高胰岛素和高血糖对糖尿病患者igf2bp2基因表达的影响

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 高胰岛素和高血糖对糖尿病患者 IGF2BP2 基因表达的影响 摘要 目的 研究胰岛素量与血 糖量对 1 型和 2 型糖尿病的患者 IGF2BP2 基因表达的影响。方法 自白 细胞提取总 mRNA，作为模板进行反转 录得到 cDNA，以 Real-Time PCR 方法 测定目的基因的表达量。 结果 测定了 18 例型糖尿病患者、25 例 2 型糖尿 病患者和 20 名正常人中的 IGF2BP2 基 因表达量。 结论 该研究在型和 2 型 糖尿病的患者、正常人群中测定了 IGF2BP2 基因的表达量水平，发现胰岛 素值低、血糖高的 1 型糖尿病组的 IGF2BP2 基因表达正常，胰岛素与正常 组无差异、血糖高的 2 型糖尿病组 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 IGF2BP2 基因高表达，推测胰岛素值、 血糖值与 IGF2BP2 基因无直接联系， 但是 IGF2BP2 可能与胰岛素抵抗有关。 中国论文网 /6/view-12964509.htm 关键词 IGF2BP2 基因；胰岛素； 血糖 中图分类号 R587.1 文献标识 码 A 文章编号 1672-4062（2017） 04（b）-0024-02 Abstract Objective To research the effect of insulin dose and blood glucose dose on the IGF2BP2 gene expression of type 1 diabetes patients and type 2 diabetes patients. Methods The total mRNA was extracted by white cell as templets for reverse transcription thus obtaining cDNA， and the expression level of target gene was measured by the Real-Time PCR method. Results The IGF2BP2 gene expression levels of 18 cases of patients with type 1 diabetes， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 25 cases of patients with type 2 diabetes and 20 cases of normal people were measured. Conclusion The measurement shows that the IGF2BP2 gene expression in the type 1 diabetes group with low insulin value and high blood glucose is normal， and there is no difference in the insulin compared with the normal group thus speculating that the insulin value， blood glucose value have no direct correlation with the IGF2BP2 gene， but the IGF2BP2 may be related to the insulin resistance. Key words IGF2BP2 gene； Insulin； Blood glucose 近年恚 随着平均寿命延长， 生活习惯和饮食结构变化，国人糖尿病 的发病率逐年增加。近 10 年来，通过 常见病与候选基因关联各种研究，研究 人员发现了一些和糖尿病发病率增加密 切相关的具有多态性的基因1，其中就 包括 IGF2BP2（胰岛素样生长因子 2 结 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 合蛋白 2） ，在不同类型糖尿病患者中， IGF2BP2 基因的表达量有很大差异。因 此，在各常见类型糖尿病的患者和正常 人中，该研究对 IGF2BP2 基因的表达 量进行测定，研究 IGF2BP2 基因表达 量水平与胰岛素量、血糖量的联系，以 期在基因水平对各型糖尿病的发生机制 进行了探索，现报道如下。 1 材料与方法 1.1 材料 样本由长沙市第四医院提供，为 临床确诊的型、2 型糖尿病患者血样， 已征得本人同意。正常人血样采自非糖 尿病的捐献者。以常规抽血检验的方法 检测的空腹胰岛素（FINS） 和空腹血 糖量（FPG） ，核算胰岛素抵抗值，胰 岛素抵抗值计算公式为：HOMA-IR = FPGFINS/22.5。 