2025年沪科版选择性必修3生物下册阶段测试试卷含答案

…………○…………内…………○…………装…………○…………内…………○…………装…………○…………订…………○…………线…………○…………※※请※※不※※要※※在※※装※※订※※线※※内※※答※※题※※…………○…………外…………○…………装…………○…………订…………○…………线…………○…………第=page22页，总=sectionpages22页第=page11页，总=sectionpages11页2025年沪科版选择性必修3生物下册阶段测试试卷含答案考试试卷考试范围：全部知识点；考试时间：120分钟学校：______姓名：______班级：______考号：______总分栏题号一二三四五六总分得分评卷人得分一、选择题(共8题，共16分)1、如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析错误的是（）

A.用移液管吸取菌液进行梯度稀释时，可用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀B.对4号试管中的稀释液进行平板培养得到的菌落平均数必然为5号试管的10倍C.5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1．7×109D.该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低2、为研究治疗性克隆技术能否用于帕金森病的治疗；科研人员利用人帕金森病模型鼠进行如图实验，相关叙述错误的是（）

A.过程①中通常选择MⅡ期的卵母细胞去除细胞核B.过程②的关键是利用特定条件诱导胚胎干细胞相关基因表达C.过程③对受体小鼠需注射免疫抑制剂以抑制其细胞免疫功能D.克隆特定疾病模型的动物，可以为该疾病的致病机制和开发相应的药物提供帮助3、生物技术的安全性和伦理问题是社会关注的热点。下列相关叙述错误的是（）A.反对设计试管婴儿的原因之一是有人滥用此技术选择性设计婴儿性别B.基因筛检可能帮助人类尽早预防全部遗传性疾病，但也会引发基因歧视问题C.我国对待生物武器的态度明确而坚定，应严禁使用生物武器D.人们对转基因生物安全性的争议集中在食物安全、生物安全和环境安全等方面4、钙果又名欧李，果实中含有多种对人体有益的矿物质元素，其钙元素的含量比一般的水果都高。钙果用途广泛，叶可做茶，花、仁、根能制作中药，果实可加工成果汁、果酒、果醋等产品。下列说法正确的是（）A.利用酵母菌进行钙果果醋发酵过程中温度应控制在18～30℃B.在钙果果酒发酵期间，为保持无氧条件，不能拧松发酵瓶的盖子C.制作钙果果酒、果醋时，应将原料钙果果汁进行高压蒸汽灭菌D.钙果果酒的颜色是钙果果皮和果肉中的色素进入发酵液形成的5、如图表示利用棉花叶肉细胞原生质体培养进行遗传改良的过程，据图分析错误的是（）

A.①过程需用纤维素酶和果胶酶的混合物处理B.②过程能定向诱导原生质体产生优良性状的突变C.③过程中叶肉细胞失去了其特有的结构和功能D.④过程需用适宜配比的生长素和细胞分裂素处理6、有3种限制酶对DNA分子的识别序列和剪切位点（图中箭头所示）依次为：限制酶1：﹣﹣↓GATC﹣﹣；限制酶2：﹣﹣CCGC↓GG﹣﹣；限制酶3：﹣﹣G↓GATCC﹣﹣。下列叙述错误的是（）A.不同的限制酶有不同的识别序列和切割位点B.限制酶2和限制酶3识别的序列都包含6个碱基对C.限制酶1和限制酶3剪出的黏性末端相同D.能够识别和切割RNA分子的酶只有限制酶27、下列有关限制酶和DNA连接酶的叙述正确的是（）A.限制酶将DNA双链切割成两条单链B.同种限制酶既可以切割含目的基因的DNA片段又可以切割质粒，因此不具有专一性C.序列—CTAG↓—和—G↓GATCC—被限制酶切出的黏性末端相同D.E．coliDNA连接酶能催化平末端和黏性末端的连接8、PCR作为一个体外酶促反应，其效率和特异性取决于两个方面，一是引物与模板的特异性结合，二是多聚酶对引物的延伸。引物设计的总原则是提高扩增的效率和特异性。下列有关叙述错误的是（）A.引物长度过短，特异性降低B.两种引物之间不能发生碱基互补配对C.引物的G—C含量越高，越利于目标DNA的扩增D.可在引物的5'端添加特定限制酶的识别序列评卷人得分二、多选题(共9题，共18分)9、下图1表示的是某DNA分子上的一些限制性内切酶的酶切位点。用XhoI和SalI两种限制酶分别处理该DNA分子；经电泳分离结果如图2。以下叙述正确的是（）

