临床微生物学检验：肠杆菌科概述、大肠埃希菌

1、第八章第八章 肠杆菌科肠杆菌科 （Enterobacteriaceae） 1 1 第一节第一节 概述概述 1. 1.肠杆菌科细菌共性肠杆菌科细菌共性 2. 2.肠杆菌科细菌鉴定原则肠杆菌科细菌鉴定原则 3. 3.肠杆菌科临床意义肠杆菌科临床意义 2 2 掌握掌握 熟悉熟悉 1. 1.肠杆菌科细菌的分类肠杆菌科细菌的分类 3 3 变形杆菌变形杆菌 阴沟杆肠阴沟杆肠 菌菌 小肠耶尔森菌小肠耶尔森菌 伤寒沙门菌伤寒沙门菌 福氏志贺菌福氏志贺菌 大肠埃希菌大肠埃希菌 生物学性状近似的一大群生物学性状近似的一大群革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌 一、分类一、分类 抗原分析抗原分析 生化反应生化反应 核酸杂交核酸

2、杂交 序列分析序列分析 3333个菌属个菌属 120120多个菌种多个菌种 自然界分布广泛、种类众多自然界分布广泛、种类众多 大多数为肠道正常菌群大多数为肠道正常菌群 易培养、繁殖快易培养、繁殖快 临床常见的有临床常见的有1515个菌属个菌属 埃希菌属埃希菌属 志贺菌属志贺菌属 沙门菌属沙门菌属 耶尔森菌属耶尔森菌属 克雷伯菌属克雷伯菌属 枸橼酸杆菌属枸橼酸杆菌属 肠杆菌属肠杆菌属 沙雷菌属沙雷菌属 变形杆菌属变形杆菌属 泛菌属泛菌属 普罗威登菌属普罗威登菌属 摩根菌属摩根菌属 哈夫尼亚菌属哈夫尼亚菌属 邻单胞菌属邻单胞菌属 爱德华菌属爱德华菌属 少数为致病菌，部分为条件致病菌少数为致病菌，部

3、分为条件致病菌 约约4040种以上种以上可以在临床标本中检出可以在临床标本中检出 6 6 常居菌常居菌 埃希菌属埃希菌属 变形杆菌属变形杆菌属 肠杆菌属肠杆菌属 枸橼酸杆菌属枸橼酸杆菌属 克雷伯菌属克雷伯菌属 普罗威登菌属普罗威登菌属 摩根菌属、泛菌属摩根菌属、泛菌属 沙雷菌属等沙雷菌属等 条件致病菌条件致病菌 ( (一般不致病一般不致病) ) 致病菌致病菌 沙门氏菌属沙门氏菌属 志贺氏菌属志贺氏菌属 某些埃希菌某些埃希菌 耶尔森菌属耶尔森菌属（肠内和肠外感染）（肠内和肠外感染） 7 7 肠杆菌科中与临床有关的常见菌属肠杆菌科中与临床有关的常见菌属 埃希菌属埃希菌属 大肠杆菌大肠杆菌 沙门菌属

4、沙门菌属 伤寒沙门菌伤寒沙门菌 志贺菌属志贺菌属 痢疾志贺菌痢疾志贺菌 枸橼酸菌属枸橼酸菌属 弗劳地枸橼酸菌弗劳地枸橼酸菌 克雷伯菌属克雷伯菌属 肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌 肠杆菌属肠杆菌属 产气肠杆菌产气肠杆菌 泛菌属泛菌属 成团泛菌成团泛菌 哈夫尼菌属哈夫尼菌属 蜂房哈夫尼菌蜂房哈夫尼菌 沙雷菌属沙雷菌属 粘质沙雷菌粘质沙雷菌 变形杆菌属变形杆菌属 奇异变形杆菌奇异变形杆菌 摩根菌属摩根菌属 摩氏摩根菌摩氏摩根菌 普罗威登斯菌属普罗威登斯菌属 斯氏普罗威登斯菌斯氏普罗威登斯菌 耶尔森菌属耶尔森菌属 菌属（genus） 代表种（species） 二、临床意义二、临床意义 1.1.菌毛或菌毛样结

