抗体偶联药物

1、抗体偶联药物 目录目录 定义定义 原理原理 对对AgAg、AbAb、连接子和药物分子的要求、连接子和药物分子的要求 抗体的突变抗体的突变 几种几种ADCADC定点偶联方法的比较定点偶联方法的比较 连接方式连接方式 ADCADC偶联比的测定方法偶联比的测定方法 上市的药品上市的药品 前景前景 挑战挑战 一、什么是一、什么是ADCADC 二、原理二、原理 药物分子药物分子 药物 分子 高毒性 靶点 分子量 溶解度 稳定性 三、对抗体、药物、连接子、靶标和抗原的要求 药物分子药物分子 药物 分子 高毒性 靶点 分子量 溶解度 稳定性 因为因为IgGIgG有限的肿瘤穿透能力、有限的肿瘤穿透能力、 低抗

2、原表达性、内化效率不足低抗原表达性、内化效率不足 和连接子代谢，均可能使细胞和连接子代谢，均可能使细胞 内的毒素浓度降低。通常为内的毒素浓度降低。通常为 IC50IC50：0.01-0.1nmol/L0.01-0.1nmol/L 药物分子药物分子 药物 分子 高毒性 靶点 分子量 溶解度 稳定性 必须位于细胞内必须位于细胞内, ,若若ADCADC无法转无法转 运至细胞内将严重影响药物的运至细胞内将严重影响药物的 有效性和毒性。在细胞外还可有效性和毒性。在细胞外还可 能影响，药物解离后可能对旁能影响，药物解离后可能对旁 边的正常细胞有害。边的正常细胞有害。 药物分子药物分子 药物 分子 高毒性

3、靶点 分子量 溶解度 稳定性 药物的分子量较小，从而减少发生免疫原性的药物的分子量较小，从而减少发生免疫原性的 风险；抗体的分子量也要很小，风险；抗体的分子量也要很小，IgGIgG抗体的分抗体的分 子量约为子量约为150kD150kD，毛细管内皮层和细胞外间隙，毛细管内皮层和细胞外间隙 难以透过如此巨大的抗体或偶联分子，抗体的难以透过如此巨大的抗体或偶联分子，抗体的 分子量太小，会影响其在体内的半衰期。分子量太小，会影响其在体内的半衰期。 药物分子药物分子 药物 分子 高毒性 靶点 分子量 溶解度 稳定性 应在水性缓冲溶液中具有适应在水性缓冲溶液中具有适 当的溶解度，以便于偶联抗当的溶解度，以

4、便于偶联抗 体体 药物分子药物分子 药物 分子 高毒性 靶点 分子量 溶解度 稳定性 负载应在血浆中具有充负载应在血浆中具有充 分的稳定性。分的稳定性。 美登素类化合物 1 作用机制：通过抑制 微管组装来抑制细胞的 分裂 2 DM1临床研究发现： 稳定、非裂解的硫醚键 连接子（MCC)具有高效 的疗效 毒素主要在细 胞增殖过程中 发挥作用，对 其非分裂和静 息的细胞没有 作用 与分子的疏水性有 关（连接子也是疏 水性的：在血液或 代谢器官（肝脏、 肾脏）中意外释放 游离型毒素可穿透 细胞膜，并可能引 起严重的副作用 耐药肿瘤细胞可 能会限制ADC的 活性（由药物转 运蛋白表达或活 性增加，加快

5、疏 水性化合物外排 造成 作用微管的作用微管的ADCADC药物的缺陷药物的缺陷 目前开发带有负电荷目前开发带有负电荷- -磺酸基或极性短磺酸基或极性短PEGPEG的的 高度水溶性亲水性连接子，以增加溶解性高度水溶性亲水性连接子，以增加溶解性 1 4 - Description of the sub contentsription of the sub contents 1.1.在血浆中稳定，避免细胞毒素提前释在血浆中稳定，避免细胞毒素提前释 放损伤正常的组织或细胞放损伤正常的组织或细胞 ption of the sub contents 2.2.当当ADCsADCs被内吞到靶细胞后，能够快被内

6、吞到靶细胞后，能够快 速释放药物（非必须）速释放药物（非必须） - Description of the sub contents - Description of the sub contents 3.3.抗体的连接位点和连接位点的数量抗体的连接位点和连接位点的数量 要明确且合适要明确且合适 - Description of the sub contents - Description of the sub contents 2 3 4.4.连接子的分子量和极性连接子的分子量和极性e escription of the sub contents - Description of the su

