实验四微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定

1、实验四实验四 微生物细胞大小的测定微生物细胞大小的测定及显微镜下直接计数及显微镜下直接计数主要实验内容：主要实验内容：1 显微镜下细菌细胞显微镜下细菌细胞大小大小的测定的测定2 血球计数板测定微生物细胞的血球计数板测定微生物细胞的数量数量 （显微镜下直接计数）（显微镜下直接计数） 一一 显微镜下细菌细胞显微镜下细菌细胞大小大小的测定的测定1 实验目的实验目的2 实验原理实验原理3 实验材料实验材料4 实验方法步骤实验方法步骤5 实验报告实验报告1 实验目的实验目的 学习用镜台测微尺校正目镜测微尺的方法学习用镜台测微尺校正目镜测微尺的方法 学习并掌握用目镜测微尺测定细菌细胞大小学习并掌握用目镜测

2、微尺测定细菌细胞大小 的方法的方法 巩固显微镜油镜的使用方法巩固显微镜油镜的使用方法2 实验原理实验原理 测定微生物细胞大小是在显微镜下利用测定微生物细胞大小是在显微镜下利用测微尺测微尺进行。进行。测微尺可分为测微尺可分为目镜测微尺目镜测微尺和和镜台测微尺镜台测微尺。目镜测微尺目镜测微尺是特是特制的圆形玻片，中央有一刻度尺（制的圆形玻片，中央有一刻度尺（100100等分等分），可放入目），可放入目镜镜筒内，用于测定细胞大小。镜镜筒内，用于测定细胞大小。镜台测微尺镜台测微尺为一载玻片，为一载玻片，上贴有圆形盖片，中央有总长度为上贴有圆形盖片，中央有总长度为1 1mm(100mm(100等分等分)

3、 )，每小格，每小格长长0.010.01mmmm (10um) (10um) 。目镜测微尺每小格大小随显微镜放大目镜测微尺每小格大小随显微镜放大倍数不同而改变，倍数不同而改变，使用目镜测微尺进行测量之前必须用镜使用目镜测微尺进行测量之前必须用镜台测微尺标定台测微尺标定，以求出在某一放大倍数下目镜测微尺每小，以求出在某一放大倍数下目镜测微尺每小格所代表的长度，然后用标定好的目镜测微尺进行测量。格所代表的长度，然后用标定好的目镜测微尺进行测量。 3 实验材料实验材料 枯草杆菌标本片枯草杆菌标本片4 实验方法步骤实验方法步骤（1）用镜台测微尺标定目镜测微尺。）用镜台测微尺标定目镜测微尺。（2）用目镜

4、测微尺测定枯草杆菌大小。）用目镜测微尺测定枯草杆菌大小。（1）用镜台测微尺标定目镜测微尺。）用镜台测微尺标定目镜测微尺。 放置目尺放置目尺：取出目镜，旋开接目镜，将目尺放在目镜镜筒：取出目镜，旋开接目镜，将目尺放在目镜镜筒的中间隔板上（有刻度的一面朝下），旋上接目镜，并插入的中间隔板上（有刻度的一面朝下），旋上接目镜，并插入镜筒。镜筒。 放置台尺放置台尺：将台尺放置于显微镜的载物台上，使刻度面朝：将台尺放置于显微镜的载物台上，使刻度面朝上。上。 标定目尺标定目尺：先用低倍镜观察，找到台尺刻度，转动目镜使：先用低倍镜观察，找到台尺刻度，转动目镜使目尺与台尺的刻度轴线相平行，移动台尺使目尺与台尺某

5、一目尺与台尺的刻度轴线相平行，移动台尺使目尺与台尺某一区间的两对刻度线完全重合，然后计数出两重合线间各自所区间的两对刻度线完全重合，然后计数出两重合线间各自所占格数，通过如下公式计算：占格数，通过如下公式计算：目尺每小格长度（目尺每小格长度（um）=两对重合刻度线之间台尺所占格数两对重合刻度线之间台尺所占格数1010 两对重合刻度线之间目尺所占格数两对重合刻度线之间目尺所占格数 标定低倍镜目尺每小格所代表的实际长度标定低倍镜目尺每小格所代表的实际长度 （2）用目镜测微尺测定枯草杆菌大小）用目镜测微尺测定枯草杆菌大小取下台尺，将染色片放在载物台上，先用低倍镜取下台尺，将染色片放在载物台上，先用低

6、倍镜观察，后换油镜观测，计量细菌观察，后换油镜观测，计量细菌长和宽长和宽所占小所占小格数，将测得格数乘以已标定的目尺每小格长，格数，将测得格数乘以已标定的目尺每小格长，即得菌体实际大小。即得菌体实际大小。测定测定2020个菌体个菌体求出平均值。求出平均值。 5 实验结果记录实验结果记录（1 1） 目镜测微尺标定结果记录目镜测微尺标定结果记录物镜物镜物镜放大倍数物镜放大倍数目镜测微尺格数目镜测微尺格数镜台测微尺格数镜台测微尺格数目镜测微尺每格目镜测微尺每格代表长度（代表长度（umum）低倍镜低倍镜10?油镜油镜1000.5um只标定低倍镜每格的长度。高倍镜和油镜学生不要标定！只标定低倍镜每格的长

