MS培养基的制备--mzm

1、实验一、ms培养基的配制一、实验目的通过掌握ms培养基的制备和灭菌方法，为植物组织培养准备合适的营养条件。在配置 培养基之前，为了方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类分 别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配置培养基时，只需按预先计算好的量吸 取母液。二、实验原理培养基是离体植物细胞、组织和器官吸収营养的场所。在植物细胞的分裂和分化过程中, 需要各种营养物质，这些营养物质包折无机营养成分、有机营养成分、植物生长调节物质等。 在对植物的器官、组织和细胞进行离体培养时，只是切取植物体的一小部分，它们无法象整 体植株那样合成生反发育所需的全部物质。而自然界的植物千差

2、万别，每一种植物都有自己 独特的生理代谢过程和各自的营养需求，没有哪一种培养基能够适用于所有植物。因此，对 培养基组成成分的筛选是非常重要和必不可少的程序。目前对植物进行组培时，人们所使用的培养基只几十种，其中ms培养基应用最为广泛。 说明ms培养基的无机盐成分对许多植物种均是适宜的，它的无机盐含量较高，微量元素种 类较全，浓度也较高。三、实验试剂与仪器设备1、药品试剂：母液、蔗糖、琼脂、naoh溶液、hc1溶液、无菌水、naa、6-ba、2, 4-d等。2、仪器设备：电子天平、量筒、ph试纸、培养瓶、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺等。四、实验内容(一)母液的配制ms培养基母液方案配

3、制如下表:成分il母液的用量(mg/l)每升培养基取用量(ml)备 注大量兀素(20x)nh4no333000knos38000kh2po1340050mgsoi. 7h207400cacl2880050单独配制铁盐(200x)fesod. 7h2055605na2-edt a7460微量元素(200x)ki166h3bo31240mnsoi. h204460znsoi. 7h2017205namoo,. 2h2050cusoi. 5h205cocl2. 6出05有机元素（200x）vbi205vbe100烟酸100甘氨酸400肌醇20000具体配制步骤如21、大量元素母液的配制无机盐中大量元

4、素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大20倍，用感量为 o.olg的扭力天平，分别用50ml烧杯称量，用重蒸镭水溶解.溶解吋在每只烧杯中加入 30-40ml重蒸镭水，置于酒精灯上，加热使其溶解（注意温度不可过高，60-70°c）o溶解后， 在loooml量筒中，混合后用重蒸馅水定容到looomlo其中cacl2单独配制，而且在混合母 液时cacl应最后加入，以免形成沉淀。将配好的母液倒入细口瓶中，贴好标签保存于冰箱 中。配制培养基时，配loooml培养基取此母液sonilo2、微量元素母液的配制无机盐中微量元素母液，按照培养基配方用量的200倍，用微量0. ooolg的电光分

5、析天 平，分别用50ml烧杯称量，用重蒸傳水溶解。混合定容于100ml容量瓶中保存于冰箱中， 配制培养基时，每配制loooml培养基取此母液5ml.3、铁盐母液的配制无机盐中铁盐母液，按照培养基配方用量的200倍，用感量o.olg的扭力分析天平，分 别用50汕烧杯称量，用重蒸馄水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制loooml培养基取 此母液5mlo4、有机元素的配制无机盐中有机元素母液，按照培养基配方用量的200倍，用感m o.olg的扭力天平，分 别用50ml烧杯称量，用重蒸馆水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制loooml培养基取 此母液5ml<>5、母液澄清，无沉淀，说明

6、配制成功，可以储存起來。6、植物激素的配制0. lmg/ml的6-ba溶液：取10mg的6-ba,用少量1n的盐酸溶解，再加蒸馅水定容至 100mlo0. lmg/ml的naa：取10mg的naa可溶于热水中或用少量95%乙醇或少量1n的naoh溶 解后，再加水定容至loomlo0. lmg/ml的2,4-d溶液：取10mg的2,44）,用少量无水乙醇溶解，再加蒸镉水定容至 loomlo（二）ms培养基的配制和灭菌1、培养基的配制按照ms培养基的配方（以配制1lms培养基为例）取大烧杯加入先前配制好的母液其中 包括：大量元素50ml、微量元素5ml、铁盐5ml、有机元素5ml,植物激素各2nd

7、最后加钙 盐50ml充分混匀。再加入30g蔗糖，然后与刚溶解的琼脂（7g）混合，加入适量的去离子 水使总量定容至于1l,混匀后调ph值（调至5. 8-6. 0）。分装，每looml三角瓶装40ml, 共装25瓶。最后用组织培养用封口膜封上，扎紧后灭菌。2、培养基灭菌 将分装好的培养基放在高压灭菌锅屮，加热，待压力上升到0. 5kg/cm2时，排净冷空气, 关闭放气阀继续加热使压力稳定在1. 2kg/cm2,温度为121°c的条件下，维持15-20分钟。五、注意事项1、配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如ca"和so?, ca2 mg?*和pof起溶 解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。2、配制母液时要用蒸徭水或重蒸的水。3、药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。4、药品的称量及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。5、一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，其中维生素、氨基酸类可以 分别配制，也可以混在一起。5、母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。6、配制铁盐母液吋，fesoq