5、构菌毛或菌毛样结构 2.2.荚膜或微荚膜荚膜或微荚膜 3.3.内毒素内毒素 4.4.外毒素（肠毒素）外毒素（肠毒素） 8 8 致病物质致病物质 1.1.肠道内感染肠道内感染 急、慢性肠道感染、腹泻、食物中毒等急、慢性肠道感染、腹泻、食物中毒等 2.2.肠道外感染肠道外感染 鼠疫（烈性传染病），泌尿道、呼吸道、鼠疫（烈性传染病），泌尿道、呼吸道、 伤口和中枢神经系统感染，菌血症伤口和中枢神经系统感染，菌血症 9 9 二、临床意义二、临床意义 所致疾病所致疾病 1010 肠杆菌科细菌引起不同部位感染肠杆菌科细菌引起不同部位感染 中枢神经系统（埃希菌属）中枢神经系统（埃希菌属） 血液（埃希菌属血液（

6、埃希菌属 、克雷伯菌属、克雷伯菌属 、肠杆菌属）、肠杆菌属） 胃肠道（某些埃希菌胃肠道（某些埃希菌 、沙门菌、沙门菌 属、志贺菌属、耶尔森菌属）属、志贺菌属、耶尔森菌属） 泌尿道（埃希菌属泌尿道（埃希菌属 、变形杆菌属、变形杆菌属 、克雷伯菌属、摩根菌属）、克雷伯菌属、摩根菌属） 下呼吸道（克雷伯菌属、肠杆菌下呼吸道（克雷伯菌属、肠杆菌 属、埃希菌属属、埃希菌属 ） 三、生物学特性三、生物学特性 1.1.形态染色结构形态染色结构 革兰阴性杆菌或球杆状革兰阴性杆菌或球杆状 多数有鞭毛多数有鞭毛 多数有菌毛多数有菌毛 无芽孢无芽孢 1111 鞭毛鞭毛 共同特性共同特性 2.2.生长条件生长条件 需

7、氧或兼性厌氧需氧或兼性厌氧 营养要求不高营养要求不高 （中等大小、灰白或淡黄色、湿润、光滑（中等大小、灰白或淡黄色、湿润、光滑菌落）菌落） 1212 变形杆菌菌落特征（变形杆菌菌落特征（MacMac） 伤寒沙门菌菌落特征伤寒沙门菌菌落特征 （血平板）（血平板） 大肠埃希菌大肠埃希菌 菌落特征菌落特征 （普通平板）（普通平板） 三、生物学特性三、生物学特性 共同特性共同特性 3.3. 生化反应生化反应 发酵葡萄糖发酵葡萄糖 氧化酶阴性氧化酶阴性 触酶阳性触酶阳性 硝酸盐还原阳性硝酸盐还原阳性 1313 葡萄糖发酵（）葡萄糖发酵（） 触酶试验触酶试验（）（） 氧化酶试验（氧化酶试验（） 硝酸盐还原

8、试验硝酸盐还原试验（）（） 三、生物学特性三、生物学特性 共同特性共同特性 1414 鞭毛抗原（H） 菌体抗原（O） K或Vi抗原 三、生物学特性三、生物学特性 抗原结构抗原结构 O O抗原和抗原和H H抗原抗原：是肠杆菌科血清分群和分：是肠杆菌科血清分群和分 型的依据型的依据 表面抗原（表面抗原（K K、ViVi抗原）抗原）：可阻断：可阻断O O抗原与抗原与 相应抗体之间的反应，加热（相应抗体之间的反应，加热（100100，15-15- 30min)30min)处理可消除。处理可消除。 1515 抗原结构抗原结构 1616 耐低温，不耐热（耐低温，不耐热（6060，30min30min，杀死

