公共场所微生物检验作业指导书

1、作业指导书编号：ZQCDC/ZY02第1页共1页公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法大肠 菌群测定操作规程第1次修订实施日期：2011年5月1日1、目的依据GB/-2000公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定，熟练掌握此 规程，保证检验 结果的准确性。2适用范围本标准规定了公共场所公用毛巾、床上卧具大肠菌群的测定方法。3、责任使操作者熟悉此规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。4、内容：定义：大肠菌群指一群在37C、24h能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌痒的革兰氏阴性无芽胞杆该菌主要来源于人畜粪便，故以次作为粪便污染指标来评价公用毛巾、床上卧具的卫生质 量。仪器：见G

2、B/T- 2000中第3章。培养基和试剂：见GB/T -2000中第4章。 检验程序：见GB/T -2000中第5章。4.5.1采样方法4.5.1.1随机法:4.5.1.2涂抹法：4.5.1.3纸片法：操作步骤随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。 用测定细菌总数时采集的样品，无需重采。用灭菌生理盐水湿润5cmx 5cm大肠菌群快速测定纸片两 张，分别贴在毛 巾、床上卧具规定部位和面积范围内，约30s后取下，置于无菌塑料袋内。4.5.2检验方法4.5.2.1发酵法4.5.2. 用测定细菌总数剩余的检样，倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中。置36C± 1C培养箱 内培养24ho4.5.

3、2. 观察是否产算、产气，若有变黄和气体产生，该管推测是检验阳性。如不产酸、产 气则为大肠菌群阴性。4.5.2. 自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，转种伊红美蓝琼脂平板 上，置36C+ 1C培养箱培养1824h,然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实性试验。4.5.2. 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落12个进行染色镜检；同时接种乳糖发酵管，只36C± 1C培养24ho4.5.3纸片法将已采样的纸片置36C± 1C培养箱内培养1618h,观察结果。结果报告见GB/2000中第7章。作业指导书编号：ZQCDC/ZY03第1页共2页公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物第1

4、次修订检验方法细菌总数测定操作规程实施日期：2011年5月1日1、目的:公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物检验方法细总数测定。2、适用范围:本标准适用于公共场所浴盆、脸（脚）盆细总数的测定。3、责任：使操作者熟悉本规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。4、内容定义细菌总数：指公共场所浴盆、脸（脚）盆经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成 分、培养温度、培养时间、PH值、需氧性质等），25cmi表面上含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性 需氧菌落总数。细菌总数可作为判定公共场所浴盆、脸（脚）盆被污染程度的标志，也可 以为公共场

5、所浴 盆、脸（脚）盆消毒效果的判定和评价提供依据。仪器见GB/2000中第四章培养基和试剂431营养琼脂培养基见 GB/ 2000 中4.3.2 无菌生理盐水：分装125mL瓶供浴盆采样，50mL瓶供脸（脚）盆采 样。米样121C 20 分钟。4.4.1采样必须在无菌操作下进行，采样用具应高压灭菌4.4.2采样部位，选择在盆内侧壁二分之一至三分之一高度采样。4.4.3采样布点，浴盆可在四壁及盆底呈梅花布点，脸（脚）盆可在相对 两侧壁布点。4.4.4米样方法4.4.4.1涂抹法：用侵有无菌生理盐水的棉拭子在规格板（5cmx5cm）内来回均匀涂满整个方格，并随之转动棉试子，剪去手接触部位后，将涂抹

6、浴盆的5个棉试子一并放入125mL生 理盐水烧瓶中，涂抹脸（脚）盆的2个棉试 子一并放入50 mL生理盐水三角烧瓶中，充分振摇或在旋涡振荡器上振荡 分钟，每毫升的菌浓度相当于1平方厘米的菌量。4.4A.2斑贴法：将5cmx5cm无菌滤纸片放入灭菌平皿中，注入灭菌生理盐水1 mL片 （吸满为止），以无菌操作将滤纸片贴到采样部位，1分钟后按序取下，将贴浴盆的5片滤纸一并 放入125,mL生理盐1分钟，每毫升的菌尝试相当 于1平方厘米的菌量。检验方法4.5.1用1 mL灭菌吸管吸取样品1 mL加到灭菌平皿内，同样再吸1 mL加到作业指导书编号：ZQCDC/ZY03第2页共2页公共场所浴盆、脸（脚）盆

7、微生物检验方法细第1次修订菌总数测定操作规程实施日期：2011年5月1日平皿内。4.5.2如污染严重，可作10倍递增稀释，每递增稀释一次，换一支无 吸客，每个稀释度接种两个平皿。4.5.3稀释液移入平皿后，应及时将冷却至46 C的营养琼脂培养基（可放 置46C± 1C 水浴保温）注入平皿约15mL并转动平皿使混合均匀。待琼脂凝固后，翻转平板，置36C+ 1C温箱内培养48h.落计数方法见GB/ 2000中第8章。浴盆、脸（脚）的细数按式（1）计算:式中:总数，cfu/25 m2;编号：ZQCDC/ZY5第2页 共3页k稀释倍数;n 一平均落数;落计数的报告见GB/2000中的第9章。