7、度。高倍镜和油镜学生不要标定！（2 2） 在油镜下测量枯草杆菌大小结果记录在油镜下测量枯草杆菌大小结果记录 菌体菌体编号编号宽宽长长菌体大小菌体大小（平均值）（平均值）宽宽 长（长（umum） 目尺目尺格数格数菌体宽菌体宽（um）平均值平均值（um）目尺目尺格数格数菌体长菌体长（um）平均值平均值（um）1234520.二二 血球计数板测定微生物细胞的数量血球计数板测定微生物细胞的数量1 实验目的实验目的2 实验原理实验原理3 实验材料实验材料4 实验方法步骤实验方法步骤5 实验报告实验报告1 实验目的实验目的 掌握血球计数板测定微生物细胞数量的原理。掌握血球计数板测定微生物细胞数量的原理。

8、学习用血球计数板测定微生物细胞数量的方法。学习用血球计数板测定微生物细胞数量的方法。2 实验原理实验原理 利用血球计数板在显微镜下直接计利用血球计数板在显微镜下直接计数，是将菌悬液放入血球计数板与盖玻数，是将菌悬液放入血球计数板与盖玻片之间的计数室中，然后在显微镜下计片之间的计数室中，然后在显微镜下计数，因为计数室容积一定，所以可根据数，因为计数室容积一定，所以可根据测定值推算出菌悬液单位体积所含微生测定值推算出菌悬液单位体积所含微生物的总数量。物的总数量。 血球计数板的结构血球计数板的结构 它是特制的厚载玻片，中央区域有四条凹槽而形成三它是特制的厚载玻片，中央区域有四条凹槽而形成三个平台，中

9、间平台较宽，它又被一短横槽分隔为两部分，个平台，中间平台较宽，它又被一短横槽分隔为两部分，每一部分均有一个方格网。每一部分均有一个方格网。中间平台比两边平台低中间平台比两边平台低0.1mm0.1mm。每一方格网可分为九个大方格，每一方格网可分为九个大方格，中央大方格就是计数室中央大方格就是计数室。大大方格方格分为分为1616个中个中方格，每个方格，每个中中方格又方格又可分为可分为2525个小个小方格。每个大方格方格。每个大方格共含有共含有400400个小方格。计数室大个小方格。计数室大方格边长为方格边长为1 1mmmm，底面积为底面积为1 1mmmm2 2，高高0.10.1mm,mm,所以所以

10、每个计数室固定每个计数室固定容积为容积为0.10.1mmmm3 3。 计数方法计数方法 在计数时，用含在计数时，用含2525个中方格的计数板，要按对角线方位个中方格的计数板，要按对角线方位计数左上、左下、右上、右下等四个中方格（计数左上、左下、右上、右下等四个中方格（8080个小方格）个小方格）所含有的菌数；由此可计算得出每个小方格所含有的菌数所含有的菌数；由此可计算得出每个小方格所含有的菌数的平均值，的平均值，计数室每个小方格容积为：计数室每个小方格容积为： 0.1 0.11010-3-3400400（1 14 4）1010-6-6( (ml)ml)计算公式：计算公式：每每mlml菌液含菌数

11、菌液含菌数 = = N N K K d d N N：每个小方格含菌数平均值；每个小方格含菌数平均值； d d：菌液稀释倍数；菌液稀释倍数； K = 4 K = 410106 6 3 实验材料实验材料稀释稀释100倍倍的酵母菌菌悬液的酵母菌菌悬液即即 d=1004实验方法步骤实验方法步骤1 1 镜检计数室：镜检计数室：对计数室进行镜检，若内有污物，清洗后才能计对计数室进行镜检，若内有污物，清洗后才能计 数。数。2 2 加样液：加样液：先先在血球计数板两个计数室部位在血球计数板两个计数室部位加盖玻片加盖玻片，再用无菌，再用无菌 玻棒玻棒或滴管沾取待测或滴管沾取待测菌悬液稀释液菌悬液稀释液（已摇匀）

12、，从盖玻片（已摇匀），从盖玻片边缘边缘 滴加滴加，使菌液沿缝隙靠，使菌液沿缝隙靠毛细作用毛细作用自行进入计数室内。自行进入计数室内。静置静置5 5minmin。3 3 显微镜计数：显微镜计数：将血球计数板置于载物台上，先用将血球计数板置于载物台上，先用低倍镜低倍镜观察，后观察，后 换换高倍镜高倍镜观察计数。位于格线上菌体只计观察计数。位于格线上菌体只计上边线和左边线上上边线和左边线上的，的， 如果如果出芽酵母芽体大小达到母细胞一半时，可计作两个菌体。出芽酵母芽体大小达到母细胞一半时，可计作两个菌体。选选 择择五个视野五个视野，在每个视野内任意选择，在每个视野内任意选择五个小方格五个小方格计数，

13、计数，求出小方求出小方 格菌体数量平均值格菌体数量平均值。4 4 根据公式计算每根据公式计算每mlml菌液含菌数。菌液含菌数。5 5 测量完毕后，取下盖玻片用水冲洗血球计数板（测量完毕后，取下盖玻片用水冲洗血球计数板（严禁用硬物刷严禁用硬物刷 洗洗），晾干，放入盒内保存。），晾干，放入盒内保存。注意事项注意事项（1 1）取待测稀释菌悬液向血球计数板加样前，须将菌悬）取待测稀释菌悬液向血球计数板加样前，须将菌悬 液充分摇匀。液充分摇匀。（2 2）加样过程中，应避免将菌液滴在盖玻片上。）加样过程中，应避免将菌液滴在盖玻片上。（3 3）由于菌体在计数室中处于不同空间位置，须在不同）由于菌体在计数室中处于不同空间位置，须在不同 焦距下才能观察到，故观察时须不断调节微调，计焦距下才能观察到，故观察时须不断调节微调，计 数菌液中全部菌体，尽量避免遗漏。数