9、），杀死） 水中生存期较长，不耐干燥水中生存期较长，不耐干燥 化学消毒剂敏感化学消毒剂敏感 耐胆盐和抵抗某些染料的作用（伊红、耐胆盐和抵抗某些染料的作用（伊红、 美兰等）美兰等） 三、生物学特性三、生物学特性 抵抗力抵抗力 1717 溶源性转换溶源性转换 生化反应性变异生化反应性变异 通过通过 引起引起 耐药性变异耐药性变异 毒力性变异毒力性变异 转化、转导转化、转导 接合接合 三、生物学特性三、生物学特性 变异变异 1818 肠外标本肠外标本: :采自不同的感染部位如血液、体液、采自不同的感染部位如血液、体液、 呼吸道、伤口、尿液及其他各种标本。呼吸道、伤口、尿液及其他各种标本。 肠道标本肠

10、道标本: :疾病早期留取疾病早期留取新鲜粪便新鲜粪便，挑取，挑取粘液粘液 脓血脓血部分进行培养。应在部分进行培养。应在2h2h内内进行，以利志贺进行，以利志贺 菌等检出。如不能及时培养应冷藏待检。菌等检出。如不能及时培养应冷藏待检。 样本采集样本采集 四、微生物学检验四、微生物学检验 肠杆菌科细菌鉴定步骤肠杆菌科细菌鉴定步骤 科的鉴定：科的鉴定：革兰阴性杆菌，氧化酶阴性革兰阴性杆菌，氧化酶阴性 属、种的鉴定：属、种的鉴定： 各种生化反应特征各种生化反应特征 血清学试验血清学试验 1919 鉴定到属种鉴定到属种 2020 粪便标本：粪便标本：形态及染色性多无鉴别意义形态及染色性多无鉴别意义 其他

11、标本：其他标本： 标本直接检查标本直接检查 2121 1.1.肠道外标本：肠道外标本： 2.2.肠道标本：肠道标本： 如疑耶尔森菌感染如疑耶尔森菌感染可用耶尔森菌可用耶尔森菌选择琼脂选择琼脂(CIN)(CIN)。 分离培养分离培养 2222 肠杆菌科细菌分离鉴定流程肠杆菌科细菌分离鉴定流程 标本标本 分离培养分离培养 MacMac或或EMBEMB或中国兰或中国兰/ /SSSS （可疑菌落可疑菌落） 生化鉴定生化鉴定 血清学鉴定血清学鉴定 已知已知Ab检测检测 未知未知Ag (玻片玻片 凝集试验凝集试验) 镜检镜检（革兰染色）（革兰染色） 药敏试验药敏试验 涂片染色氧化酶涂片染色氧化酶/MIU/

12、KIA 分子生物学鉴定分子生物学鉴定 抗体检测抗体检测 成分和作用成分和作用： 1.1. 基础培养基：基础培养基：提供氮源和碳源提供氮源和碳源 2.2. 胆盐、枸橼酸钠、煌绿胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病菌可抑制肠道非致病菌 和革兰阳性球菌的生长，而对肠道致病菌抑制和革兰阳性球菌的生长，而对肠道致病菌抑制 作用弱。作用弱。 3.3. 乳糖、中性红（乳糖、中性红（pH6.8-8.0pH6.8-8.0，红，红橙黄）橙黄） ：致致 病菌病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质 菌落淡黄色菌落淡黄色；大肠杆菌等；大肠杆菌等肠道非致病菌肠道非致病菌分解分解 乳

13、糖产酸，乳糖产酸，菌落呈红色菌落呈红色 4.4. 铁离子：铁离子：与硫化氢生成硫化亚铁黑色沉淀。与硫化氢生成硫化亚铁黑色沉淀。 2323 SSSS平板（平板（Salmonella-Salmonella-ShigellaShigella） 分离肠道病原菌的强选择培养基分离肠道病原菌的强选择培养基 肠道病原菌肠道病原菌: : 小小, ,无色或淡黄色无色或淡黄色, ,半透明或不透明菌落半透明或不透明菌落 肠道非致病菌肠道非致病菌: : 大大, ,红色菌落红色菌落 2424 SSSS平板（平板（Salmonella-Salmonella-ShigellaShigella） 分离肠道病原菌的强选择培养基

