基因工程试题及答案全集

1、作业1:一、名词说明：1.基因：遗传物质的基础，是脱氧核糖核酸(DNA)分子中有遗传信息的特定核苷酸序列的统称，有遗传效应的DNA分子片段。2.基因组是指单倍体细胞中所有的DNA分子，包括编码序列和非编码序列。3、操作员：原核生物的多种功能相关结构基因经常排列在一起，转录mRNA，然后分别翻译成多种蛋白质。这些蛋白质可以是催化一代谢过程的酶，也可以一起完成某些功能。这些结构基因与上游的启动者一起形成了操作基因，以及一个被称为操作者的转录单位。4，启动子：是RNA聚合酶结合点周围的一组转录控制组件，至少包括一个转录起点。在真核基因中，扩增和启动子往往交错或连续。有时，结构紧密连接，无法区分的启动

2、子，改进的子样品结构统称为启动子。5，强化器：是提高转录效率的纯食调节因子，是在SV40病毒中发现的约200bp的DNA，将旁边的基因转录提高了100倍，之后在各种真核生物，甚至原核生物中也发现了扩增器。加固器通常占用100200bp长度，由多个组件组成，如启动子。基本核心组件通常为8-12 BP，可以以单复制或多复制连接的形式存在。6.基因表达：是指细胞在生命过程中转录和翻译存储在DNA序列中的遗传信息，使其变成生物活性蛋白分子。第二，简单的回答1、说明限制性内切核酸酶命名原则的要点。答：限制性内切核酸酶加上3个字母的命名原则，即名宗名周名字的首字母和序列号。基本原则： 3-4个字，方法是：

3、名钟明主的名字编号。首字母：取名字的首字母，斜体大写。第二个字母3360种名字的第一个字母，斜体小写；第三个字母3360 (1)宗名的第二个字母，斜体小写；(2)宗明有暗，限制酶命名，取暗后第一个字代替。如果4个字：有周名，周名为4个字，大小写不变，根据原来的情况，停滞不前。序号：如果从同一菌株中分离出一些限制性酶，2、限制性内切核酸酶的星号活性是什么？受哪些因素影响？答：II类限制酶的识别和切割序列都具有特异性，但这种特异性受到特定条件的限制，即在特定环境条件下出现的特异性。条件的变化，限制酶的特异性松动，识别的序列和切割有一些变化，变化的活性一般称为第二活性，由于这种条件的变化，第二活性在

4、第二活性酶的右上角加上星号标记，因此第二活性也称为星号活性。(圣雄甘地，活性，活性，活性，活性，活性，活性，活性)总之，导致恒星活动的因素包括：(1)高甘油含量(5%，v/v)；(2)限制性内定酶用量过高(100u/UG DNA)；(3)低离子强度(25 mmol/l)；(4)高pH(8.0或更高)；(5)含有DMSO、乙醇等有机溶剂。(6)非Mg2的二价阳离子存在，例如Mn2、Cu2、C02、Zn2等。3，DNA连接酶催化连接反应的影响因素是什么？答案：(1)DNA纯度(2)DNA甲基化的程度(3)酶消化反应的温度(4)DNA的分子结构(5)核酸内切酶的缓冲液4，Klenow酶是什么？有什么

5、活动？在基因工程中起什么作用？答：Klenow酶是1974年Klenow用高醋酸蛋白酶水解DNA聚合酶I得到的两个片段，其中大片段的分子量为75kDa，具有5-3聚合酶和3-5外核酸酶的活性，小片段具有5-3外核酸酶活性。大块的DNA聚合酶I失去了分解5讲义的5-3外核酸酶的活性，因此对基因工程更有用。Klenow酶主要用于：(1)修复反应，准备平端您可以使用Klenow酶修复限制性内切酶或其他方法生成的5-3个挤出端，从而形成平端，使具有本来不兼容的粘性端的DNA片段通过平端重组。如果反应系统中有添加了放射性同位素标记的脱氧核苷酸(deoxynucleotide)，就可以用此端填充的方法准备

6、3段标记的探针。用Klenow酶修复5个挤出端的反应主要是利用Klenow酶的DNA聚合酶活性来填充反应。恢复3挤出终点是使用Klenow酶的3-5外切核酸酶的活性，是切割反应。用Klenow酶的切割反应修复3个突出端是不可取的。改用T4DNA聚合酶或其他酶更好。(2)标记DNA3伸出项终点这个反应分两个阶段进行。首先用3-5的外核酸酶活性去除突出的一端，制作3个暗示说端，然后有高浓度的指示物(-32p-dNTP)存在，分解(3-5)作用和聚合(5-3)作用就平衡了这种反应，即交换或替代反应(exchange/replate)但是这个反应用T4DNA聚合酶更有效。因为3-5外核酸酶活性强。(3

