医学ppt课件大全蛋白质电泳

蛋白质电泳 在蛋白质组学中的应用 罗元明 中科院微生物所原 理 蛋白质分子在溶液中由于其末端氨基、末端 羧基及侧链的游离基团而成为带电颗粒，并 可在电场内移动，其移动方向取决于蛋白质 分子所带静电荷。不同蛋白质分子根据其氨 基酸组成及所在溶液的pH值，携带的静电荷 不尽相同，致使它们在电场中的迁移率各异 ，从而达到分理的目的。电泳原理示意图在蛋白质组学中对电泳的分类 一维电泳(one dimensional gel electrophoresis, 1DE)，现在普遍采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳 （PAGE） 二维电泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2DE)，又称双向电泳一维电泳 现在普遍采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），包 括非变性电泳(native PAGE)和SDS-PAGE两种，前 者主要是在分离蛋白复合物时经常用到。后者是 在凝胶与缓冲系统中加入阴离子表面活性剂十二 烷基硫酸钠（SDS），蛋白质分子被大量SDS阴离 子包裹，消除了它们间原来携带的电荷差别，因 而其迁移率仅反映蛋白质分子大小，故广泛用于 蛋白质分子量的测定。凝胶浓度和蛋白质分离范围 凝胶种类 分离胶浓 度 （T） 浓缩胶浓 度 （T） 交联度 （C%） 最使分离 范围 （KD） 应用 Tris- glycine gels 7.5 10 12 15 415 420 1020 4 4 4 4 4 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 65200 21200 14100 6.5200 40200 6.5200 6.5200 SDS-PAGE Tris-tricine gels 16.5 16 10-20 4 10 4 3.3 3 3.3 2.0-70 3.5-31 2.0-120 肽、小蛋白 质缓冲液的选择 通常在SDS-PAGE均选择Tris - glycine作为电泳的缓 冲系统。但在大部分缓冲系统中，SDS微团 (micelle)会干扰小分子蛋白质的分离，而Tris - tricine系统则可使小蛋白质SDS复合物与微团分 离，去除干扰。此外，也证明该系统对脂多糖和 脂寡糖混合物的分离有效。12%胶常用的低分子量标准蛋白 名称 来源 分子量 磷酸化酶B 兔肌肉 97400 牛血清白蛋白 牛 66200 卵清蛋白 鸡蛋清 45000 碳酸酐酶 牛 31000 胰蛋白酶抑制剂 大豆 21500 溶菌酶 鸡蛋清 14400一维凝胶染色 现在用于凝胶中蛋白染色的方法包括氨基黑10 、考马斯亮蓝R250、考马斯亮蓝R350、银染 、铜染及橙染(sypro orange)。最常用的为考 马斯亮蓝R250、考马斯亮蓝R350染色，为了 提高灵明度采用银染。一维电泳的应用 初步测定蛋白质的分子量 初步分离蛋白质复合物，并进一步用于免疫 组化分析 对重组表达蛋白的初步鉴定 将一维电泳和生物质谱相结合，达到对较简 单蛋白复合物的分离和鉴定一维电泳在蛋白质组研究中的 应用举例 我们将一维电泳和LC-Ms/MS结合，成功进行如 下研究： (1)血浆蛋白质组研究 (2)SARS病毒蛋白的分析鉴定,成功鉴定了SARS病 毒的S蛋白、N蛋白和E蛋白，有力推动了我国第 一个SARS疫苗的研究和申报工作。双向电泳(2DE) 原理：2DE就是第一向采用等电聚焦分离， 第二向为SDS-PAGE分离。由于2DE是依据 蛋白质的两种不同性质，即等电点和分子量 进行分析，因此分辨率远高于其他任何一种