14、分离肠道病原菌的强选择培养基 2525 SSSS平板（空白）平板（空白） 大肠杆菌大肠杆菌 伤寒杆菌伤寒杆菌 2626 肠道病原菌肠道病原菌:半透明或不透明半透明或不透明, ,无色或灰白、淡黄色无色或灰白、淡黄色 小菌落小菌落 肠道非致病菌肠道非致病菌:红色（红色（Mac） 、紫黑色、紫黑色(EMB)、蓝色、蓝色 (中国蓝）混浊较大菌落。中国蓝）混浊较大菌落。 成分：成分：与与SSSS类似，但不含铁离子，抑制剂只含胆盐，类似，但不含铁离子，抑制剂只含胆盐， 可抑制革兰阳性菌生长，不抑制肠道细菌生长。可抑制革兰阳性菌生长，不抑制肠道细菌生长。 麦康凯（麦康凯（MacMac）、）、 EMBEMB（

15、Eosin Methyl BlueEosin Methyl Blue， 伊红美蓝伊红美蓝) )、中国兰平板、中国兰平板 分离肠道病原菌的弱选择培养基分离肠道病原菌的弱选择培养基 2727 大肠杆菌在大肠杆菌在MacMac上上 志贺菌在志贺菌在MacMac上菌落上菌落 大肠杆菌在大肠杆菌在MacMac上菌落上菌落 肠杆菌科与其它革兰阴性杆菌区别肠杆菌科与其它革兰阴性杆菌区别 2828 2929 肠道杆菌肠道杆菌IMViCIMViC试验和试验和苯丙氨酸试验苯丙氨酸试验特性特性 吲哚吲哚 甲基红甲基红 V-P 枸橼酸盐枸橼酸盐 苯丙氨酸苯丙氨酸 埃希菌属埃希菌属 + + - - - 沙门菌属沙门菌属

16、 - + - + - 志贺菌属志贺菌属 -/+ + - - - 克雷伯菌属克雷伯菌属 -/+ - + + - 变形杆菌属变形杆菌属 +/- + -/+ -/+ + 肠道致病菌肠道致病菌 肠道非致病菌肠道非致病菌 多不发酵多不发酵乳糖乳糖 多发酵多发酵乳糖乳糖 乳糖发酵试验乳糖发酵试验 （初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌）（初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌） 3030 1)1) 常规生化鉴定常规生化鉴定: : 为实验室为实验室最常用最常用的方法。各菌属的方法。各菌属( (种种) )主要生化特主要生化特 性有助于鉴定细菌性有助于鉴定细菌 2) 2) 鉴定试剂盒鉴定试剂盒: : 选用标准化和商品化的

17、微生物鉴定试剂盒，选用标准化和商品化的微生物鉴定试剂盒， 以细菌生化特性不同为基础以细菌生化特性不同为基础，与编码技术结合，与编码技术结合， 可人工、仪器读取结果，自动化。可人工、仪器读取结果，自动化。 肠杆菌科细菌鉴定肠杆菌科细菌鉴定 3131 3) 3) 血清学鉴定：血清学鉴定：肠杆菌科中的某些腹泻病原菌如肠杆菌科中的某些腹泻病原菌如 埃希菌属，志贺菌属，沙门菌属及耶尔森菌属等埃希菌属，志贺菌属，沙门菌属及耶尔森菌属等 的鉴定除生化反应外，尚需用已知的特异性抗血的鉴定除生化反应外，尚需用已知的特异性抗血 清（多价和单价因子血清）与分纯的菌落进行凝清（多价和单价因子血清）与分纯的菌落进行凝

