146.6 不良报告AE 应该在研究中心研究相关发现起的 2 个工作日内上报至研究和主要研究者备案。6.7 严重不良报告若受试者在参与研究过发生严重不良，研究者应立即对受试者采取适当的治疗措施，保障受试者的安全，在发生 24 小时内报告至研究和主要研究者备案。7.与法律要求7.1受试者和知情同意书将向患者或家属提供研

19、究目的的相关和可能发生的后果，然后从这些患者或其家属获得参加此项研究的知情同意书。签署的知情同意书的一份交与患者或患者家属保留,一份于研究者处保留。保留原件至少 5 年。7.2和患者的个人作为。所有受试者病例中获得受试者数据都将作为保存。受试者将通过他们的姓名字母缩写和研究入选时提供的编号来鉴定。受试者或其家属将了解到这些数据的性和他们保护隐私的权利，但是必须了解到这些数据将被交给课题负责或者管理机构的事实，而且还可能交给门等机构，进行检查和评价。参与医师将保留一份受试者个人资料(受试者编号和相应的受试者姓名),以便确认。158.数据管理8.1 数据收集工具：本研究数据收集工具为各合作生物样本

20、库与登记平台端口及病例报告表，各合作数据最后汇总至项目。8.2 样本及运送：受试者样本留取后，根据样本编码原则编码，于各合作。8.3 数据安全数据库设置，分明，由各合作设专人管理。相关数据的储存提取流程同样本提取流程（见本操作手册 5.1 与 5.2）9. 研究的监督和稽查（见合作协议） （合作协议已补充）10. 方案修改所有附加或的附录都是方案的组成部分。在方案经过参与和课题双方的签名表示同意后,任何人不得对研究方案的做任何修改或修订，除非这些变动或修改已经经过充分讨论,并经过了参与和课题的一致同意。任何同意的修改将被在案，修改处要有研究者及课题的签字, 并随方案一同归档。11. 研究结束在

21、研究结束后需要通知当地的委员会（IEC）。1611.1 提前终止研究课题在人力不可抗拒的情决定提前停止或中断研究,要通过书面形式将该决定通知参与研究的医师。与此类似，任何参与因故决定本研究，也应以书面形式通知课题。12. 发表与数据共享约定(见合作协议) （合作协议已补充）13. 参与与任务分工广州医科大学附属第一医院：负责呼吸系统疾病生物样本库的设计、总体实施与督导工作，连同 13 家参与（详见下表），合作负责完成样本库建设。17序号合作任务1广州医科大学附属第三医院500 病例（不少于 5000 份生物样本）2潍坊卫恩医院500 病例（不少于 5000 份生物样本）3苏州大学附属儿童医院5

22、00 病例（不少于 5000 份生物样本）4甘肃省妇幼院500 病例（不少于 5000 份生物样本）5银川市妇幼院500 病例（不少于 5000 份生物样本）6清远市人民医院500 病例（不少于 5000 份生物样本）7重庆医科大学附属儿童医院500 病例（不少于 5000 份生物样本）8大学500 病例（不少于 5000 份生物样本）9成都市第三人民医院500 病例（不少于 5000 份生物样本）10合肥市第三人民医院500 病例（不少于 5000 份生物样本）11医科大学附属第一医院500 病例（不少于 5000 份生物样本）12甘肃省人民医院500 病例（不少于 5000 份生物样本）1

23、3市人民医院500 病例（不少于 5000 份生物样本）14. 参考文献1，.呼吸疾病生物资源库管理规范与标准操作流程（SOP）2 杜莉利生物样本库的标准化建设J转化医学杂志,2016,5(6):324-326.1815. 附件15.1. 附件 1： 临床登记表详见呼吸系统疾病生物资源库与登记表19呼吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号：1.10, 版本日期 2019 年 4 月 22 日15.2 附件 2：生物样本留取种类表 1生物样本留取种类20血清血浆血细胞尿痰BALFA组织 1B组织 2唾液咽拭子胸腔积液气道疾病慢性咳嗽哮喘COPD肺实质病变支扩肺癌（非传染性）肺间质病变ILD呼

