GB-T19542-2004饲料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶的测定高效液相色谱法.pdf

I C S 6 5 . 1 2 0一一B 20石日中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 G B / I 1 9 5 4 2 -2 0 0 4饲料中磺胺二甲基喀陡和磺胺间甲氧喀陡 的测定高效液相色谱法 De t e r mi n a t i o n o f s u l f a me t h a z i n e a n d s u l f a mo n o me t h o x i n e i n f e e d s -H i g h - p e r f o r ma n c e l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y2 0 0 4 - 0 6 - 0 9 发布2 0 0 4 - 1 0 - 0 1 实施 率 督留 瞥 臀 罐 唁臀袋 臀臀霎 发 “免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 1 9 5 4 2 -2 0 0 4 前言 本标准在查阅了大量文献资料的基础上， 经过方法筛选， 确立了用高效液相色谱分析方法测定饲料 磺胺二甲基嗜陡和磺胺间甲氧嚓陡的试验方法 。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。 本标准由国家饲料质量监督检验中心（ 北京） 负责起草。 本标准主要起草人 ： 李兰、 索德成、 李丽蓓 、 魏秀莲 、 董焕程 、 杨文军。免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G B / T 1 9 5 4 2 -2 0 0 4 饲料中磺胺二甲基啥咤和磺胺间甲氧W & 咤 的测定高效液相色谱法1 范 围 本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中磺胺二甲基VO和磺胺间甲氧a&陡含量的方法。 本标准适用于配合饲料 、 浓缩饲料、 添加剂预混合饲料中磺胺二 甲基嚓陡和磺胺间 甲氧vq的测定， 最低检出浓度为2 0 m g / k g .2 规范性引用文件 下列文件中的条款， 通过本标准的引用而成为本标准的条款， 凡是注 日 期的引用文件 ， 其随后所有的修改单（ 不包括勘误的内容） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而， 鼓励根据本标准达成协议 的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注 日 期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准。 G B / T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法 G B / T 1 4 6 9 9 . 1 饲料采样方法3 原理 试样中磺胺二甲基嚓 P ;z 和磺胺间甲氧0 , Q经酸性甲醇溶液超声提取后， 注入高效液相色谱仪反相色谱系统中进行分离， 用紫外检测器（ 或二极管矩阵检测器） 检测， 外标法计算磺胺二甲基嗜陡和磺胺间甲氧嚓陡的含量。4 试剂和溶液 除特殊说明外， 所用试剂均为分析纯 ， 水为蒸馏水； 色谱用水符合 G B / T 6 6 8 2中一级用水规定 。4 . 1 冰乙酸 ： 优级纯。4 . 2 盐酸。4 . 3 盐酸溶液 。 ( H C I ) =0 . 1 m o l / L ： 取盐酸（( 4 . 2 ) 8 . 5 ml . ， 溶解于 1 0 0 0 m工 J 水中。4 . 4 乙睛 ： 色谱纯。4 . 5 甲醇： 色谱纯。4 . 6 N, N 一 二甲基 甲酞胺。4 . 7 提取液 ： 在 1 0 0 0 mL容量瓶中加人盐酸溶液（ 4 . 3 ) 3 0 0 m l , ， 用甲醇( 4 . 5 ) 定容至刻度 ， 摇匀。4 . 8 流动相 ： 在 1 0 0 0 ml 、 容量瓶中加人 7 0 0 ml - -8 0 0 ml去离子水 ， 移取 冰乙酸（ 4 . 1 ) 3 m L加人水中， 用水定容至刻度， 摇匀 ， 过 0 . 4 5 r t m滤膜。取上述溶液 8 8 0 m L与乙睛( 4 . 4 ) 1 2 0 m l , 混合， 摇匀， 脱气， 待用。4 . 9 磺胺二甲基嗜陡标准品： 纯度均应大于 9 7 04 . 