18、集反应以分群及定型集反应以分群及定型鉴定后才能作出最终报告。鉴定后才能作出最终报告。 肠杆菌科细菌鉴定肠杆菌科细菌鉴定 3232 4) 4) 分子生物学鉴定分子生物学鉴定：PCRPCR等等 5 5）噬菌体鉴定试验噬菌体鉴定试验 肠杆菌科细菌鉴定肠杆菌科细菌鉴定 肥达试验：肥达试验：伤寒的辅助诊断伤寒的辅助诊断 3333 抗体检测抗体检测 1.1.常用方法：常用方法：K-BK-B纸片扩散法、药敏板或仪器检测纸片扩散法、药敏板或仪器检测 2.2.药物选择：药物选择： 3.3.特殊耐药检测：特殊耐药检测：（超广谱（超广谱-内酰胺酶或内酰胺酶或AmpCAmpC酶）。酶）。 3434 抗菌药物敏感试验抗

19、菌药物敏感试验 第二节第二节 大肠埃希菌大肠埃希菌 （Escherichia coliEscherichia coli） 1. 1.细菌特性（形态染色、培养特性、生化反应）细菌特性（形态染色、培养特性、生化反应） 2. 2.临床意义（致病物质、所致疾病）临床意义（致病物质、所致疾病） 3. 3.微生物学检验（检验程序、检验方法）微生物学检验（检验程序、检验方法） 1.1.分类、抗原结构分类、抗原结构 2. 2.标本采集标本采集 3535 掌握掌握 熟悉熟悉 人类标本中分离的埃希菌属包括人类标本中分离的埃希菌属包括6 6个种：个种： 大肠埃希菌大肠埃希菌 是是人类和动物肠道中的正常菌群人类和动物

20、肠道中的正常菌群 常引起常引起肠内外的感染肠内外的感染 是腹泻和泌尿道感染的主要病原菌是腹泻和泌尿道感染的主要病原菌 出生后数小时就进入肠道，并终生伴随出生后数小时就进入肠道，并终生伴随 常作为水源、饮用水、食物粪便污染的指标常作为水源、饮用水、食物粪便污染的指标 是基因工程中的主要工程菌。是基因工程中的主要工程菌。 3636 概述概述 3737 在环境和食品卫生学上，常被用作粪便污染的检测指标在环境和食品卫生学上，常被用作粪便污染的检测指标 不得检出大肠菌群不得检出大肠菌群/ /100ml饮水饮水 细菌总数细菌总数 100 100CFU/ /100ml饮水饮水 贾第鞭毛虫和隐孢子虫贾第鞭毛虫

21、和隐孢子虫1 1个个/10L/10L 大肠埃希菌和耐热大肠菌群大肠埃希菌和耐热大肠菌群1 1个个/10L/10L 卫生学指标卫生学指标 总大肠菌群数总大肠菌群数每每100ml水中大肠菌群数水中大肠菌群数 我国饮用水的微生物标准：我国饮用水的微生物标准： 细菌总数细菌总数 每每100ml样品中细菌总数样品中细菌总数 人类标本中分离的埃希菌属包括人类标本中分离的埃希菌属包括6 6个种：个种： 2. 2. 蟑螂埃希菌蟑螂埃希菌偶而检出并有潜在的致病性。偶而检出并有潜在的致病性。 3. 3. 弗格森埃希菌；弗格森埃希菌； 4. 4. 赫尔曼埃希菌；赫尔曼埃希菌； 5. 5. 伤口埃希菌伤口埃希菌 6.