24、吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号：1.10, 版本日期 2019 年 4 月 22 日注：A、病变组织细胞涂片标本B、病变组织石蜡标本、条件，可留取相应标本21 肺肺栓塞肺动脉高压 睡眠呼吸睡眠呼吸胸膜疾病气胸胸腔积液其他罕见病呼吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号：1.0, 版本日期 2019 年 12 月 5 日15.3 附件 3：样本标准操作流程（SOP，参考呼吸疾病生物资源库-管理规范与标准操作流程）本方案提供部分样本处理操作，可于网盘链接进行：链接：提取码：kezc1.血液（血清、血浆、血细胞）(1).样本提供者取坐位，前臂直置于桌面枕垫上，选择容易固定明显血液可见的

25、肘前静脉或手背静脉，幼儿可用颈外静脉采血。系压脉带，用碘伏棉签或棉球自所选静脉穿刺处从内向外、顺时针方向皮肤，待干。拔除采血穿刺针的护套，以左手固定样本提供者前臂，右手拇指和食指持刺针，沿静脉使针头与皮肤成 30°，快速刺入皮肤，然后成 5°向前刺破静脉壁进入脉腔，见回血后将刺塞针端（用橡胶管套上的）直接刺穿入非真空采（）盖的胶塞中，血液自动流入试管内，收集 5 ml 左右的全血后，将刺塞端拔出，刺入真空采（）再收集 5 ml 左右的全血。达到采血量后，松压脉带，嘱样本提供者松拳，拔下刺塞端的采血试管。将干棉球压住穿刺孔，立即拔除穿刺针，嘱样本提供者继续按压针孔数分钟。非管

26、血液后需颠倒混匀 5 次，凝块完全形成后离心。(2).条件的情，样本库实验员应立即进行血液成分的分离处理，不超过 6 小时。如需转运后再分离，应使血液样本置于箱低温运送。(3).在血液样本离心前先分装全血样本 2 管，各 500ul。(4). 将促凝管放入冷冻离心机中， 4 、3000rpm 离心22呼吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号：1.0, 版本日期 2019 年 12 月 5 日10min，促凝离心后分为血清和血凝块，离心后分为上层血浆、中层白膜层和下层红细胞，除以旋转枪嘴方式吸取白膜层均匀分装为 2 管，每管 100ul；其余成分均予每管 500uL 分装。(5).资源库实验

27、员在“血液样本表”中非和的真空管中液体状态的简单描述，以及样本和分离的时间。血液经分离分装后需尽快置于-80冰箱或-196液氮罐中长期，血液成分分离血细胞后不超过 1 小时，血清、血浆不超过 2 小置于超低温冻存。2.痰液(1).若样本提供者有咳痰症状，能够自行咳出痰液，则建议自然咳痰。(2).晨起应用抗生素前，清洁口腔后采取，尽量咳出深处痰，留置于无菌、清洁、带盖的器皿中。(3).若患者不能排痰，可诱导痰。在诱导痰前询问样本提供者症状、肺功能结果（通气、组胺激发试验）。(4).若样本提供者 FEV1>80%，并无呼吸、气促等症状，可直接行高渗化。样本提供者吸入超声雾化 3%盐水，清水漱

28、口、擤鼻后用力咳嗽，所有口腔内容物吐至样本容器，咳痰时，样本提供者吸鼻，杜绝咳出的内容物鼻腔。每 10 分钟停止雾化，共进行 30 分钟。样本提供者雾化后10min，必要时吸入速效2 激动剂及进一步处理。(5).若样本提供者 FEV1：60-80%，并无明显呼吸、气促，可告知相关不良反应，如咳嗽，口干，恶心，胸部紧束感，喘鸣，呼吸等。诱导前 5 分钟予 200ug 沙丁胺醇吸入，后行高渗化诱导痰23呼吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号：1.0, 版本日期 2019 年 12 月 5 日建议自然咳痰，操作同前。(6).将所有痰样本置于培养皿中，使用钝头镊子挑取其中的痰栓部分（密度高、不透