A.所用两种限制性核酸内切酶识别的核苷酸序列可能相同B.限制酶通过作用于磷酸二酯键和氢键得到相应产物C.根据泳道②电泳示意图可知使用的限制性内切酶为XhoID.用两种限制酶同时处理后进行电泳，条带可多于6条10、农杆菌Ti质粒上的T-DNA可以转移并随机插入到被侵染植物的染色体DNA中。研究者将下图中被侵染植物的DNA片段连接成环；并以此环为模板，利用PCR技术扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列，以此可确定T-DNA插入的具体位置。下列说法正确的是（）

A.进行PCR扩增的依据是DNA分子双链复制的原理B.进行PCR扩增需要的酶有解旋酶和热稳定DNA聚合酶C.利用图中的引物②、③组合可扩增出两侧的未知序列D.通过与受体细胞的基因组序列比对，可确定T-DNA的插入位置11、下列关于土壤中纤维素分解菌的分离与计数，叙述正确的是（）A.可从富含腐殖质的林下土壤中筛选产纤维素酶菌B.培养基中应含大量的葡萄糖或蔗糖提供生长营养C.培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌D.菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基12、格瓦斯是一种广泛流传于东欧的低度酒精饮料。制作过程：①将发酵面包制成的面包液、糖化液装入发酵罐，加入保加利亚乳酸菌、酵母菌进行发酵；②发酵液经过严格的过滤；③过滤液经5～8s迅速升温到127℃进行高温杀菌，冷却后即可饮用。酵母菌产生酒精的能力差异较大，其产酒精能力与其耐受酒精的能力有关。下列说法正确的是（）A.保加利亚乳酸菌和酵母菌都能同时进行有氧呼吸和无氧呼吸B.面包液、糖化液可为微生物的生长提供碳源、氮源以及水和无机盐等营养物质C.若想得到产酒精能力比较强的酵母菌，可向培养基中添加较高浓度的酒精进行筛选D.过程③中瞬时高温灭菌可使微生物蛋白质空间结构迅速破坏，从而达到灭菌效果13、我国首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪的培育过程如图所示，其中字母代表结构或生物，数字代表过程，下列相关叙述错误的是（）

A.为了①和②的顺利完成，需要用灭活的病毒对细胞进行诱导B.将C的细胞核去掉，实质上是去除纺锤体—染色体复合物C.为避免将E植入F时产生排斥反应，移植前应给F注射免疫抑制剂D.移入F的桑葚胚要经历囊胚、原肠胚等阶段才能形成猪的幼体14、长春花是野生花卉，其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。研究人员利用已免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞通过杂交技术生产出能够同时特异性识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体，制备过程如图所示。下列说法错误的是（）

A.①过程要多次注射抗原，其目的是刺激小鼠产生更多的抗体B.经③过程获得的杂交瘤细胞都能产生抗癌胚抗原的特异性抗体C.图中“?”处只能使用PEG融合法和电融合法来诱导细胞融合D.制备双特异性抗体的目的是使长春碱能定向地作用于癌细胞15、野生型大肠杆菌能够在基本培养基上生长，营养缺陷型的大肠杆菌则不能在基本培养基上生长，需要在培养基中添加某些营养物质。研究人员用影印培养法对诱变产生的营养缺陷型突变体进行筛选，方法如图所示。下列叙述正确的是（）

A.母板培养基与基本培养基的成分相同B.用稀释涂布平板法将菌液接种在母板培养基上进行培养C.作为接种工具的“印章”需经过灭菌后才能印在长有菌落的母板上粘取菌种D.母板培养基上的菌落4、5、6为营养缺陷型大肠杆菌繁殖而来16、研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染的土壤中筛选出了一种石油降解菌，下列相关表述正确的是（）A.培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利B.这种培养基是一种选择培养基C.利用这种石油降解菌可以降解石油，修复土壤D.相对于未被污染的土壤，从被石油污染的土壤中更容易分离到石油降解菌17、下图为科学家培育克隆猴的基本步骤，下列相关叙述正确的是（）