22、 6. E.albertiiE.albertii 3838 概述概述 18851885年德国人艾希自人畜肠腔分离出年德国人艾希自人畜肠腔分离出E.coliE.coli 19451945年年BaryBary自病儿腹泻便中大量检出自病儿腹泻便中大量检出E.coliE.coli 19821982年美国发现有种年美国发现有种E.coliE.coli引起出血性肠炎（引起出血性肠炎（HCHC）和）和 溶血性尿毒综合征（溶血性尿毒综合征（HUSHUS） 19871987年年levinelevine提出提出EHECEHEC概念，指出概念，指出SLTSLT毒素是病因毒素是病因 19961996年日本年日本900

23、09000名儿童暴发腹泻，名儿童暴发腹泻，1111人死亡，人死亡，E.coliE.coli O157O157：H7H7是病因是病因 3939 4040 侵袭力：侵袭力：K K抗原和菌毛抗原和菌毛 抗吞噬、黏附抗吞噬、黏附 4141 内毒素：类脂内毒素：类脂A A 具有发热、休克、具有发热、休克、DICDIC等病理作用等病理作用 外毒素：外毒素： 肠毒素肠毒素: :不耐热不耐热(heat labile toxin,LT)(heat labile toxin,LT)和耐热肠毒和耐热肠毒 素素(heat stable toxin, ST)(heat stable toxin, ST) VeroVer

24、o毒素毒素志贺样毒素（志贺样毒素（Shiga like toxinShiga like toxin，SLTSLT） 引起肠液大量分泌而导致腹泻引起肠液大量分泌而导致腹泻 一、临床意义一、临床意义 致病因素致病因素 肠道外感染肠道外感染 l 泌尿系统感染（尿道致病性泌尿系统感染（尿道致病性E.coliE.coli, UPEC, UPEC）黏附作用）黏附作用 l 新生儿脑膜炎新生儿脑膜炎/ /脓毒症脓毒症 相关的相关的E.coliE.coli(MNEC)K1(MNEC)K1（+ +） l 菌血症菌血症 l 胆囊炎、腹膜炎胆囊炎、腹膜炎 l 烧伤创面感染烧伤创面感染 4242 一、临床意义一、临床意

25、义 所致疾病所致疾病 肠道内感染肠道内感染(diarrhaegenic (diarrhaegenic E.coliE.coli引起）引起） 轻微腹泻至霍乱样严重腹泻轻微腹泻至霍乱样严重腹泻 致死性并发症如溶血性尿毒综合征。致死性并发症如溶血性尿毒综合征。 4343 一、临床意义一、临床意义 所致疾病所致疾病 肠产毒型大肠埃希菌肠产毒型大肠埃希菌 enterotoxigenic E.coli, ETECenterotoxigenic E.coli, ETEC 4444 肠侵袭型大肠埃希菌肠侵袭型大肠埃希菌 ( (e enteroinvasiventeroinvasive E.coli, E.co

26、li, EIECEIEC) ) 肠致病型大肠埃希菌肠致病型大肠埃希菌 ( (enteropathogenicenteropathogenic E.coli, E.coli, EPECEPEC) ) 肠出血型（产志贺毒素）大肠埃希菌肠出血型（产志贺毒素）大肠埃希菌 enterohemorrhagic(Shiga toxin-producing) E.coli, EHEC 肠集聚型大肠埃希菌肠集聚型大肠埃希菌 ( (e enteroaggregativenteroaggregative E.coli, E.coli, EAEC)EAEC) Transmission electron microgr

27、aph （O157：H7） STEC STEC 其他：其他：O O26 26、 、O O104 104 引起腹泻的大肠埃希菌引起腹泻的大肠埃希菌 4545 引起肠道感染的大肠埃希菌引起肠道感染的大肠埃希菌 肠道正常菌群大肠埃希菌肠道正常菌群大肠埃希菌 4646 在一般平板上表现在一般平板上表现 生化反应生化反应 均相似均相似 二、生物学性状二、生物学性状 革兰阴性直短杆状，革兰阴性直短杆状， 大小为大小为1.01.01.5m1.5m， 有鞭毛能运动，有鞭毛能运动， 引起肠外感染的菌株有引起肠外感染的菌株有 荚膜和周身菌毛。荚膜和周身菌毛。 4747 鞭毛鞭毛 flagellum 菌毛菌毛 fi

