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DB33Regulationofidentificationforsilkwormnuclearpolyhedrosisresistance2019-01-15发布浙江省市场监督管理局发布I1家蚕核型多角体病抗性鉴定方法凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和家蚕核型多角体病病毒bombyxmorinuclearpoly为杆状病毒科、真杆状病毒亚科、核型多角体家蚕核型多角体病病毒多角体bombyxmorinuclearpolyhedrosisvirusandinclusi家蚕核型多角体病silkwormnuclear2半数致死浓度medianlethalconcentratio在规定时间内，通过添食攻毒感染，使2龄家蚕半数死亡所需的病毒多角体浓度。按DB33/T2019中简化催青的要求催青，常规5家蚕核型病毒多角体试验用悬浮液的制备、计数及保存5.1悬浮液的制备5.1.1添食将纯化的病毒多角体，用蒸馏水配成1×106个/毫升浓度的攻毒液。取3片大小约10cm×10cm清洁改用清洁桑叶喂饲。在24℃~25℃的温度下，饲养7d～10d备用。5.1.2制备用剪刀从病蚕的腹足或尾角收集其体液，经2层脱脂纱布过滤，然后将滤液用3000r/min离心10min，至沉淀呈较为均质的乳白色，再用少量无菌生理盐水充分悬浮，即成病毒多角体悬浮5.2病毒多角体的计数5.3病毒多角体悬浮液的保存3方法制作稀释病毒多角体悬浮液。病毒多角体悬浮液母液及梯度稀释液的有效保存时间为≤1个月。6.2攻毒对象和设区测试蚕品种、对照蚕品种的2龄起蚕。6.2.2攻毒设区6.3攻毒添食与饲养涂抹在方块叶背面后喂食。待桑叶基本食净(约12h)后，改饲清洁桑叶，在25℃~27℃的温度下饲对照区有非核型病毒多角体病因素引起的异常6.4.2病死蚕统计从2龄起蚕攻毒开始到2眠眠起止，为病死蚕计数时间。有核型病毒多角体病典型病征的蚕，计为病死蚕；没有典型病征的3龄起蚕，计为健康蚕。对不能确定的迟眠蚕，取其血用显微镜检查，检到有4DU50——死亡率超过50%试验组的累计死DD50——死亡率低于50%试验组的累计死DU50-log——累计死亡率超过50%试验组的病毒多角体悬浮液浓度CKLC50CK1LC50CK2LC50CK3LC50CK4LC50100R...............(2)4CK1LC50、CK2LC50、CK3LC50、CK4LC50——2个对照品种（正反交）的半数TGI100R

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