A.动物细胞核移植技术，体现了动物细胞的全能性B.对A猴卵母细胞去核是为了保证克隆猴的核遗传物质都来自B猴C.必须将重组细胞培育到一定程度后才能植入代孕动物体内D.A猴的卵母细胞的细胞质中含有促进B猴体细胞核全能性表达的物质评卷人得分三、填空题(共8题，共16分)18、哺乳动物核移植可以分为______核移植（比较容易）和______核移植（比较难）。19、在课题1中，我们学习了稀释涂布平板法。这一方法常用来统计样品中_________________的数目。当样品的稀释度足够高时，____________________。20、第一步：______21、为了避免外源DNA等因素污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行_____________。而使用的缓冲液并在__________℃存储。22、在____________的温度范围内，DNA的双螺旋结构解体，双链分开，这过程成为__________。23、PCR技术的DNA体外复制环境有DNA解旋酶、耐热DNA聚合酶、DNA母链、4种脱氧核苷酸和__________，它能使DNA聚合酶能够从引物的________端开始连接脱氧核苷酸。（人教P58列表），而引物是一段______________片段，用于PCR的引物长度通常为____个核苷酸。24、随着现代生物技术的飞速发展；转基因动物；克隆动物和试管动物相继问世，请回答下列问题：

（1）转基因动物、克隆动物和试管动物培育过程中都要用到的生物技术包括______。

（2）核移植是动物克隆的第一步，包括体细胞核移植和胚胎细胞核移植，其中后者更易成功，原因是______。核移植常用处于______（填时期）的______为受体细胞。

（3）在“试管动物”的培育过程中，常采用______（填激素名称）处理可使雌性个体一次排出多枚卵母细胞。从雄性个体采集的精子需______后才能进行受精作用；防止多精入卵的两道屏障依次为______；卵细胞膜反应。

（4）若考虑环境承载力，转基因动物、克隆动物和试管动物不宜放置到自然环境中，这遵循了生态工程的______原理。25、生物武器的致病能力强、攻击范围广。它可以直接或通过食物、生活必需品和带菌昆虫等散布，经由呼吸道、消化道和皮肤等侵入人、畜体内，造成大规模伤亡，但对植物无害。（选择性必修3P111）()评卷人得分四、判断题(共2题，共8分)26、转基因生物可能会破坏生态平衡（______）A.正确B.错误27、蛋白质工程是一项难度很大的工程，主要是因为蛋白质发挥功能必须依赖于正确的高级结构，而这种高级结构往往十分复杂。（选择性必修3P95）()A.正确B.错误评卷人得分五、实验题(共3题，共24分)28、鼠伤寒沙门氏菌的野生型菌株（his+）可在基本培养基（含微量组氨酸）上生长形成菌落，而突变型的组氨酸营养缺陷型菌株（his-）不能合成组氨酸；无法在基本培养基上形成菌落。利用his菌株可检测环境或食品中是否存在化学致癌剂（诱发his-菌株突变）。回答下列问题：

(1).基本培养基的成分主要包括_____。制备基本固体培养基的操作：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。倒平板时应注意：_____。

(2).检测是否存在化学致癌剂时，用_____法将his-菌株接种于基本培养基上，使其密集均匀分布在平板上，将浸泡过待测化合物的滤纸片贴于平板中央。若培养基灭菌合格，则可能影响该检测结果的两个重要因素是_____。若图A为对照组，B为实验组，则A组滤纸片的处理方法是_____。经正确检验后，结果如B所示，则实验结果和结论为_____。

(3).使用过的培养基在丢弃之前应做的处理及目的是_____。29、金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌；具有高度耐盐化的特性，在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。某研究小组进行了测定某处土壤中金黄色葡萄球菌数量的实验。回答下列问题：

(1)实验小组选用含7．5%NaCl的牛肉膏蛋白胨培养基培养金黄色葡萄球菌，制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是_________（用文字和箭头表示）。培养基中加入7．5%NaCl有利于金黄色葡萄球菌的筛选，原因是_________。