8、作业指导书编号：ZQCDC/ZY04第1页共3页公共场所茶具微生物检验万法细菌第1次修订总数测定操作规程实施日期：2011年5月1日1、目的：公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定。2、适用范围：本标准适用于公共场所茶具细菌总数的测定。3、责任:使操作者熟悉本规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。4、内容定义细菌总数：指公用茶具经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成分、培养温度、培养 时间、PH值、需氧性质等），icm表面上含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只 包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。细菌总数可作为判定公用茶具被污染程度的标志，也

9、可以为公用茶具消毒效果的判定和评价 提供了依据。仪器高压蒸汽灭菌器。干热灭菌箱。培养箱：36C± 1Co冰箱。电炉。天平。灭菌。灭菌平皿：直径9cm.灭菌刻度吸管:1mL,10mL灭菌棉拭子。灭菌剪刀。放大镜。PH计或精密PH式纸。培养基和试剂4.3.1生理盐水成分：氯化钠蒸f留水1000mL制法：将氯化钠（）溶解于蒸f留水dOOOmL中，分装到试管内，每 管10mL,12IC20min 咼压灭菌。4.3.2营养琼脂检验程序细菌总数检验程序如下：作业指导书公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定操第1次修订作规程实施日期：2011年5月1日操作步骤4.5.1采样方法4.5.1.1随机抽

10、取清洗消毒后准备使用的茶具。4.5.1.2 用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在茶具内、外缘，涂沫 即高处一圈(口唇接触处)。用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分， 理盐水内，4h内送检。4.5.2检验方法4.5.2.1 将放有棉拭子的试管充分振摇。此液为X 10稀释液。4.522以无菌操作，吸取2ml检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每 可十倍递增稀释，即吸取50cm,将棉拭子放入10ml生皿1ml。如污染严重,1 ml加到9ml灭菌生理盐水中，混匀，此液为仁100稀释液。每个稀释度做两块平皿。4.5.2.3 将已融化冷至45 C左右的营养琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml,并立即旋摇 平皿。冷凝后放36C

11、± 1C培养基培养48h.菌落计数方法作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查为防遗漏，在记下平皿的菌落数 后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落，该平皿不宜计数；若 片状菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2所得 结果代表全皿菌落数。实际公用茶具菌落数，按式(1)计算:a=50式中：a细菌总数，cfu/cm 2b平均菌落数c稀释倍数。菌落计数的报告4.7.1选择平均菌落在30300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告作业指导书公共场所毛巾、床上卧具微第1次修订生物检验方法细菌总数测定实施日期：2011年5月

12、1日1、目的练掌握此规程，保证检验结果的准确性。依据GB/- 2000公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法大肠菌群测定，熟2、运用范围本标准规定了公共场所毛巾、床上卧具大肠菌群的测定方法。本标准规定了公共场所公用毛 巾、床上卧具大肠菌群的测定方法。3、责任使操作者熟悉此规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。4、内容定义细菌总数：指被检物品经过采样处理，在一定条件下培养后(培养基成分、培养温度、培养时 间、PH值、需氧性质等)，25cm2表面上含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只 包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。细菌总数可作为判定公用毛巾、床上

13、卧具被污染程度的标志，检测细菌总 数，公用毛巾、床 上卧具消毒效果的判定和评价提供依据。仪器见GB冲第4章4.2.2培养基和试剂见GB冲第5章4.2.3检验程序见GB/2000中第6章操作步骤4.3.1 米样方法4.3.1.1随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具4.3.1.2 用灭菌生理盐水湿润棉试子，在毛巾、枕巾对折后两面的各面各|2 2 2.5cm (5cmx 5cm)面积范围；床单、被单在上下两部各25cm面积范围内有顺序地来回涂抹, 用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉试子放入10mL生理盐水内，4h内送检。4.3.2 检验方法4.3.2.1将放有棉试子的试管充分振摇。此液为1： 104.3.2.2 以无菌操作，吸取2mL检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每皿1mL.如污染严 重，可十倍递增稀释，即吸取加到9mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1： 100稀释液。 每个稀释度做两块平皿。4.3.2.3将已融化冷至45C左右的营养琼脂培养基倾入平皿，每皿约15mL并立即旋摇平皿。冷凝后放入36C+1C培养箱培养48h.作业指导书公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法细菌总数测定编号：ZQCDC/ZY05第1次修订实施日期：2011年5月1日菌落计数万法作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏, 在记下各平皿的菌落数后，求出同