1.2 试剂与仪器 PCR 产物纯化试剂盒、Trizol Reagent、RNase、Oligo dT（Invitrogen 公司产品） ；Power SYBR Green PCR -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 Master Mix、Taqman Universal PCR Master Mix 试剂盒（ABI 公司产品） ； Sensiscript RT 试剂盒（QIAGEN 公司产 品） ；其余反应中所用试剂均为分析纯。 实时荧光定量 PCR 仪（ABI 公司产品） 。 1.3 引物和探针设计 引物为 5- CACCGGAAGCCCAGTTCAA-3和 5-CCACCTTTGCCAATCACCC-3； 探针序列为 5- TGAAGCTGGAAGCGCATATCAGAG- 3。引物和探针皆由上海生工生物工程 技术公司合成。 1.4 样本总 RNA 提取 取血样 23 mL，使用 Trizol Reagent 提供的方法提取血液中白细胞 的总 RNA，提取的 RNA 含量用紫外分 光光度仪进行测定，OD260/280 在 1.82.0 之间，-80保存待使用。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 1.5 样本 cDNA 合成 取 0.2 g 样本总 RNA 与 Sensiscript RT 试剂盒中逆转录试剂进 行反应；将反应体系都放在 37孵育 60 min，生成的 cDNA 置于 -20保存待 使用。 1.6 样本 IGF2BP2 基因表达量的 检测 以样本总 cDNA 作为模板， 按照 Taqman Universal PCR Master Mix 试剂盒说明备好反应体系，在 ABI Prism 7300 实时荧光 PCR 仪中进行反应， 测定样本中 IGF2BP2 基因表达量。通 过反应物梯度稀释和 Real-Time PCR 构 建基因定量标准曲线，通过标准曲线对 样本中的 IGF2BP2 基因表达量进行确 定。每次测定时，待测基因均与持家基 因 GAPDH 同时进行反应，以确保数据 的可信性。 1.7 统计方法 该课题中，以 IGF2BP2 基因的 表达量/GAPDH 的表达量作为目的基因 的表达量。利用 SPSS 10.0 统计学软件 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 进行分析，3 组数据差异的比较采用单 因素方差分析；P0.05 为差异有统计学 意义。 2 结果 型、2 型糖尿病患者数据都是 与正常对照组比较，型糖尿病组的空 腹胰岛素值显著低于正常组（P0.05） ， 2 型糖尿病组均值高于正常组，但是差 异无统计学意义。型、2 型糖尿病患 者的空腹血糖值显著高于正常对照组 （P0.05） 。利用实时荧光定量 PCR 方 法来测定 IGF2BP2 基因在样本中的表 达量，并使用持家基因 GAPDH 进行校 正，2 型糖尿病组的 IGF2BP2 基因相对 表达量显著高于对照组，型糖尿病组 未见表达量增高（见表 1） 。综合 3 组数 据，可以看出仅 2 型糖尿病患者 IGF2BP2 基因表达量增加，这一现象与 胰岛素量和血糖量并无直接对应关系。 核算了各组的胰岛素抵抗值，2 型糖尿 病组胰岛素抵抗值显著增高于另外两组， 其均值为正常组的 2.56 倍，IGF2BP2 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 基因相对表达量也高于型糖尿病组和 正常组，推测两者可能具有相关性。 3 讨论 极少数特殊类型的糖尿病是单基 因疾病，但大部分 2 型糖尿病是与胰岛 素抵抗和 B 细胞分泌障碍而导致高血糖 的复杂多基因病，其发病机制至今未完 全阐明。遗传因素在 2 型糖尿病的产生 中起重要作用，但同时还受到诸多环境 因素影响。2 型糖尿病是种复杂多基因 疾病，具备多基因病的特点参与发 病的遗传因素为多个，每个基因对发病 影响大小不同，大多数基因作用小；疾 病的最终发生是各基因作用的综合结果 2。IGF2BP2 也是 2 型糖尿病的相关基 因之一，经过该课题组实验，2 型糖尿 病患者的 IGF2BP2 基因表达量高于正 常对照组，型糖尿病患者的该基因却 表达不高，经过检测，发现胰岛素值低、 血糖高的型糖尿病组 IGF2B P2 基因 表达正常，胰岛素与正常组无差异、血 糖高的 2 型糖尿病组 IGF2BP2 基因高 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 9 表达，推测胰岛素值、血糖值与 IGF2BP2 基因无直接正相关或者负相关， 但是不管哪一组，胰岛素抵抗值却和 IGF2BP2 基因表达量同升同降，可能存 在一定的联系。