29、光部分），在培养皿上拖动数次，将唾液脱掉后置于培养皿的盖子上（难以在显微镜下取材）。重复上述步骤，直至收集完所有痰栓。对含粘液部分的样本，之后应用镊子充分混合。(7).PBS 上清液收集（可溶的炎症性标志物）：将用于细胞和介质分析的痰样转至已预先称重的空的有盖离心管中，称取痰液重量，加入 8ml/克的D-PBS，反复涡旋样本 15s 分散痰液，后冰上孵育 15min，每 5min 混合一次。于 4790×g 下离心 10min，取 4 体积上清液，等分为每份试样含 0.2ml 样本，保存至少 5 份等分试样。3.痰涂片：(1).使用镊子将全部痰栓收集称重的 5mlEP 管中,天平称量

30、样本重量(下痰样本重量=Zg)。收集样本后应立即处理,如未能及时处理,样本置于 4°C 冰箱中,放置时间不得超过两个小时。(2).加入痰液重量四倍体积的 0.1%DTT。利用吸管轻柔的反复吹打数次,将痰样本混匀打散,放入冰水浴 15 分钟,每间隔 5 分钟,漩涡震荡 10 秒,共 3 次。 加入痰样本重量四倍体积的 PBS,旋涡震荡15 秒。300 目滤布(或 48um)过滤痰样本,滤液收集于 EP 管中。将细胞悬液 2000rpm(790g)4°C 离心 10min。痰上清液分装于 1.5ml管中,每管 1ml,剩余的全部放置于 1 管。存放于-80°C 中。(

31、3).根据离心后细胞沉淀(尽量吸干上清液)的体积,加入 200400l的 PBS 进行重悬(下 PBS 量=Yul),用移液枪轻柔的吸吹,将细胞沉淀打散均匀化。 (取 10ul 细胞悬液加入已有 10ul4%台盼蓝的 EP管中,混匀后,灌入牛计数板中,在 5min 内计数四个大方格(6424呼吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号：1.0, 版本日期 2019 年 12 月 5 日个中方格)内的非鳞状上皮细胞总数(标记为 N)(活细胞数(细胞包浆无色)和死细胞数(细胞包浆蓝色), 以及鳞状上皮细胞数(不分死活)。对压线的细胞计数原则(数左不数右、数上不数下),如果一个中方格内细胞平均数量超

32、过 10 个,可以用 PBS 对细胞悬液进行稀释后再灌板计数。(4). 细胞总数计数、细胞存活率及鳞状上皮细胞污染程度检测计算公式:鳞状上皮细胞比例(%)= 鳞状上皮细胞数/(鳞状上皮细胞数+非鳞状上皮细胞数)细胞存活率(%)= 活的非鳞状上皮细胞数/非鳞状上皮细胞数细胞总数(cells/g sputum) =(5×N×Y)/Z(/g)(5).利用 PBS 将剩余细胞悬液浓度调整至 0.5×106/ml,进行手工涂片或 cytospin甩片 2 张,室温风干后,10%中性甲醛固定 10min ,一过清水后风干,1 张行 HE 或染色,光镜下 400 个炎症细胞计数

33、,另 1于切片贮藏盒中,室温下贮藏于干净且干燥环境中。(6).细胞团块:取 1mL 细胞悬液转移至预先标记“痰细胞团块”的2mL RNase 和 DNase-eppendorf 试管中。如果剩余的细胞悬液多于 1mL,则采用另外试管。在 4°C 以 400 x g 转速离心5 分钟,分离出细胞团块,弃去上清液。再采用 500L RNAprotect细胞试剂悬浮细胞团块,编号贴条码入库-80下贮藏 。(7).登记样本提供者相关临床以及标本，编码贴，转运至-80冰箱保存。4.呼吸内镜标本对标本提供者上心电监测仪器并测量、生命体征，进行评估。25呼吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号