(2)在制作血平板时需要等平板冷却后，方可加入血液，以防止_________。在血平板上，金黄色葡萄球菌菌落的周围会出现_________。

(3)土壤是微生物天然的培养基，测定土壤中金黄色葡萄球菌的数量时，一般采用_________法。为了保证获得菌落数在_________之间适于计数的平板，需要选用一定稀释范围的样品液进行培养。测定土壤中金黄色葡萄球菌、放线菌和真菌的数量时，稀释倍数较低的是_________。实验结果统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，其原因是_________。30、三氯生是一种抑菌物质，具有优异的贮存稳定性，可以替代抗生素用于基因工程中筛选含目的基因的受体细胞。已知fabV（从霍乱弧菌中发现的烯脂酰ACP还原酶）基因可以使大肠杆菌抵抗三氯生。

(1)通过PCR方法扩增fabV基因时，先要根据_____设计两种特异性引物序列，以确保Taq酶从引物的3′端延伸DNA链，至少需要经过_____次扩增才能获得8个双链等长的目的基因。

(2)基因工程的核心步骤是_____；某科研团队将可以受温度调控的基因插入上述选出的重组质粒中，构建了温度调控表达质粒（如图2）。其中C基因在低温下会抑制P2，R基因在高温下会抑制P1，如果将lacZ基因和GFP（绿色荧蛋白）基因插入图2质粒中，使得最后表现为低温下只表达GFP蛋白，而高温下只表达lacZ蛋白。则lacZ基因插在_____之间，GFP基因的插入位置及注意点是_____。

(3)若以大肠杆菌为受体细胞，筛选上述插入了GFP基因的受体细胞的依据是：大肠杆菌能在含_____的培养基上生长，且_____。评卷人得分六、综合题(共4题，共12分)31、莠去津是一种含氮农药；在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，可按下面程序选育能降解莠去津的细菌（目的菌）。请据图回答：（已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明）

（1）由图推断，从A瓶到C瓶液体培养的过程称为_____________________。图中固体培养基比培养瓶中的培养基多添加了________作为凝固剂，从功能上讲，这两种培养基都属于________培养基。

（2）在将C瓶菌种接种到固体培养基之前通常要进行____________。图中将菌种接种到固体培养基的方法是____________，对所用接种工具常采用的灭菌方法是________。

（3）一段时间后，培养基出现无透明带和有透明带两种菌落，我们筛选的目的菌是____________（填“有透明带”或“无透明带”）菌落中的细菌，该菌落生长所需的氮元素主要来源于____________。32、科学家从黑麦草植株中获取抗草甘膦基因；通过转基因技术获得了抗除草剂草甘膦的玉米新品种。请回答下列问题：

（1）科研人员在喷洒过草甘膦溶液环境中选择能够生长的黑麦草，从黑麦草细胞质中提取__________，构建_________（填“基因组文库”或“cDNA文库”），从中选取抗草甘膦基因。该方法获得的目的基因直接导入玉米细胞中不能正常表达，其原因是______________。

（2）经研究发现该种玉米新品种抗草甘膦的能力较低，可通过______________修饰抗草甘膦的基因。

（3）种植该转基因玉米作为食物会引发公众在食物安全方面的担忧，主要是担心转基因生物____________（列出两点即可）。

（4）与传统的焚烧玉米秸秆相比，将玉米秸秆发展为以沼气工程为核心的农村生态工程建设主要遵循生态工程__________________的基本原理。33、果蝇有多对易于区分的相对性状；且染色体少，是常见的遗传学研究材料。果蝇在点状染色体（第Ⅳ号染色体）多一条或少一条的情况下均可以存活并能够繁殖，利用这一特点可以用于基因定位。把传统杂交实验与分子遗传学相结合，利用分子标记和性状共同验证遗传基本规律，能大幅提高科研效率。果蝇的长翅和残翅是由一对等位基因Vg/vg控制，科研人员利用软件设计PCR引物，在距vg基因两侧各10cm左右共设计出30对特异引物，从中筛选合适的长翅果蝇与残翅果蝇DNA片段，部分结果如图所示。回答下列问题：

注：“+”表示长翅，vg表示残翅，R11~R20表示不同PCR引物对。

(1)据图可知，可选用引物R15扩增出的片段作为显性标记，判断的依据是________________。

(2)用长翅与残翅杂交，F1全部为长翅，自交后获得186只F2个体，粗提法提取F2个体的基因组DNA进行R15PCR扩增，获得F2个体的PCR数据，对F2代Vg/vg、R15/r15组合，得到下表数据。表现型基因型类型个体数有带长翅R15Vg/-亲型115有带残翅R15vg/-vg重组型17无带长翅r15Vg/r15-重组型15无带残翅r15vg/r15vg亲型39

