T-CSTM 00198-2021 石墨烯量子点 类酶活力测定 紫外可见分光光度法

Graphenequantumdots—Determinationofenzyme-likeUltraviolet-visiblespectro2021-08-04发布2021-I 2 3 3 3 4 4 5 5 6 8 本文件参照GB/T1.1－2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国材料与试验团体标准委员会基础与共性技术领域委员会（CSTM/FC00本文件由中国材料与试验团体标准委员会基础与共性技术领域委员会（CSTM/FC00的研究热点。特别是其优异的（光）热增强的类酶石墨烯量子点具有pH依赖的类过氧化物酶、氧化酶和过氧化氢酶活力。在酸性条件下，石墨烯量联苯胺TMB，2,2,二氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）铵盐A1石墨烯量子点类酶活力测定紫外/可见分光光度法试剂和设备、样品的前处理、测量条件和步骤、数据处理和计算、不确定度来源分析和检测报告。本文件适用于紫外/可见分光光度法表征石墨烯量子点的类酶活力，底物为邻苯二胺，底物浓度为GB/T30554.3纳米科技术语第3部分：GB/T30544.13-2018纳米科技术语第13部分：石墨烯及相关注2：由于石墨烯仅有一层，因此通常被称为单层石墨烯。石墨烯缩写为1LG，以便区别于缩写为2LG的双层石墨烯少层石墨烯few-layergra2石墨烯量子点graphenequantum注：类酶活力的大小可用在一定条件下，类酶催化某一化学反应的速度来4测量原理石墨烯量子点能催化双氧水氧化色原底物邻苯二胺（OPD）发生反应，产物DAP的特征峰在吸收光谱350nm～800nm，最大吸收处为420nm。通过石墨烯量子点类酶活力α的计算如公式（2α——石墨烯量子点类酶活力，在1min内转化1μmol底物的酶量，单位为酶活力单位（U）；ε——底物氧化产物在测量波长处的摩尔吸收系数，单位升每摩尔米（L·mo3nm，吸光度最大允许误差±0.005，波长最大允许误差±2nm。试剂包括石墨烯量子点水分散液、超纯水、OPD、参考样子点水分散液应为稳定无沉降的液体。所有试剂的纯度应至少为分析纯，超纯水电阻率应达到18用于称量试剂的质量，实际分度值0.1mg，重复性（砝码检验）≤0.1mg（100g）。100μL、200μL、1mL和5mL可调移液器，最应放置于0℃~4℃冰水混合物中保存，并在12h内使用。-1双氧水溶液的配置4液（7.1），样品的总体积V为3.08mL。混匀后置于样品光路中，按8.1.1条件测试样在样品池中依次加入V2体积的超纯水、40μL1mol.L-1双氧水溶液（7.2）溶液（7.1）和V1体积的石墨烯量子点分散液，样品的总体积V为3.08mL。混匀后置于样品光路中，按8.1.1条件测试样品池的紫外/可见吸收光谱，获得不同扫描时间酶催化底物OPD的吸次测量的时间ti和特征吸收峰最大吸收处的吸光度注：测量样品中石墨烯量子点的浓度推荐为0.25g.L-1～2.5重复8.3.2和8.3.3至少3次，将仪器所测谱图或图像保存，并记录仪器状态和测9数据处理和计算9.1将8.3.2获得数据以ti为横坐标，Ai为纵坐标，作图后采用最小二乘法进行线性拟合，斜率记为k0。所以应舍弃反应初期明显非线性的数据点，再采用最小二乘法进行线性拟合，斜率记为kGQDs。9.3将kGQDs-k0替代ΔA/Δt代入式（1）中，即可计算获得石墨烯量子点类酶活力α,参见附录B。5测试结果的不确定度来源包括但不限于1）仪器校准、特征峰的吸光度A、反应时间t、测试溶斜率kGQDs和k03）测量的重复性。g)测量结构：测量人员、校验人员、测量日期、结果名称、地址等。6A.3实验分析方法：紫外/可见分光光度法。A.4测试条件：紫外/可见吸收光谱仪的模式设定为“普通模式”，波长扫描范围350～800nm，步长2nm，扫描速度600nm.min-1；环境温度为（25±1）℃。A.5测量步骤A.5.1酸碱溶液的配置1)用移液器移取833μL37%浓盐酸至10mL容量瓶中，加水至容量瓶刻度，即得1mol/L的盐酸溶2)称量0.400gNaOH粉末，溶解于8mL水中，转移至10mL容量瓶中，加水至容量瓶刻度，即得1mol/L的NaOH溶液。A.5.2DAP标准溶液的配制注：DAP不溶于水。加入酸后，DAP上的-NH2和H+结合，生瓶中，加水至容量瓶刻度，摇匀。即制得250mL2注：DAP在酸性时为离子态，吸收峰约为450nm；在中性或碱性时为3)准备6个50mL容量瓶，将其编号为1~6。在1~6号容量瓶中分别加入0.1、0.25、0.5、1.25和5mL制备的200μmol/LDAP溶液。再向6个容量瓶采用去离子水对紫外/可见吸收光谱仪的基线进行校正。向1cm×1cm比色皿中加入3mL待测的DAP标准溶液进行润洗，共润洗两次。再向1cm×1cm比色皿中加入3mL待外/可见吸收光谱测试。单次取样测试3次，在420nm的吸光度取平均值。依次对1~6号的样品溶液进行DAP在碱性时会非常缓慢的析出，所以应在完成A.5.2后1小时内完A.1a）可以看出，DAP最大吸收处的7图A.1不同浓度DAP的紫外/可见吸收光谱图和在420nm处拟合的标8向比色皿（1cm×1cm）中依次加入2740μL超纯水、40μLH2O2(1mol.L-1)溶液、300μLOPD(0.1mol.L-1)溶液混合混匀，总体积3080μL。将比色皿置ΔA/Δt=0.00186min-1，求得αOPD=(3.88±0.29)×10-4U(包含因子k=2)。9图B.2DAP在420nm处有（红线）无（黑线）石墨烯量子点的吸光度随反应时间的变化关系图名称：____________________________地址：____________________________________________________________测试样品名称：__________________________测试样品编号：_____________________3测试依据：_________________________制造单位：_________________型号：_________________编号：___________仪器检定/校准证书编号：_____________________检定/校准结果：_________________样品池：____________________________温/湿度：_______________________________扫描时间间隔：___________________波长扫描范围：_______________________扫描步长：_____________________扫描总时长：_________OPD自氧化速率：______________石墨烯量子点催化H2O2氧化OPD的速率：____________石墨烯量子点的类酶活力：__________测试人员：_______________校验人员：_______________测试日期：___________机构名称：________________________地址：_________________________________8授权机构：________________________授权证书编号：____________________本文件起草单位：国家纳米科学中心、中国计量科学研究院、枣[1]GEJ,LANM,ZHOUB,WANGP,LEEC-S,ZHANGW,HANX.Agrapheneqsingletoxygengeneration[J].[2]JUJ,CHENW.Insitugrowthofsurfacquantumdotsforelectrochemicaldetectionofhydrogenperoxideinbiologicalenvironments[size-dependentelectrocatalyticactivityfortheoxy[4]LIY,ZHAOY,CHENGH,HUY,SHIG,DAIL,QUL.Nitrogen-luminescents,nco-dopedgraphenequantumdotswithbroadvisibleabsorptionbandsforvisibleliphotocatalysts[J].Nanoscale,