GB-T5009.197-2003保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定.pdf

I C S 6 7 . 0 4 0C 5 3中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB / T 5 0 0 9 . 1 9 7 -2 0 0 3保健食品中盐酸硫胺素、 盐酸毗哆醇、烟酸、 烟酞胺和咖啡因的测定De t e r mi n a t i o n o fm acl nt h i a mi n e h y d r o c h l o r i d e ， p y r i d o x i n e h y d r o c h l o r i d e ，n i a c i n a mi d e a n d c a f f e i n e i n h e a l t h f o o d s2 0 0 3 - 0 8 - 1 1 发布2 0 0 4 - 0 1 - 0 1实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部，中 国 国家 标 准 化 管 理 委 员 会 卜免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载GB / T 5 0 0 9 . 1 9 7 - 2 0 0 3前 昌 种 ， 曰本标准由中华人 民共和国卫生部提出并归口。本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人： 杨大进、 方从容、 王竹天。标准下载网()免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G s / T 5 0 0 9 . 1 9 7 -2 0 0 3引言 盐酸硫胺素、 盐酸毗哆醇、 烟酸、 烟酞胺等 1 3 族维生索是人体不可缺少的重要营养素， 对于多种疾病的预防治疗有重要辅助作用。目前 B族维生素和咖啡因已作为功效成分添加于保健食品中。本方法在参考 日本大正制药株式会社维生素检测方法的基础上 ， 结合我国具体的仪器分析条件， 制定了适用于片剂、 胶囊、 r I 服液、 饮料等保健食品类型中所添加的盐酸硫胺素、 盐酸毗哆醇、 烟酸、 烟酞胺等 H族维生素和咖啡因含量的高效液相色谱测定方法。标准下载网()免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 9 7 -2 0 0 3保健食品中盐酸硫胺素、 盐酸毗哆醇、 烟酸、 烟酞胺和咖啡因的测定范 围 本标准规定了保健食品中盐酸硫胺素、 盐酸毗哆醇、 烟酸、 烟酞胺和咖啡因的高效液相色谱测定方法 。 本标准适用于盐酸硫胺素、 盐酸毗哆醇、 烟酸、 烟酞胺和咖啡因作为膳食补充剂添加于片剂、 胶囊、口服液、 饮料等试样类型中的高效液相色谱测定方法。 本方法的检出限为： 盐酸硫胺素 。 . 0 2 u g , 盐酸毗哆醇 0 . 0 2 tA g 、 烟酸 0 . 1 0 u g 、 烟酞胺 0 . 0 6 t g 、 咖啡因0 . 0 5 t g 。线性范围： 盐酸硫胺素0 . 5 0 0 ti g / m L一 5 0 . 0 t .g / m I - ； 盐酸毗哆醇0 . 5 0 0 t g / m L5 0 . 0 t g / m L ； 烟酸 1 . 0 0 ti g / m L -1 0 0 tx g / m L ； 烟酞胺 1 . 0 0 ji g / m I _ - - 1 0 0 ji g / m l , ； 咖啡因5 . 0 0 f g / m l 、 一5 0 0 tl g / m l , .原理 将粉碎混匀的片剂、 胶囊或液体试样使用甲醇十水磷酸1 0 0 - 1- 4 0 0 十0 . 5 进行提取和稀释， 根据高效液相色谱紫外检测器外标法定性定量检测。试荆 除非另有说明， 在分析中所用的水为双蒸水。3 . 1 甲醇： 优级纯。3 . 2 乙睛： 色谱纯。3 . 3 磷酸： 分析纯。3 . 4 硫酸月桂酷钠（ s o d i u m d o d e c y l s u l f a t e ) ： 高效液相色谱用试剂。