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119119 例慢性髓细胞白血病急变期核型分例慢性髓细胞白血病急变期核型分 析析(1)(1) 作者:朱雨,李建勇,潘金兰,吴炜,仇海荣, 吴亚芳,杨慧,张建富,陈丽娟,薛永权 【摘要】 为了探讨慢性髓细胞白血病急变期核型 变化规律及意义,应用 R 显带技术对 119 例 CML-BC 患者的 核型资料进行分析,并在其中随机选出 28 例以荧光原位杂 交法(FISH)检测衍生 9 号染色体der是否缺失。结果 表明:124 例核型检查中 Ph 阴性 11 例(%) ,Ph 阳性 113 例(%) ,其中典型易位 104 例(%) ,单纯变异易位 4 例 (%) ,复杂变异易位 5 例(%) ;Ph 阴性 CML-BC 中%伴有附 加染色体异常,主要类型是:i、14,Ph 阳性者%伴有附加染 色体异常,主要类型是:Ph、8、i;Ph 阴性 CML-BC 急变时 间为 2-66 月,平均月,Ph 阳性者急变时间为 1-127 月,平 均月,两组比较无统计学差异(P) ;FISH 检测发现 5 例 (5/28,%)der 缺失。结论:慢性髓细胞白血病急变期附加 染色体异常多见,FISH 技术可有效检测 der 缺失。 【关键词】慢性髓细胞白血病;慢性髓细胞白血病急 变期;核型分析;衍生 9 号染色体缺失 KaryotypeAnalysisin119PatientswithChronicMyeloidLeu ke-miaatBlastCrisis DepartmentofHematology,TheFirstAffiliatedHospitalof NanjingMedicalUniversity,JiangsuProvincePeopleHospi tal,Nanjing210029,China;1TheFirstAffiliatedHospital ofSoochowUniversity,JiangsuInstituteofHematology,Su zhou215006,China AbstractToinvestigatethekaryotypeofchronicmyeloidle ukemiainblastcrisis,karyotypeanalysiswasperformedwi thR-bandingtechniquein119patientswithCML- BC.Dualfusionfluorescenceinsituhybridizationwasused todetectderivativechromosome9deletionsinrandomlysel ected28casesofthem.Theresultsshowedthat11caseswereP hnegative;113caseswerePhpositive;104caseshadstandar dPhtranslocation;9casesshowedvarianttranslocation,i ncluding4caseswithsimplevarianttranslocationand5cas eswithcomplexvarianttranslocation.%ofPhnegativeCML- BChadextrachromosomalabnormalities,withthemostcommo nonesbeingiand14.%ofPhpositiveCML- BChadextracytogeneticchangesandPh,8,iwerethemostfre quent.Theaveragetimebetweendiagnosisandblastcrisisw asmonthsforPhnegativecasesandmonthsforPhpositivecas es.5caseswithderdeletionsweredetectedbyFISHtechniqu e.Itisconcludedthatextrachromosomalabnormalitiesare commoninCML- BCpatientsandFISHcaneffectivelydetectthederdeletion s. keywordschronicmyeloidleukemia;CML- BC;karyotypeanalysis;derivativechromosome9deletion 慢性髓细胞白血病(CML)是一种起源于多能造血干细 胞的血液系统恶性疾病,占白血病总数的 15%-25%,Ph 染 色体被认为是 CML 的特异性标志。在临床上患者一般在确 诊 2-5 年内由慢性期进展到急变期(blastcrisis,BC) ,慢 性期时对化疗反应良好,进入急变期后化疗有效率不超过 30%,生存期短,预后极差。CML 病程中出现新的染色体异 常克隆预示急变已得到广泛认可,进入急变期后附加染色 体出现频率高、种类多,本研究对 119 例进入急变期的 CML 患者的核型进行了分析。 材料和方法 病例来源 119 例 CML-BC 患者,其中男 85 例,女 34 例,男女比 为1,中位年龄岁。CML 诊断及分期标准参照张之南主编 的血液病诊断及疗效标准 (第二版) 1 。所有 119 例 患者均行常规核型分析,其中随机选取 28 例标本作荧光原 位杂交(FISH) ,以检测是否有衍生 9 号染色体der缺 失,取 5 例正常人骨髓作对照。 核型分析 119 例患者中有 5 例在 CML-BC 期做了 2 次染色体检查, 共有 124 例次核型资料,其中 51 例核型变化资料为定期复 诊患者从初发病到急变及继续治疗后的核型变化资料。在 上述 51 例中 4 例急变后行异基因造血干细胞移植。全部病 例均采用直接法及不加植物血凝素的短期培养法制备染色 体标本,然后采用改良的热处理姬姆萨 R 显带技术分析 20- 40 个分裂中期细胞核型,并参照人类细胞遗传学国际命 名体制ISCN 加以描述2 。 荧光原位杂交 取出-20冰箱内保存的 R 显带后细胞,换用新鲜的甲 醇/冰醋酸(31)固定液,气干法滴片,在普通光学显微 镜下找到中期细胞。372SSC 中老化 30 分钟,依次以 70%、85%、100%的乙醇梯度脱水,每梯度 2 分钟。72甲 酰胺中变性 2 分钟,再 70%、85%、100%冰乙醇梯度脱水, 每梯度 2 分钟,晾干。暗环境中取 BCR-ABL 双色双融合 DNA 易位探针 l、双蒸馏水 l、杂交稀释液 l 于 Eppendorf 管中,离心、混匀,72水浴变性 5 分钟。每杂 交区加 10l 上述反应液,盖上玻片并封胶 4 周。标本置 于湿盒杂交 16-18 小时(37) 。杂交后移去盖玻片,72% triton/SSC 洗液中洗 2 分钟,再于%triton/2SSC 中洗 1 分钟。晾干后每杂交区加 6lDAPIII,盖上玻片,暗盒 中复染 45-60 分钟。LeicaDMRA2 荧光显微镜在 DAPI/FITC/TexasRed 三色滤光镜激发间期细胞荧光杂交信 号:绿色荧光信号为 BCR 及(或)其断裂信号,桔红色荧 光信号为 ABL 及(或)其断裂信号,黄色为融合信号。每 例计数 500 个间期细胞,不计数重叠细胞。典型 t 为 1 红 1 绿 2 融合,其中期细胞可见 Ph 染色
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