细菌的革兰染色法

1、实验二、细菌的革兰氏染色实验二、细菌的革兰氏染色一、实验目的一、实验目的1. 掌握细菌革兰氏染色掌握细菌革兰氏染色原理及方法原理及方法、巩固油、巩固油镜的使用；镜的使用；2. 初步掌握初步掌握无菌操作技术无菌操作技术。二、实验原理二、实验原理革兰氏染色法（革兰氏染色法（gram, gram, 丹麦，丹麦，18841884年）年）（1 1）是细菌学上最常用的鉴别染色法是细菌学上最常用的鉴别染色法，染色后，可将，染色后，可将细菌分为细菌分为g g+ +菌和菌和g g- -菌。菌。（2 2）机理）机理 主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。g g+ +菌细胞壁：

2、肽聚糖含量高（菌细胞壁：肽聚糖含量高（9090）、交联程度高、）、交联程度高、肽聚糖层厚、肽聚糖层厚、脂类含量少脂类含量少用乙醇不易脱色；用乙醇不易脱色；g g- -菌细胞壁：肽聚糖含量低（菌细胞壁：肽聚糖含量低（1010）、交联程度低，）、交联程度低，肽聚糖层薄、肽聚糖层薄、外壁层脂类含量较高外壁层脂类含量较高用乙醇易脱色。用乙醇易脱色。三、实验材料三、实验材料1.1.菌种菌种（1 1）枯草芽孢杆菌（）枯草芽孢杆菌（bacillus subtilisbacillus subtilis）（2 2）大肠杆菌（）大肠杆菌（escherichia coliescherichia coli） 培养培养

3、24h24h，用于革兰氏染色。，用于革兰氏染色。2.2.染色液和试剂染色液和试剂 草酸铵结晶紫染液、卢革氏碘液、草酸铵结晶紫染液、卢革氏碘液、95%95%酒精、番红染液、酒精、番红染液、生理盐水、乙醚生理盐水、乙醚- -乙醇溶液、香柏油。乙醇溶液、香柏油。3.3.器材器材 废液缸、洗瓶、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、废液缸、洗瓶、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显微镜等。显微镜等。四、实验方法四、实验方法1.1.革兰氏染色革兰氏染色（1 1）步骤）步骤 取一干净载玻片取一干净载玻片在两端各加一滴生理盐水在两端各加一滴生理盐水无无菌操作取菌种菌操作取菌种涂于生理盐水中（涂于生理盐水中（成菌膜成

4、菌膜） 自然干燥自然干燥火焰固定火焰固定初染初染（结晶紫，结晶紫，1min1min） 水洗水洗媒染媒染（碘液，碘液，1min1min） 水洗水洗脱脱色色（乙醇，乙醇，20-30s20-30s） 水洗水洗复染复染（蕃红，蕃红，2min2min） 水洗水洗自然干燥自然干燥观察。观察。 革兰氏阴性杆菌革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性杆菌革兰氏阳性杆菌（2 2）注意事项）注意事项 选用对数期的细菌；选用对数期的细菌； 载玻片要洁净无油迹；载玻片要洁净无油迹； 涂片时，滴生理盐水不要过多，挑菌量宜少，涂片时，滴生理盐水不要过多，挑菌量宜少，涂片要均匀，菌膜宜薄；涂片要均匀，菌膜宜薄； 酒精脱色：是革兰氏染色成败的关键，酒精脱色：是革兰氏染色成败的关键，要求脱要求脱至流出的乙醇不带颜色为止，立即水洗。至流出的乙醇不带颜色为止，立即水洗。五、实验作业五、实验作业1.1