28、mbria 形态结构形态结构 二、生物学性状二、生物学性状 4848 耐热耐热(100) (100) nH H抗原：不耐热的蛋白质，抗原：不耐热的蛋白质，5656种。种。 热热 不稳定，阻止不稳定，阻止O O凝集。凝集。 抗原成分抗原成分 二、生物学性状二、生物学性状 大肠杆菌大肠杆菌血清型按血清型按 O O：K K：H H 或或O O：H H 的顺序以数字表示的顺序以数字表示, , 分成分成200200多血清型多血清型 如如 O111O111：K58K58：H2H2， O157:H7 O157:H7 4949 抗原成分抗原成分 二、生物学性状二、生物学性状 兼性厌氧兼性厌氧 营养要求不高营养

29、要求不高 可在普通平板，血平板，可在普通平板，血平板，SSSS，MacMac， EMBEMB，中国蓝，中国蓝 生长生长 生化反应活泼生化反应活泼 能分解多种糖能分解多种糖 5050 培养特性与生化反应培养特性与生化反应 5151 大肠埃希菌在普通大肠埃希菌在普通 平板上的菌落特征平板上的菌落特征 5252 5353 5454 复合生化试验复合生化试验 克氏双糖铁培养基克氏双糖铁培养基 分解葡萄糖分解葡萄糖+ +乳糖乳糖 产酸产酸( (乳糖多，产酸多）乳糖多，产酸多） 上下层均变黄上下层均变黄 (Kligler Iron Agar,KIA)(Kligler Iron Agar,KIA) 组成：无

30、糖培养基组成：无糖培养基+1+1份葡萄糖份葡萄糖+10+10份乳糖份乳糖 + + 铁盐铁盐 + + 酚红酚红 营养营养 底物底物 底物底物 底物底物 指示剂指示剂 原理：原理： 只分解葡萄糖只分解葡萄糖 产酸（葡萄糖少，产酸量少）产酸（葡萄糖少，产酸量少） 上层酸氧化，红色上层酸氧化，红色 下层缺氧，不氧化，下层缺氧，不氧化， 黄色黄色 产生硫化氢产生硫化氢 + + 铁盐铁盐 FeS FeS 黑色沉淀黑色沉淀 应用：检测肠杆菌科细菌对乳糖、葡萄糖的分解和产应用：检测肠杆菌科细菌对乳糖、葡萄糖的分解和产H H2 2S S能力。能力。 5555 乳（）乳（） 葡（）葡（） H H2 2S(-)S(

31、-) 乳（乳（- -） 葡（葡（+ +） H H2 2S(+)S(+) 乳（乳（+ +） 葡（产酸产气）葡（产酸产气） H H2 2S(-)S(-) 未接种菌未接种菌 的的KIAKIA 5656 大肠埃希菌在双糖铁（大肠埃希菌在双糖铁（KIA)KIA)培养基上培养基上 生化反应生化反应 : : A A + -A A + - (A)- (A)-乳糖乳糖 (A)- (A)-葡萄糖葡萄糖 (+)- (+)-分解葡萄糖产气分解葡萄糖产气 (-)- (-)-不产不产H H2 2S S 5757 大肠埃希菌检验程序大肠埃希菌检验程序 尿液、脓汁、痰、分泌物尿液、脓汁、痰、分泌物 血液、脑脊液、胆汁血液、脑

32、脊液、胆汁 分离培养（血平板和分离培养（血平板和MACMAC） 直接检查直接检查 涂片染色镜检涂片染色镜检 增菌培养增菌培养 最终鉴定最终鉴定 全面生化，血清，补充试验全面生化，血清，补充试验 初步鉴定初步鉴定 形态特点、菌落特征形态特点、菌落特征 氧化酶、氧化酶、KIAKIA、MIUMIU、IMViCIMViC 可疑菌落可疑菌落 药敏试验药敏试验 三、微生物学检验三、微生物学检验 粪便、肛拭、呕吐物粪便、肛拭、呕吐物 在肠道选择性培养基上：在肠道选择性培养基上：MacMac、SSSS 红色菌落红色菌落 革兰革兰阴性阴性杆菌，氧化酶杆菌，氧化酶阴性、硝酸盐还原（阴性、硝酸盐还原（+ +） KI