34、：1.0, 版本日期 2019 年 12 月 5 日进行镜相关术前准备。对样本提供者进行上气道麻醉、支镜给药。监测生命体征情，镜送入气道，病变，不同部位钳取 3-4 块组织，必要时局部 1：10000 肾上腺素止血。登记标本相关，标本浸泡于福尔内，常温避光干燥处保存。5.支-肺泡液(1).镜相关操作同支粘膜标本留取。准备 37蒸馏灭菌水或生理盐水用作液。在肺段局部打入 2%利多卡因 1-2ml 麻醉，纤支镜顶端紧密楔入段或亚段支开口，经活检针快速注入37 灭菌 NS ， 每次 25-50ml ， 总量 100-250ml ， 后立即用 50-100mmHg 负压吸引回收液。液体侧无菌纱布过滤除

35、痰，将液收集性液收集瓶中并总量。将液置于冰上转送。(2).由专业技术标本进行处理，加入等体积turks solution，标本离心 5 分钟（1000g 离心力，4）。按样本量将上清液分装成每管 1ml，至少保存 5 管，并至少保留 1 管 50ml BALF 原液（如样本量足够的情），于-80，沉渣进行玻片涂片，入库。6.胸腔积液(1). 性状检查(1.1).量：正常浆膜腔内均有少量的液体。病理情液体增多，其量与病变部位和病情严重程度有关，可有数毫升至上千毫升。(1.2).颜色：肉眼观察浆膜腔积液颜色,分别以淡黄色、黄色、红色、白色、绿色等描述。渗出液颜色随病情而改变,漏出液颜色较浅。正常浆

36、膜腔液为淡黄色，病理情可出现不同的颜色变化及临床意义。26呼吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号：1.0, 版本日期 2019 年 12 月 5 日(1.3).：肉眼观察用清晰透明、微浑、浑浊描述。正常浆膜腔液清晰透明，漏出液因其所含细胞、蛋白质少，且无细菌而呈清晰透明外观。(1.4).凝块：正常浆膜腔液无凝块。漏出液不易凝固或出现凝块。渗出液由于含有较多的纤维蛋白原和细菌，细胞破坏后凝血活酶，可自行凝固。(2).样本处理(2.1).穿刺后，留取中断液体于 5 支无菌管内的容器内，每管取液 2-5 ml。第一管用于细菌培养检查，第二管用于常规检查，第三管用于生化检查，第四、五管用于样本。

37、(2.2).由于积液极易出现凝快、细胞变性、细菌破坏和自溶等，所以留取样本进行常规胸穿操作，抽吸胸水，将抽取的胸水无菌操作分装成每管 2-5ml，并进行相关的登记。将标本于-80冻存。后及时送检和。(2.3).不送检的样本可加入适量乙醇以固定细胞成分，病理学检查和细胞学检查宜采用EDTA 盐，化学检查宜采用肝素。7.尿液(1).尿液标本需根据尿液种类及留取目的，使用不同避免杂质混入，此处主要阐述晨尿。样本提供者在晨起未进早餐或其他前排尿，留取中段清洁尿约 10ml，评价肾脏浓缩能力。(2).尿液后应立即送检, 标本避光运送。运送过应注意防渗漏。对于 2h 内不能完成检测的样本,宜置于 28条件

38、。(3).根据检测目标进行不同样本处理，可冷藏（4冰箱6h），27呼吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号：1.0, 版本日期 2019 年 12 月 5 日或根据具体项目添加防腐剂（可参考下表），于-20冰箱保存。(4).也可以在离心力 1000g，温度为 4离心 10 分钟，吸取分装上清 1mL，共 5 管；吸取多余上去，至剩余量约 2mL，吹打混匀，留取尿沉渣 2 管，每管 1mL。于-80冰箱储存。8.咽拭子(1).评估患者口咽部情况，有无，进食 2h 后取样。(2).无菌长棉签轻柔擦拭腭弓、咽、扁桃体上，必要时蘸无菌 NS 擦拭，将采样的拭子头部折断于 5ml运送液的螺口试管中，