7、b contents 连接子连接子 5 5、亲和素和生物素能否作为连接臂？、亲和素和生物素能否作为连接臂？ 一定的内吞一定的内吞 速率速率 抗原大量特异性的表抗原大量特异性的表 达在靶细胞表面在正常达在靶细胞表面在正常 组织或细胞表面不表达组织或细胞表面不表达 或少表达或少表达 抗原应尽量不分泌，因为抗原应尽量不分泌，因为 分泌型抗原可与血液循环中分泌型抗原可与血液循环中 抗体结合，从而导致与肿瘤抗体结合，从而导致与肿瘤 细胞结合的抗体减少细胞结合的抗体减少 有合适的内吞转运有合适的内吞转运 途径途径 要求要求 理想化的抗原理想化的抗原 （四）理想化的抗体（四）理想化的抗体 靶向功能，能够有效

8、地将靶向功能，能够有效地将 细细胞毒分子输送到靶细胞；胞毒分子输送到靶细胞； 具有较低的免疫原性。具有较低的免疫原性。 具有合适的连接位点，偶具有合适的连接位点，偶 联毒素后，不影响联毒素后，不影响ADCADC的的 稳定性、亲和力、內吞及稳定性、亲和力、內吞及 药效药效 与靶细胞表面的抗原结合后，能够诱导细胞进行内与靶细胞表面的抗原结合后，能够诱导细胞进行内 吞作用，进入胞内，最终进入溶酶体并导致细胞毒吞作用，进入胞内，最终进入溶酶体并导致细胞毒 分子在胞内的有效释放；（内化分子在胞内的有效释放；（内化- -流式细胞术检测；流式细胞术检测； 细胞内化后定位检测细胞内化后定位检测- -共聚焦显微

9、镜）共聚焦显微镜） 保持裸抗体全部或部分功能，如细胞介导的抗体保持裸抗体全部或部分功能，如细胞介导的抗体 依赖性细胞毒作用（依赖性细胞毒作用（ADCC)ADCC)、补体依赖性细胞毒作用、补体依赖性细胞毒作用 (CDC)(CDC)，即裸抗体也是有效的药物。，即裸抗体也是有效的药物。 四、抗体的突变四、抗体的突变 缺点：偶联的药物分子数目不定、位置不定和缺点：偶联的药物分子数目不定、位置不定和各种产各种产 物在体内的药物代谢动力学、药效、安全性物在体内的药物代谢动力学、药效、安全性等问题。等问题。 方法：抗体进行诱导突变，现有报道在抗体的特定部位方法：抗体进行诱导突变，现有报道在抗体的特定部位 设

10、计丙氨酸定点突变成半胱氨酸、引入非天然氨基酸、设计丙氨酸定点突变成半胱氨酸、引入非天然氨基酸、 酶法和二硫键改造法等，可以获得固定偶联比的酶法和二硫键改造法等，可以获得固定偶联比的ADCADC。 五、几种五、几种ADCADC定点偶联的方法比较定点偶联的方法比较 连接方式连接方式 机制机制 缺点缺点改进改进 应用应用 SGN-75(抗CD70，Val-Cit-MMAF） 肽链接肽链接 血液的pH高于溶酶体内的pH，溶 酶体内的蛋白水解酶在血液中的 活性很低，ADC在胞内被蛋白水解 酶水解，释放药物 药物直接连接到 肽连接子上，会 导致蛋白水解释 放出细胞毒素药 物的氨基酸加合 物，会降低细胞 毒

11、活性 加入间隔基，常用是 双功能性对氨基苄醇 基团，他通过氨基与 肽连接，形成酰胺键 而含胺细胞毒性药物 侧通过氨基甲酸酯官 能团与连接子（PABC) 的苄基羟基相连。 七、七、ADCADC药物偶联比的测定方法药物偶联比的测定方法 1 1、紫外可见分光光度法、紫外可见分光光度法 抗体为蛋白质, 其含有苯环的 氨基酸在 280 nm有其特征性的 吸收峰；若药物有紫外吸收其 在特定的波长产生消光系数， 产生特征性的吸收峰。可以用 双波长发测定药物的偶联比。 2.2.液质联用测定液质联用测定ADCADC药物的偶联比药物的偶联比 利用Ab、连接臂和药物极性 的不同，选用合适的流动相， 使其彼此分开，然后分别流 入质谱仪，各样品被离子化 后，经质谱的质量分析器将 离子碎片按质量数分开，经 检测器得到质谱图，读出其 相对分子质量，进而测定其 偶联比。 八、上市八、上市ADCADC药品药品 九、前景与挑战九、前景与挑战 用于精确治疗疾 病，减少药物在体 内的毒副作用 用于肿瘤的治疗， 特别