33、A:KIA:AA+-AA+-，MIU:+-MIU:+-，IMVC:+-IMVC:+-，ORN(ORN(鸟氨酸鸟氨酸) )：+ +- - 用用生化反应、血清学试验生化反应、血清学试验鉴定到属和种。鉴定到属和种。P104 P104 表表8-58-5 * *尿路感染需计数中段尿细菌总数，尿路感染需计数中段尿细菌总数，1010万万/ /mLmL 5858 三、微生物学检验三、微生物学检验 肠外感染大肠埃希菌的鉴定肠外感染大肠埃希菌的鉴定 1. 1. 标本采集标本采集 2. 2. 直接涂片染色检查（除血液标本外）直接涂片染色检查（除血液标本外） 3. 3. 分离培养鉴定分离培养鉴定 5959 1 1 标

34、本：粪便、肛拭、呕吐物标本：粪便、肛拭、呕吐物 2 2 分离培养：分离培养： 肛拭：接种肛拭：接种GNGN肉汤再转种肠道选择培养基肉汤再转种肠道选择培养基 粪便、呕吐物：接种肠道选择培养基粪便、呕吐物：接种肠道选择培养基 3 3 同肠外感染标本鉴定程序一样将同肠外感染标本鉴定程序一样将E.coliE.coli鉴定到种鉴定到种 4 4 分别进行分别进行5 5种种引起肠内感染的引起肠内感染的E.coliE.coli鉴定：鉴定：p105,p105,表表8-68-6 肠道感染大肠埃希菌的鉴定肠道感染大肠埃希菌的鉴定 三、微生物学检验三、微生物学检验 6060 ETECETEC的鉴定：的鉴定： 分离培养

35、分离培养+ +生化反应生化反应+ +血清分型血清分型+ +肠毒素测定肠毒素测定 EPECEPEC的鉴定的鉴定： 分离培养分离培养+ +生化反应生化反应+ +血清分型血清分型 EIECEIEC的鉴定：生化类似志贺菌的鉴定：生化类似志贺菌 动力（）、乳糖不发酵或迟缓发酵、赖动力（）、乳糖不发酵或迟缓发酵、赖(-)(-) 采用采用EIECEIEC O:HO:H血清分型，豚鼠眼结膜试验血清分型，豚鼠眼结膜试验 与志贺菌（三者均阴性）鉴别：与志贺菌（三者均阴性）鉴别： 醋酸钠醋酸钠+ +、葡萄糖铵利用、葡萄糖铵利用+ +、黏质酸盐产酸试验、黏质酸盐产酸试验+ + EAggECEAggEC的鉴定：的鉴定：

36、 n液体培养液体培养- -凝集试验检测其对细胞的粘附性凝集试验检测其对细胞的粘附性 n或或DNADNA探针技术。探针技术。 6161 ETECETEC肠毒素的测定方法肠毒素的测定方法 测定方法测定方法 被检毒素被检毒素测定方法测定方法 被检毒素被检毒素 生物学方法生物学方法 免疫学方法免疫学方法 体内体内 ElekElek法法LTLT 兔肠段结扎试验兔肠段结扎试验LTLT、STST 被动免疫溶血法被动免疫溶血法LTLT 皮肤毛细血管通透性试验皮肤毛细血管通透性试验LTLT RIARIALTLT 乳鼠灌胃试验乳鼠灌胃试验STST ELISAELISA法法LTLT、STST 体外体外 分子生物学法分子生物学法 中国地鼠卵巢细胞培养中国地鼠卵巢细胞培养