1 0 磺胺间甲氧啼陡标准品： 纯度均应大于 9 7 0 o 04 . 1 1 磺胺二甲基嗜咙标准溶液4 . 1 1 . 1 磺胺二甲基嗜吮标准贮备液 ： 准确称取 已知纯度的磺胺二甲基嗜陡标准品 1 0 0 m g ， 精确至0 . 0 0 0 1 g ， 置于一只 1 0 0 m l ， 棕色容量瓶中， 加 2 m l - N, N 一 二甲基酞胺（ 4 . 6 ) 及少量甲醇( 4 . 5 ) 超声使之完全溶解 ， 用 甲醇( 4 . 5 ) 定容至刻度， 摇匀， 该溶液中磺胺二甲基嗜陡浓度为 1 m g / m l ， 于冰箱 4 保存可使用 1 个月。免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 1 9 5 4 2 -2 0 0 44 . 1 1 . 2 磺胺二 甲基嚓陡标准中间液 ： 准确移取标准贮备液（ 4 . 1 1 . 1 ) 5 mL于一只 5 0 m L棕色容量瓶中， 用甲醇( 4 . 5 ) 定容至刻度， 该溶液中磺胺二甲基嚓吮的浓度为1 0 0 j .g / m L ， 于冰箱4 保存可使用半个月。4 . 1 1 . 3 磺胺二 甲基啥吮标准工作液 ： 准确移取标准中间液（ 4 . 1 1 . 2 ) 5 mL于一只 5 0 m L棕色容量瓶中， 用流动相（( 4 . 8 ) 定容至刻度， 该溶液中磺胺二 甲基嗜吮浓度为 1 0 j g / m L ， 当 日 使用。4 . 1 2 磺胺间甲氧略陡标准溶液： 配制过程同磺胺二甲基嗜咤。 注： 若同时测定两种磺胺可配制混合标准工作液。4 . 1 3 磺胺二甲基啥陡和磺胺间甲氧喻吮混合标准工作液 分别移取磺胺二甲基啥吮和磺胺间甲氧嗜咤标准中间液 5 m L于一只 5 0 m L棕色容量瓶中， 用流动相（ 4 . 8 ) 定容至刻度， 该溶液中磺胺二甲基啥陡和磺胺间甲氧啥吮的浓度均为1 0 j c g / m L ， 当日 使用。5 仪器5 . 1 实验室常用仪器设备。5 . 2 具塞锥形瓶， 1 5 0 m L ,5 . 3 振荡器。5 . 4 高效液相色谱仪： 配自动进样器、 紫外检测器（ 或二极管矩阵检测器） 。5 . 5 针头过滤器： 备孔径为 0 . 4 5 ti m（ 或 0 . 2 0 ti rn ） 微孔滤膜。6 试样制备 选取有代表性饲料样品至少 5 0 0 g ， 四分法缩减至 1 0 0 g ， 磨碎 ， 全部通过 0 . 2 8 m m孔筛， 混匀 ， 装人密闭容器中， 避光低温保存备用。7 分析步骤7 . 1 试样溶液的制备 称取饲料样品5 g （ 精确至。 . 0 0 1 g ） 置于具塞锥形瓶（ 5 . 2 ) 中， 加人1 0 0 m L的提取液（ 4 . 7 ) ， 于振荡器（ 5 . 3 ） 振荡提取 3 0 m i n ， 过滤， 滤液过 0 . 4 5 j .m滤膜（ 5 . 5 ) ， 待上机。7 . 2 色谱条件7 . 2 . 1 固定相具有 C , ： 填料的柱子（ 粒度为 4 l m) ： 柱长 1 5 0 m m， 内径 3 . 9 m m,7 . 2 . 2 流动相1 2 乙睛溶液（( 4 . 8 ) ， 以1 . 0 m L / m i n 流速洗脱。7 . 2 . 3 进样量2 0 t 1 . ,7 . 2 . 4 检测器紫外检测器（ 或二极管矩阵检测器） ， 检测波长 2 7 0 n m。 若单独测定 ， 磺胺二 甲基啼吮检测波长可选为 2 6 6 n m; 磺胺间甲氧嚓吮检测波长可选为 2 7 1 n mo8 定且测定 按高效液相色谱仪器说明书调整仪器操作参数。向色谱柱中注人磺胺二甲基嗜陡和磺胺间甲氧嗜陡标准工作液（ 4 . 1 3 ) 及试样溶液（( 7 . 1 ) ， 得到色谱峰面积响应值， 用外标法定量。9 结果计算9 . 1 试样中磺胺二甲基晦吮和磺胺间甲氧嚓吮的含量分别按式（ 1 ) 计算 ： P ; XVXc i xv W 二 一 兰 子 竺 止 三 二 立 二竺 “ 一 （1） P s X m X V ; 式中： W: -试样 中磺胺二甲基q吮或磺胺间甲氧啥咤的含量 ， 单位为毫克每千克（ m g / k g ) ;免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G B / T 1 9 5 4 2 -2 0 0 4 尸试样溶液峰面积值 ； V 样品的总稀释体积， 单位为毫升（ ml , ) ; 标准溶液浓度， 单位为微克每毫升（ t g / m L ) ; V s 标准溶液进样体积， 单位为微升（ t i ) P 7, 一 标准溶液峰面积平均值； m 一 一 试样质量 ， 单位