7、)其他用途：DNA序列分析、cDNA二次链合成、从点突变合成二次链、用引物扩展法制备单链DNA探针等。5.细菌碱性磷酸酶和小牛肠碱性磷酸酶的区别是什么？在基因工程中有什么用？答：主要区别在于CIP68C停用时，BAP68C稳定，耐酚提取。应用：(1)dsDNA的五段脱磷防止DNA的自身连接。但是用CIP处理后，最好在去除CIP后进行连接反应。(2)用DNA、RNA脱磷和多核苷酸激酶做末端标记。(。三、论述问题1.如果你知道某个基因的功能和相应蛋白质的氨基酸序列，你可以用什么方法克隆那个基因呢？答：可以通过合成核苷酸探针或简单的PCR引物在cDNA文库或基因组文库中筛选。或者使用相应的抗体从cD

8、NA表达库中过滤相应的克隆。作业2:一、名词说明：1.基因工程：在体外切割外源基因，连接到一定的载体，重组DNA分子，引入相应的受体细胞。外源基因可以在受体细胞中复制、表达，使目的基因大量扩增，获得该基因的表达产物，或创造定向重组生物学特性。简单总结，是外源目的基因和载体重组后进入宿主细胞的过程。2.载体：是一种可自我复制的DNA分子，它可以承载微量物质，并参与任何化学或物理过程，在基因工程重组DNA技术中，将DNA片段(目的基因)转移到受体细胞。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体、动植物病毒。3.转换：是指把质粒或其他外源DNA导入感觉状态的宿主菌，获得新的表型的过程。4.感染：利用噬菌体将

9、外源DNA导入宿主细胞的方法。5.转基因：噬菌体将一个细胞的基因转移到另一个细胞的过程。在细菌之间传播。传递遗传物质的方法之一。其具体意义是指一个细胞的DNA或RNA通过病毒载体。感染转移到其他细胞。6.转染：是指真核细胞积极摄取或被动获取外源DNA片段，获得新表型的过程。常用的方法有电穿孔法、磷酸钙共沉淀法、脂质体融合法等。第二，简单的回答1，YAC向量有哪些功能性DNA序列？复制大块时，YAC为什么优越？答：YAC具有天然染色体的所有功能成分，包括一个丝粒、DNA复制起点和两个端粒。YAC可以容纳数百kb的外源DNA，这是质粒和粘粒无法做到的。大块的插入更有可能包含整个基因，在染色体移动中

10、一次允许更大的阶段移动距离的同时，减少了整个基因组库所需的克隆数量。2，列举质粒载体应具有的四个基本特性。A: (1)独立复制；(2)有复选标记。(3)有独特的酶切部位。(4)可以转换，但不会扩散。3，PCR的基本原理是什么？要使用PCR扩增基因，需要提前获得哪些信息？答：)DNA半保存复制的原理在体外进行DNA的变性、复性和引物扩张。(2)要事先知道足够的目标DNA序列，才能合成至少一对讲义。(。4、cDNA克隆和基因组克隆有什么区别？答：基因组克隆包含所有不会出现在cDNA中的内含子。5、如何将平头端DNA片段插入EcoR I限制点？答：在10bp中化学合成具有EcoRI识别点的短DNA片

11、段，然后连接到要克隆的段的两端，使用EcoRI截断此连接段会生成EcoRI的单链末端。这块可以插入EcoRI的限制性内切酶部位。三、论述问题什么是Western印章？和Southern印章有什么不同？答：韦斯特恩印章是通过电泳分离蛋白质，然后从凝胶转移到固相支持物，再用特异性抗体检测。与Southern不同，Western印章上使用的探针与称为抗体(蛋白质)的探针性质不同。任务3:一、名词说明1.DNA变性：DNA分子从稳定的双螺旋结构松弛到不规则线性结构的现象。变性时，维持双螺旋稳定性的氢键断裂，碱基之间的累积力被破坏，但不包括初级结构的变化。2.DNA复性：变性DNA是在适当的条件下，两个

