霍乱弧菌检测ppt课件

1、霍乱弧菌的取样和检查，宁波市疾控中心微生物检查和杨元斌、开黄、霍乱弧菌(V.cholera)是人类霍乱的病菌，霍乱是古老而广泛流行的毒传染病之一。在世界上引起过多次(第七次)大流行。主要表现为严重呕吐、腹泻、脱水，死亡率很高。属于国际检疫的有毒传染病。病原学，霍乱弧菌属于非布里奥，革兰染色阴性杆菌体短，稍弯曲，两端为钝圆，长1 . 52 . 0米，宽0 . 30 . 4米。菌体末端有鞭毛，运动非常活跃，在深色视野显微镜下像流星一样运动，培养温度37最合适，容易在碱性(PH8.89.0)肉汤或蛋白质培养基中生长。霍乱弧菌染色照片，革兰染色，鞭毛染色，分裂和分类：O根据抗原的特异性，霍乱弧菌可以分

2、为139个血清组。根据与O1抗血清的凝集，O1军霍乱弧菌：可以与O1军港血清凝集的非欧比非欧比非欧比非欧比非欧比非菌：凡不与O1军港血清凝集的人。O1群霍乱弧菌的生物型，1，经典生物型(前6次大流行)2，E1 Tor生物型(第7届1961年)。两种生物型具有相同的血清型。我国流行El Tor cholerae Vibrio。郑智薰O1霍乱弧菌，O139军霍乱弧菌，1992年在印度马德拉斯，泰米尔纳德市发生的霍乱传染病，分离的菌株与O1军霍乱血清没有凝集，但引起了O1军霍乱的典型症状。引起世界卫生组织的重视，被定为O139军霍乱弧菌，被认为是下一次霍乱大流行的主人公。O139的生物学特性：生化特

3、性与O1菌基本相同。含有O1组霍乱弧菌等毒性基因，除O抗原外，其他性质与EL-Tor生物型相似。毒性蛋白质及其调节因子与El-Tor霍乱有很强的同族编码。O139菌可以产生荚果和O1组霍乱无交叉免疫力环境适应性强的耐药性，标本采集和松检，1，粪便采集(1)采样在发病初期服用抗菌素之前完成，应尽快送到检查室。粪便标本采集方法如下。取用棉棒自然排出的新鲜粪便，用工作面擦拭或用彩管将肛门插入工作场所3cm-5cm，水样取1ml-3ml，整形取指甲大小的粪便。被患者的呕吐物、粪便污染的衣服和工具也可以用作检查材料。(2)检查严重腹泻患者的水样中含有大量病菌，直接分离培养不难检测阳性。不能立即检查的，必

4、须在培养基内接种，尽快送到检查室。检验标本可以放入(PH8.6-9.0)碱性蛋白质中，也可以放入文拉比氏保存液或Cary-Blair氏半固态保存培养基中。2，环境水体：水体的取样一般应收集与灭菌的500ml水瓶相对静止的30cm以内的500ml，密封后应拍摄室温表层水。取水点的选择应与流行病学调查等资料结合，取样时应选择水流顺畅或静止的地方吸干。非流动状态的监测取样时间一般在清晨，此时水域不受人群活动等因素的影响。每个采样点的采样位置必须相距数米，并通过并行检测收集2瓶以上。(20-25)接受实验室测试。3，水产品、水生动物的取样通常选择活的或新鲜的水生动物作为采集对象，有时也要考虑冷冻水生动

5、物。无菌操作采集适当部位(如鳃和/或肠内容物等)，并密封样品瓶(管)或食品样品袋，在室温下检查。条件取样点可以将整个水生动物采集到实验室进行相关处理。同时，要求用无菌棉棒涂抹5只以上的任何种类的水生物动物表、鳃和/或肛门，设置碱性蛋白质数进行检查，并将每种管状碱性蛋白质数作为样品处理。1培养，先用碱性蛋白(pH 8.6)作为增菌液。用庆大霉素培养基、TCBS培养基或4号培养基作为强选择性分离培养基。弱选择性培养基使用碱性阵地或碱性胆盐。徐璐要注意其他制造商和徐璐其他批号培养基的质量，每个培养基在使用前必须进行质量检查。检查培养2，碱性钚37，8-12h扩增后，分别接种每样品直径9厘米的庆大霉素

6、琼脂或TCBS琼脂板和碱性琼脂板，进行下划线分离培养。另一方面，用无菌吸管将0.2-0.5ml扩增液接种到新碱性蛋白水中，进行二次扩增培养，然后进行底线分离培养，如上所示。特别强调，所有环境样品的增菌分离培养阶段必须包括上述二次增菌和强、弱双板分离。TCBS上出现黄色菌落、4号琼脂或庆大霉素平板上出现灰褐色中心的菌落均为可疑菌落，应利用O1组和O139组霍乱弧菌的高价和单价抗血清进行幻灯片凝集实验。应结合菌落特性和菌体形态进行初步报告。可疑殖民地情感基本要求：庆大霉素琼脂或TCBS琼脂，碱性琼脂平板中各选择5个以上(5个以下全部选择)，营养琼脂斜面3718-24h纯培养(即，在同一样本中，O1

7、，O139组霍乱弧菌可能同时存在，应注意为避免遗漏而选择的所有，生化鉴定，对霍乱弧菌的鉴定实验是霍乱红色实验：霍乱弧菌的两种生物型都有阳性反应。但是这种反应不是霍乱弧菌所特有的。许多能分解色氨酸和还原硝酸盐的细菌会引起阳性反应。糖发酵实验：霍乱弧菌分解葡萄糖、甘蔗和甘露醇，不产酸，不发酵阿拉伯糖。点射实验：弧菌属细菌除了副溶血性弧菌部分菌株外，都有此反应。O/129敏感试验：见药敏试验方法。将O/129 10g和150g的纸片贴在需要接种的琼脂板上，孵化35孵化1824h后，纸张周围任何大小的抑菌圈都很敏感。O1组和郑智薰O1组的霍乱弧菌都很敏感，但已经出现了对O/129耐药的菌株。O139组具有O/129耐受性，将此实验用作鉴定时要特别小心，并与其他实验结果一起综合考虑。耐盐实验：霍乱弧