细菌鉴定流程.ppt

1、Group members:,环境微生物的检测,受试菌初步鉴定报告,CONTENTS,分离环境,2015年,手指表面,生科院2019室,受试菌的采集步骤： 在酒精灯火焰旁，半开皿盖，用手指（洗手前）在平板上轻轻按一下，迅速盖上皿盖。,形态及理化特征,菌落形态,在培养基上呈黄色菌落。菌落圆形，凸起，光滑且有光泽，边缘整齐。,形态特征：菌落特征,形态及理化特征,显微特征,圆球状，无鞭毛且不可运动,形态特征,鞭毛染色,1、步骤 制片：滴菌液倾斜玻片室温干燥 染色：A液3-5min水洗B液冲残水，覆盖染色出现明显褐色时轻轻水洗晾干 2、结果 受试菌无鞭毛不可运动,形态及理化特征,革兰氏染色,形态特征,

2、1、步骤 制片：载玻片：火烧去脂水滴：小菌：少(薄而均匀) 染色：滴加结晶紫染液初染2min水洗冲残水后滴加卢戈氏碘液媒染1min水洗吸残水后滴加95%乙醇脱色约30s滴加沙黄染液复染1-2min水洗吸干水，镜检 2、结果 受试菌为革兰氏染色阳性菌,G+（金黄色葡萄球菌）,受试菌,G-（大肠杆菌）,形态及理化特征,TITLE TITEXT,枯草芽孢杆菌,淀粉水解实验,大肠杆菌,1、步骤： 固体淀粉培养基划线接种37培养24h滴加碘液（均匀铺满平板）观察 2、结果： 受试菌周围未出现无色透明圈 说明不能分泌胞外淀粉酶,受试菌,理化特征,形态及理化特征,变形杆菌,糖发酵实验,大肠杆菌,1、步骤 葡

3、萄糖发酵半固体培养基（含指示剂溴甲酚紫）穿刺接种37培养2448h观察培养基颜色和是否产生气泡 乳糖发酵半固体培养基（含指示剂溴甲酚紫）穿刺接种37培养2448h观察培养基颜色和是否产生气泡 2、结果 受试菌在培养基中生长，但葡萄糖和乳糖半固体培养基均为紫色，且未裂开，说明受试菌进行葡萄糖和乳糖发酵均不产酸不产气,受试菌,理化特征,变形杆菌,大肠杆菌,受试菌,葡萄糖,乳 糖,形态及理化特征,氨苄青霉素抗性实验,1、步骤 氨苄青霉素滤纸条垂直接种培养观察、测量滤纸条距菌起始位置的距离 2、结果 受试菌对青霉素敏感,理化特征,抑菌长度 （cm）,形态及理化特征,API20NE试剂条检测,1.试剂条

4、接种和培养 a)选择菌落（先确定是否为单一纯菌株） b)向培养盒中加入少许无菌水（保持湿度） c)挑取单菌落至2mL0.85%NaCl(aq)（已灭菌）中，使菌浓度达到0.5个麦氏单位标准浊度。用同一枪头分别接种盐水菌悬液从NO3到PNPG试剂管（120L/管）。 d)将剩余的200L生理盐水菌悬液加至APIAUX培养基，仔细混匀，注满由GLU至PAC管（250L/管）。 e)GLU,ADH,URE三个管用矿物油覆盖 f)将API 20E STRIP放入盒中，盖上盒盖，在30培养24h。,理化特征,2.试剂条的结果观察 a)培养后，将一滴NIT 1和NIT 2试剂进入到NO3中，5min后，红

5、色表示阳性反应；阴性反应的，为排除N2的影响，加入锌粉5min，无色表示阳性反应。 b)将JAMES试剂加入TRP，立即显现粉红色为阳性反应 c)其他见实验结果判定表,形态及理化特征,API20NE试剂条检测,理化特征,（24h，30）,（48h，30）,形态及理化特征,API20NE试剂条检测,理化特征,结果,形态及理化特征,API20NE试剂条检测,理化特征,“0050202”,16sRNA基因PCR结果及网上比对结果,16sRNA 基因PCR结果,GCGTGCTTACCATGCAGTCGAACGATGAAGCCCAGCTTGCTGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAAC

6、ACGTGAGTAACCTGCCCTTAACTCTGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATAGGAGCGCCCACCGCATGGTGGGTGTTGGAAAGATTTATCGGTTTTGGATGGACTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCC

7、TTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGTAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCTGTCGTGAAAGTCCGGGGCTTAACCCCGGATCTGCGGTGGGTACGGGCAGACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGATGGCGAAGGCAGGTCTC

8、TGGGCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCATGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGTTGGGCACTAGGTGTGGGGACCATTCCACGGTTTCCGCGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATGTTCTCGATCGCCGTAGAGATACGGTTTCCCCTTTGGGGC

9、GGGTTCACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGTTCCATGTTGCCAGCACGTCGTGGTGGGGACTCATGGGAGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGAGGACGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAATGGGTTGCGATACTGTGAGGTGGAGCTAATCCCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTC

10、GGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCACGAAAGTTGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCTAACCCTTGTGGGGGAGCCGTCGAAG,16sRNA基因PCR结果及网上比对结果,网上比对结果,最相似菌种名Micrococcus luteus 最高相似度99.00%,结果与分析,由16sRNA基因检测结果与数据库对比与Micrococcus luteus 最高相似度99.00% 从伯杰氏手册查的藤黄微球菌的特征为： 球菌，直径为1.0-2.0微生，细胞单生，对生

11、和向几个方向分裂而形成四联体、不规则的堆团或规则的立方堆形。不运动。生成四联或不规则细胞堆团的菌株形成光滑、凸起并具有整齐边缘的菌落。形成立方堆菌株表面常呈现颗粒状和无光泽。菌落黄色、黄绿色或橙色，有些菌株形成一种能扩散到培养基内的紫色素。在液体培养基中浑浊均匀，随之变清，产生一些细的像颗粒状或粘液状的沉淀。 通常从碳水化合物中不产生可察觉的酸，在葡萄糖培养液中最终PH值在6.4-8.2.含碳化合物包括乙酸盐、乳酸盐、丙酮酸盐、琥珀酸盐、果糖、半乳糖、葡萄糖、甘油、麦芽糖、蔗糖，都可氧化为水和二氧化碳。对甘露醇、山梨醇、阿拉伯糖、鼠李糖、核糖、木糖和淀粉的氧化作用都是可变的，不能氧化卫矛醇。,

12、藤黄微球菌 Micrococcus luteus,结果与分析,藤黄微球菌 Micrococcus luteus,可以水解蛋白质、多肽和脂肪。通常不水解精氨酸。通常不还原硝酸盐。有些菌株能生长在含有丙酮酸（作为碳源和能源）、谷氨酸、生物素和无机盐的培养基上。另一些菌株需要含某些氨基酸更复杂的培养基。 专性好氧，最适生长温度约为35。大多数菌株可在10生长，有些在45生长。能在5%NaCl生长，但不常在10%或15% NaCl中生长。大多数菌株对溶菌酶和新生素敏感。对植物和动物不致病。通常存在于土壤、灰尘、水、人和其他动物皮肤上。 建议新的模式菌株： CCM 169;ATCC 44698;NCTC 2665.,结果与分析,分析,由于API的结果查询需要付费应此因此没有得到其结果，根据16sRNA的查询结果，对比受试菌与藤黄微球菌两则的基本特征，发现都吻合顾初步判定受试菌即为藤黄微球菌。,参考文献,NCBI Blast 百度百科 Wikipedia 中国科技资源共享网 伯杰氏系统细菌学手册 沈萍 陈向东主编微生物学实验（第4版） Peter Ka mpfer, Holger C. Scholz, Birgit Huber, Enevold Falsen and Hans-Ju rgen Busse. Ochrobactrum haem