实验七、细胞器的分级分离ppt课件

1、细胞器的分级分别细胞器的分级分别高等植物叶绿体制备动物细胞线粒体的分别实实 验验 目目 的的学习分别细胞器的普通原理及方法实验原理实验原理 细胞内不同细胞器的比重和大小都不一样，在均匀密度介质中不同离心力下沉降的细胞器组成不同或在梯度介质中离心后分布于不同密度层，根据这一原理，差速离心法或密度梯度离心法就可将细胞内各种组分分别出来。分别流程： 破碎组织匀浆或研磨差速离心或密度梯度离心分别细胞器结果检验分析匀浆匀浆HomogenizationHomogenization低温条件下，将组织放在匀浆器中，参与等渗匀浆介质(即0.25molL蔗糖一0.003molL氯化钙)进展破碎细胞使之成为各种细胞

2、器及其包含物的匀浆。各种匀浆、研磨器各种匀浆、研磨器差速离心分级分别差速离心分级分别(Fractionation)(Fractionation)由低速到高速离心逐渐沉降细胞器。先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转速将上清液中的小颗粒沉淀下来。 Differential centrifugationHigh speedLow speed密度梯度离心密度梯度离心density gradient density gradient centrifugation method centrifugation method 亦称平衡密度梯度离心法。用超速离心机对小分子物质溶液，长时间加一个离心力场到达沉降

3、平衡，在沉降池内从液面究竟部出现一定的密度梯度。假设在该溶液里参与少量大分子溶液，那么溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降，比溶剂密度小的部分就会上浮，最后在重力和浮力平衡的位置，集聚构成大分子带状物。 Velocity (A) and Equilibrium (B) sedimentation分析分析分级分别得到的组分，可用细胞化学和生化方法进展形状和功能鉴定。一实一实 验资料验资料多叶绿菜实实 验试剂验试剂0.4M蔗糖0.35M氯化钠每升19.856g氯化钠实实 验用品验用品1、普通台式离心机：4台2、研钵：30个3、40ml小烧杯:30个4、纱布：5包5、离心管60支6、载玻片及盖玻

4、片见指点。一、叶绿体的分别一、叶绿体的分别细胞中及匀浆中的叶绿体细胞中及匀浆中的叶绿体叶绿体的分别步骤叶绿体的分别步骤1、采样、洗涤、去叶脉：最好在晴天上午10时左右选取生长正常的菠菜叶子菜心、白菜、豌豆也可洗干净，用吸水纸擦干，去柄及粗脉2、预冷：放入4冰箱预冷1h；3、研磨匀浆：称2克叶子在玻璃研钵中剪碎，先加12m1制备液，快速磨成匀浆，然后再加8m1制备液，磨匀；4、过滤：把匀浆液倒在6层沙布上过滤入小烧杯；5、离心去完好细胞、细胞核等：上述滤液转入10ml离心管，平衡后在约500rpm每分钟的转速离心2分钟，上清转入另一离心管；6、离心搜集叶绿体：上清液在2600rpm离心5分钟，弃上清液，沉淀即是叶绿体。7、悬浮叶绿体：沉淀中参与制备液适量，用吸管吹打悬浮、混匀：8、镜检分别效果9、叶绿体被膜完好度的测定 ：铁氰化钾光复原的Hill反响