12、互补链全部或部分恢复为天然双螺旋结构的现象，是变性者的逆转过程。3.退火：模板双链DNA经过热变性，螺旋解成单链，然后慢慢冷却到55左右，引物(即具有互补碱基的RNA片段)与模板DNA单链重新配对，形成新双链分子的过程。4、DNA芯片：在固相支撑物上原位合成核酸，或者将大量DNA探针有序地固定在支撑物表面，然后与显示的样品杂交，通过杂交信号的检测分析，可以获得样品的遗传信息。常用的计算机硅芯片被称为DNA芯片，因为它用作固相支撑物。5.错误的突变：碱基置换的结果引起氨基酸顺序的变化。6.基因诊断：又称DNA诊断或分子诊断，通过分子生物学和分子遗传学技术直接检测分子结构水平和表达水平是否异常，对

13、疾病做出判断。第二，简单的回答什么是蓝色白斑筛选？答：这种方法是根据组织学原理筛选重组体。主要在L载体的非必需区域插入具有大肠杆菌B-反乳糖酶的基因片段，携带lac基因片段的L载体转移到lac的宿主菌，并含有5-溴-4-氯-3-因林多-B-D-反乳糖(X-gal)外源基因插入人类lac(或lac基因部分被替换的话)后重组的噬菌体失去了分解X-gal的能力，转入lac-宿主菌后含有5-溴-4-氯-3-林道-B-D-半乳糖。2、什么是基因库？利用重组DNA技术，将特定生物细胞的总DNA或染色体DNA的所有片段随机连接到基因载体上，然后转移到适当的宿主细胞，通过细胞增殖，准备构成每个片段的无性生殖系

14、统(克隆)。如果准备足够多的克隆数以包含某一生物的所有基因，那么这个克隆组的全部称为某一生物的基因文库。3、粘性末端连接法是最常用的连接方法，有很多优点，但也有一些不足，请指出这些不足之处。答：粘性末端连接方法的缺点包括：(1)载体容易自行循环。(2)由同一限制性内切核酸酶产生的粘性末端连接不容易定向复制。(3)插入特定基因是困难的。(4)此外，大DNA片段重组率低。也就是说，使用碱性磷酸酶处理载体，防止载体自身循环化，载体也有环的倾向。(5)以这种方式生成的重组体经常包含一个或多个外源片段，或连接了一个或多个载体的串行重组体，增加了过滤操作的难度。4、什么是同伦聚合物加尾连接？用什么方法贴尾

15、巴？有什么优缺点？答：智人法是利用末端转移酶，在载体和外源双链DNA的3端添加一段寡核苷酸，形成人工粘性末端，外源DNA和载体DNA分子分别添加dA(dG)和dT(dC)等其他寡核苷酸，然后在DNA连接酶的作用下连续重组。该方法的核心是利用末端转移酶的功能将核苷酸转移到双链DNA分子的挤出或隐蔽的3-OH。使用Mg2作为辅助因子，可以在挤出的3-OH端添加一个单个核苷酸，使用Co2作为辅助因子，可以在隐蔽端或平面端的3-OH端添加一个单个核苷酸。共聚物加味法实际上是人工粘性末端连接法，具有很多优点.(1)首先自我循环不容易。因为同一DNA两端的尾部是相同的，所以没有磁循环。(2)载体和外源段的

16、末端是互补的粘性末端，因此连接效率高。(3)用任何方法准备的DNA，都可以用这种方法连接。(。均聚物和尾巴法也有一些不便。(1)方法麻烦。(2)外源片段难以回收。添加很多同源性基因的尾部会影响外源基因的表达。另外，也要注意，同伦聚合物和尾巴法与平端连接法一样，重组连接通常会产生限制性内核氧化酶的触点。5、什么是接头连接？答：通过将人工合成或源于现有质粒的小DNA分子(这些小DNA分子具有限制性内核核酸酶的识别序列)添加到载体或外源DNA的分子中，在载体DNA和外源DNA中创建新的酶接触。这种包含酶接触的小DNA分子称为连接器分子，这种方法称为连接器连接法。三、论述问题1、基因组文库是什么？基因组文库构建涉及的基本过程是什么？与遗传学的基因库有何不同？答：基因组文库是利用基因工程包含某种生物基因组DNA不同片段的克隆组。一般以改造后的噬菌体DNA或黏土作为载体，(1)制备高分子染色体DNA；(2)体外重组连接；(3)包装蛋白的制备；(4)重组体的体外包装；(5)重组DNA刘涛宿主细胞；(6)审查。基因组文库是与遗传学中所说的基因库完全不同的概念。基因银行(gene pool)是指在有性生殖的一个群体中，能够生殖的个人所包含的全部遗传信息。由于基因组文库构建中使用的载体不同，因此分为噬菌体载