3 . 5 1 - 癸烷磺酸钠（ s o d i u m 1 - d e c a n e s u l f o n a t e ) ： 高效液相色谱用试剂 。3 . 6 标准储备液 A： 准确称量已扣除水分的盐酸硫胺素和盐酸毗哆醇标准品各 0 . 0 5 0 0 g ， 溶于水中并定容至5 0 m L o3 . 7 标准储备液 B ： 准确称量已扣除水分的烟酞胺 和烟酸标 准品各 0 . 0 4 0 0 g ， 溶于水 中并定容至2 0 mL,3 . 8 混合标准使用液： 准确称量经8 0 干燥4h 的咖啡因0 . 0 5 0 0 g准确加入标准储备液A5 m L ， 标准储备液 B1 0 m L ， 再加人甲醇水磷酸1 0 0 +4 0 0 十0 . 5 混合溶液至 2 0 m l . ,仪器1 高效液相色谱仪： 附紫外检测器。2 超声波清洗器。3 离心机 。分析步骤5 . 1 试样处理5 . 1 . 1 取 2 0 粒以上片剂或胶囊试样研磨或混匀， 称取一定量试样于试管中（ 准确至 0 . 0 0 1 g ) ， 加人甲标准下载网()免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 9 7 -2 0 0 3醇水磷酸1 0 0 +4 0 0 +0 . 5 混合溶液， 使浓度为每毫升中大约含盐酸硫胺素、 盐酸毗哆醇0 . 2 5 m g ,烟酸、 烟酞胺 1 m g 。超声提取 5 m i n 后以 3 0 0 0 r / m i n 离心 5 m i n ， 上清液经 。 . 4 5 p m滤膜过滤后待进样 。5 . 1 . 2 液体试样直接以甲醉水磷酸二1 0 0 +4 0 0 十0 . 5 混合溶液稀释， 充分混匀后经 0 . 4 5 ri m滤膜过滤后待进样。5 . 2 色谱条件5 . 2 . 1 色谱柱： T S K C , 4 . 6 m rr n / K 1 5 0 m m, 5 (lm,5 . 2 . 2 柱温 ： 室温 。5 . 2 . 3 检测波长： 盐酸硫胺素 2 6 0 n m； 咖啡因、 烟酸、 烟酞胺、 盐酸毗哆醇 2 8 0 n m,5 . 2 . 4 流动相： 盐酸硫胺素： 硫酸月桂酷钠溶液( 5 g -5 3 0 ml . ） 十乙睛十磷酸”5 3 0 十4 7 0 +1 ； 咖啡因、烟酸、 烟酸胺、 盐酸毗哆醇 : 1 一 癸烷磺酸钠溶液（0. 2 2 g - - 8 5 0 m l ） 乙睛十磷酸8 5 0 +1 5 0 十t o5 . 2 . 5 流速 ： 1 mL / mi n ,5 . 2 . 6 进样量： 1 0川 J 。5 . 3 色谱 图 I 一盐酸硫胺素。t咖啡因； 图 1 盐酸硫胺 素色谱 图2烟酸； 3 一 烟酞胺； 4 盐酸毗哆醇。 图 2 咖啡因、 烟酸、 烟酞胺、 盐酸、 毗哆醇色谱图 在该色谱条件下， 盐酸硫胺素保留时间 1 4 . 3 0 5 m i n 、 盐酸毗哆醇保留时间 1 8 . 5 1 2 m i n 、 烟酸保 留时间 8 . 7 2 8 m i n 、 烟酞胺保 留时间 9 . 3 4 1 m i n 、 咖啡因保留时间 4 . 9 8 6 m i n 。浓度分 别为盐 酸硫胺素8 . 8 0 ji g / m l . 、 盐酸毗哆醇 9 . 6 0 fA g / m l 、 烟酸 2 3 . 8 jx g / m l , 、 烟酞胺 2 5 . 0 t g / m L 、 咖啡因 5 0 . 4 u g / m l 。6 结果计算X 、 XV X 1 （ ） （。又 7 n又 1 0 0 0式 中 ：X 试样中单 一 成分的含量， 单位为毫克每 百 克（ 或毫克每百 毫升） m g / 1 0 0 g ( m L ) ;h ， 一 一 试样峰高或峰面积；c 一标准溶液浓度， 单位为微克每毫升（ fc g / m l ） ；标准下载网()免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 9 7 - 2 0 0 3V 试样定容体积， 单位为毫升（ ML )；h z 一 标准溶液峰高或