39、弃去污染部分后加盖旋紧。(3).登记、转送、4保存。28类型说明用途冷藏不干扰常规检查， 4冰箱可 6 小时。有尿酸盐和磷酸盐沉淀，可依据检查的 具体项目来添加防腐剂电解质， 肌酐， 葡萄糖， 总蛋白， 白蛋白， 重金属， 筛查，激素类甲醛每 100ml 尿加入 400g/L 甲醛 0.5ml。由于甲醛具有还原性，不适合尿糖等用于管型，细胞检查；若量大， 会干扰显微镜检查硼酸干扰常规检查中的 pH。但可保护蛋白质和有形成分。每升尿液中越加入 10g，可 24 小时内抑制细菌生长，有尿酸盐沉淀蛋白质（白蛋白， 氨基酸等），尿酸，激素类甲苯每 100ml 尿加入甲苯 0.5ml。取样检验时， 应穿

40、过甲苯液层，吸取尿用于尿糖，尿蛋白的防腐盐酸不能用于尿常规，它会破坏有形成分，沉淀 溶质，杀菌。每升尿加 10ml 浓盐酸钙、磷酸盐、草酸盐、尿 17 酮类固醇、17 羟类固醇、儿茶酚等等碳酸钠不能用于尿常规，保护尿胆原尿胆原检查氟化钠不能用于尿常规，能防止糖酵解葡萄糖检测呼吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号：1.0, 版本日期 2019 年 12 月 5 日9.胸膜组织及手术组织(1).必须首先满足样本提供者治疗的需求，由病理医（和分割取走需要用作病理的组织部分，剩余组织可作为组织样本于资源库。组织样本由资源库实验员在病理医（指导下取材或直接由病理医（取材，区分肿瘤（病变）组织和对照

41、组织，并作相应的分割。取材时避免取肿瘤坏死部位和不具有代表性部位的组织。组织样本切割和处理应根据资源库样本类型的需要和病理医（的建议，在快速冰冻、RNAlater、石蜡包埋和最佳切割温度（OCT）包埋等处理方式中选择一至数种方法。资源库实验员病理医师结论和组织样本处理在样本表或生物样本库中。(2). 分割的组织块按不同处理流程进行处理，将处理完成的组织块分别装入不同的冻存容器中，并贴上新的复份样本二维码的标签，转运送往特定的贮藏室或进行长期。(3).快速冰冻组织长期于气相液氮容器中，OCT 包埋冰冻组织样本于-80冰箱，冰冻组织样本切片长期于-20冰箱。(4).石蜡包埋组织样本及切片长期于远低

42、于石蜡熔点的室温条件下，保证通风干燥和防火防虫。资源库实验员登记相关组织样本，归档。10.唾液（一）混合性唾液混合性唾液较易，但不能反映单个腺体的状况。混合唾液主要来自腮腺和颌下腺，适用于评价口腔内环境。时间最好限定于午后2-4 小时，让受检者自行收集或由医务帮助。时先用清水漱口，静息 5-10 分钟，弃去最初的唾液，将继续分泌的唾液29呼吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号：1.0, 版本日期 2019 年 12 月 5 日收集于洁净的唾液收集管内，至少 2 毫升。若液量不足，可嘱其做口舌，促进分泌。也可于舌下放一小块洗净、灭菌、干燥的脱脂纱布以吸收唾液，10min 后取出，挤出唾液于

