T线不均匀,划膜不均匀,解决方法poctNC膜

1、关于包被T线在NC膜上层析出来的条带不均匀，要如何解决?上下线解决方案1、上下线的主要原因序号主要分类主要原因可信度影响度1包被抗原、抗体氨基酸片段结合力过强r更可靠:最主要2包被NC膜NC膜包被结合力过强特殊次要3包被的工艺与体系1、包被液缓冲体系2、包被浓度参数3、包被干燥参数序号大致类别如何使上下线严重如何使上下线尽量避免1包被液缓冲体系包被液缓冲体系使抗体抗原与NC 膜反应过强（包被不均匀）、或者 过弱（滑线现象）适中反应包被体系2包被浓度参数浓度过高浓度适中3包被干燥参数干燥温度与时间不彻底，造成滑线 现象建议不同的项目做温度与时间 包被梯度实验，确定最佳工艺总结上表的信息可以得到下

2、面的综合性表格:分类主要分类序号可信度影响度备注1包被原料部分r 1包被抗原、抗体两者之间的结合能力、 效率过强2包被NC膜2包被的工艺1包被浓度设计包被浓度过高r 2包被宽度设计包被宽度过高3包被温度不详，建议自测本人未做进一 步深入研究！4包被湿度不详，建议自测本人未做进一 步深入研究！r 5干燥温度达到彻底的干燥，即包被 NC 膜与包被原料完全结 合，不再出现后期变强的 现象后面的一些章 节我再细说6干燥湿度7干燥时间8包被机器喷膜与滑膜我不知道。自己 验证一下3包被液体系1JK包被液系统 缓冲液体系1、缓冲液种类2、缓冲液离子强度3、缓冲液PH2JK外盐系统纠正体1、外盐种类系2、外盐

3、离子强度r 3JK保护与纠正系统1、蔗糖/海藻糖4JK去稳定性系统 （共沉剂、变性剂）1、甲醇等蛋白变性剂暂时不建议 使用5JK表活强化系统1、种类：SDSTX-100T-20未做进一步 验证2、添加比例:看项目6JK包被NC膜调线 系统1、调线系统种类:如BSA, 水解酪蛋白钠等2、添加比例r看项目我个人实事求是的说啊，我蓝色划线的地方是我大致可以想到的影响方面，其 中有一些我自己也没有尝试过，但是我先大概给大家一个框架，许多问题需要 你们自己再进一步的用自己的双手去验证！那么我们上面的表格中去掉，我们暂不考虑的参数与变量，得到以下表格:分类主要分类序号可信度影响度备注1包被原料部分1包被抗

4、原、抗体两者之间的结合能力、 效率过强调整部分2包被NC膜2包被的工艺1包被浓度设计包被浓度过高调整部分2包被宽度设计包被宽度过高3包被温度+湿度参考37 45相对湿度可能有错5干燥温度+时间参考50 ,3个小时4 -IV.参考6干燥湿度30%f对湿度7包被机器喷膜与滑膜说明一下3包被液体系1JK包被液系统 缓冲液体系1、缓冲液种类调整部分2、缓冲液离子强度3、缓冲液PH2JK外盐系统纠正体 系1、外盐种类调整部分2、外盐离子强度3JK保护与纠正系统1、蔗糖/海藻糖参考0.5%6JK包被NC膜调线 系统1、调线系统种类:如BSA, 水解酪蛋白钠等调整部分2、添加比例好，以上就是我们讲解这个解决

5、 T线不均匀的提纲，我们一个个讲一下，提供 一个思路，不见得解决问题，希望起到抛砖引玉的作用。2、包被原料部分2.1、 其实，这个是比较重要的一个部分，一般的情况下：NC膜选择粒径比较大 一些的NC膜，可以缓解，2.2、同时选择抗体的时候，如果包被抗体是多克隆抗体，该现象也会被缓解， 因为多克隆抗体与NC膜的结合表位相比单克隆要多一些，同时，即使同是单克 隆抗体，不同厂家也是有很大区别的。2.3、但是这里注意一个问题，这个解决方案，是在实验设计起始阶段要考虑的， 这种更换是一种很大的改动了，另外很多其他的性能均会被影响。2.4、希望大家特别注意！3、包被的工艺3.1、首先我们确定包被温度+湿度

6、参考37 45相对湿度干燥温度+时间参考50 ,3个小时干燥湿度30%f对湿度3.2、包被浓度+宽度设计3.2.1、 当你选中了可以满足一个项目的主要性能指标的NC膜、包被抗体以后，剩下的问题是要把他们以一个合适的浓度与宽度进行包被，而每个NC膜对抗体有特定的抗体载荷量，因此不建议过度包被，3.2.2、以我个人的经验，低抗体浓度，适当提高包被宽度可以缓解这个现象， 但是要配合包被液体系。3.2.3、但注意，会对实验的综合性指标有所影响，还需要针对项目具体调整， 这个也是提供一个思路。3.3、包被机器：我在这个方面最没有话语权了，因为这个我没有做过，但是听人说喷膜与滑膜最后对于上下线会有影响，具

7、体我就不知道了，有机会与条件的人可以试一下。4、包被液体系这个是比较重要的，我给几个配方你们试一下，看看手否可以缓解把：1、NC膜：赛多利斯CN95包被液体系01JK包被液系统1、缓冲液种类PB-参照缓冲液体系2、缓冲液离子强度10mM3、缓冲液PH7.42JK外盐系统纠正 体系1外盐种类NACL2、外盐离子强度0.9%3JK保护与纠正系统1蔗糖/海藻糖0.5%包被液体系11JK包被液系统 缓冲液体系1、缓冲液种类PB2、缓冲液离子强度10mM3、缓冲液PH7.42JK外盐系统纠正 体系1、外盐种类NACL2、外盐离子强度1.8%3JK保护与纠正系统1、蔗糖0.5%包被液体系21JK包被液系统 缓冲液体系1、缓冲液种类PB2、缓冲液离子强度10mM3、缓冲液PH7.42JK外盐系统纠正 体系1、外盐种类NACL2、外盐离子强度2.7%3JK保护与纠正