43、洁净的唾液收集管内储存。（二）单一腺体唾液1.腮腺唾液：由口腔科医师，分导管法和吸盘法。2.颌下腺唾液：较难，常混入舌下腺液。采用吸盘法，将吸盘固定于舌下腺区收集唾液。（三）专业的唾液DNA 样本管保藏30呼吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号：1.0, 版本日期 2019 年 12 月 5 日15.4 附件4：技术路线受试者入组与招募研究告知签署知情同意书保留受试者生物样本，并收集受试者临床样本分装冻存生物样本生物样本编码入库出入库管理样本出库申请使用生物样本整合资源共享平台，开展示范性研究31临床数据来源医院His、Lis、Pacs 系统标准化收集（简表）门诊收集呼吸系统疾病生物资源

44、库与临床研究方案 版本号：1.0, 版本日期 2019 年 12 月 5 日15.5 附件 5:设施准备项目开展之前需根据样本库建设要求配备如下：32序号/材料预计数量/ 容量是否必备说明1超低温冰箱200 升空间是按至少 5000 份标本，2ml管计算，约需 3 个冻存架2冷冻离心机一台是转速可达 3000rpm，温度可设置 43电脑一台是配置建议详见附件 74条码打印机一台是型号要求：IP-300 或者 IP-51005色带1 卷是每卷可打 3 卷条码6纸2 卷是1 卷可打 3000 个样本7冻存管5000 支是按至少 5000 份标本，按实际调整冻存管规格或选择其他冻存容器8冻存盒62

45、个是按一个冻存盒 81 份标本， 按实际调整冻存盒规格或选择其他冻存容器9冻存架3 个是按一个冻存架放 25 个冻存盒，按实际调整冻存架规格或选择其他定位容器呼吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号：1.0, 版本日期 2019 年 12 月 5 日15.6 附件 6: 编码流程（一）临床病例样本编码规则样本编码由 19 位的数字和字母以及二维码共同组成，其规则和定义如下。临床病例样本编码示例C011901-100001BB001临床标本医院年份项目组样本源流水号样本类型份数(1) 共 19 位编码，分为七段定义。自依次为：第 1 位，样本来源编码（临床生物样本编码“C”、科研样本编码“R

46、”和家系样本编码“G”）；第 2-3 位，多）编码；第 4-5 位，年份编码；第 6-9 位，课题组编码；第 10-14 位，样本源流水号编码；第 15-16 位，样本类型编码；第 17-19 位，样本份数流水号。(2) 第 1 段，即第 1 位，样本来源编码，如 C 临床生物样本、R 科研样本、G 家系样本；33呼吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号：1.0, 版本日期 2019 年 12 月 5 日(3)第 2 段，即第 2-3 位，样本的来源，各的编码如下（可在样本信息>标准化数据>字典管理>样本医院中查看）；34医院编码名称01广州医科大学附属第一医院02杭州浙

47、江大学附属第二医院03上海复旦大学附属中山医院04华中科技大学附属同济医院05成都四川大学华西医院06重庆第三新桥医院07长沙中南大学湘雅医院08省人民医院09南方医科大学南方医院10中山大学孙逸仙纪念医院11广州医科大学附属第二医院12苏州大学附属儿童医院13西京医院14西安市儿童医院15甘肃省妇幼院16甘肃省人民医院17青海省妇女儿童医院18银川市妇幼院19医科大学总医院20医科大学第一附属医院21市第一人民医院22石河子大学医学院一附院23医科大学第一附属医院24中山市博爱医院25广州医科大学附属第三医院26山东潍坊卫恩医院27成都市第三人民医院28河北医科大学第一医院29内肿瘤医院30重庆医科大学附属儿童医院31顺德聚龙医院32广州医科大学附属第六医院33市人民医院34汕头市35医科大学附属盛京医院36合肥市第二人民医院37厦大附属中山医院38山东省立医院39大学中南医院40川北医学院附属医院耳鼻喉科41内人民医院42人民医院呼吸系统疾病生物资源库与临床研究方案 版本号：1.0, 版本日期 2019 年 12 月 5 日(4)第 3 段，即第 4-5 位，样本收集时的年份编码；(5)第 4 段，即第 6-9 位，该样本所在的课题组编码；(6)第 5 段，即第 10-14 位，样本提供者