分析F2代数据，R15/r15和Vg/vg的分离________（填“符合”或“不符合”）分离规律。F2代Vg/vg和R15/r15________（填“符合”或“不符合”）自由组合规律，理由是_________________________________。出现重组型的原因是________________________________。

(3)已知长翅和残翅这对等位基因位于常染色体上，为进一步确定长翅和残翅这对等位基因是否在第Ⅳ号染色体上，现提供染色体正常与第Ⅳ号染色体单体的纯合雌、雄个体。请写出实验思路并预期实验结果和结论。34、米酒；旧时叫“醴”，其酿制工艺简单，口味香甜醇美。下图表示发酵过程中的代谢途径。回答下列问题：

(1)制作时用糯米酿制，需要等煮熟的糯米温度降低后再拌上酒曲（酵母菌）进行发酵，这是为了防止________________________________。在家中用陶土罐酿制米酒时，不需要进行严格的灭菌处理，这是因为_________________________________。

(2)陶土罐中要预留部分空间，一方面通过①②过程可以___________________________，另一方面是为了避免_____________________________。

(3)制作成功的米酒若暴露在空气中，酒味会逐渐消失而出现醋酸味，此时发挥作用的微生物是________。此现象在_________（填“冬季”或“夏季”）更易发生，其原因是_________________________________。参考答案一、选择题(共8题，共16分)1、B【分析】【分析】

从土壤中分离尿素分解菌的一般步骤是：土壤取样；选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株。图中5支试管为梯度稀释；最后经稀释涂布平板法接种培养后进行计数。

【详解】

A；用移液管稀释菌液时；吹吸三次的目的是使菌液与水充分混匀，防止对后续的稀释过程造成影响，A正确；

B；4号中稀释液进行平板培养；稀释倍数比5号的低10倍，如果稀释倍数适当，得到的菌落平均数可能是5号的10倍，B错误；

C、分析图解可知，菌液一共稀释106倍，每克土壤中的菌株数为（168+175+167）÷3÷0.1×106≈1.7×109个；C正确；

D；稀释涂布平板得到的菌落可能存在两个或多个细菌细胞长成一个菌落；使该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低，D正确。

故选B。2、C【分析】【分析】

分析题图：图中①为核移植过程；②是诱导胚胎干细胞分化形成神经元的过程，③是器官移植过程。

【详解】

A；细胞核移植中选取MⅡ中期的卵母细胞作为受体细胞；常采用显微操作去核法去除细胞核，A正确；

B；过程②的关键是利用特定条件诱导胚胎干细胞相关基因表达；使之分化形成神经元，B正确；

C；该过程属于自体移植；不会发生免疫排斥反应，因此过程③对受体小鼠无需注射免疫抑制剂以抑制其细胞免疫功能，C错误；

D；克隆特定疾病动物模型；可以为该疾病的致病机制和开发相应的药物提供强有力的证据，为疾病治疗提供帮助，D正确。

故选C。3、B【分析】【分析】

转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应；过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。对待转基因技术的利弊；正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。

【详解】

A；为了防止有人滥用设计试管婴儿技术选择性设计婴儿性别；我国反对设计试管婴儿，A正确；

B；基因筛检可能帮助人类及早预防基因控制的遗传性疾病；但基因筛检不能预防染色体异常遗传病，B错误；

C；我国对于生物武器采取的态度是不发展、不生产、不储存生物武器、并反对生物武器及其技术和设备的扩散；C正确；

D；人类对转基因生物安全性的争议集中在食物安全、生物安全和环境安全方面；D正确。

故选B。4、D【分析】【分析】

1；果酒制作菌种是酵母菌；代谢类型是兼性厌氧型真菌，属于真核细胞，条件是18～25℃、前期需氧，后期不需氧。

2；果醋制作的菌种是醋酸菌；代谢类型是需氧型细菌，属于原核细胞，条件是30～35℃、一直需氧。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。

【详解】

A；果醋发酵利用的菌种是醋酸菌；果酒发酵的菌种才是酵母菌，A错误；

B；酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳；在发酵过程中密闭，但需要根据发酵进程适时拧松瓶盖放气，B错误；

C；制作果酒时；原料钙果果汁不需要进行灭菌，否则会杀死附着在果皮上的野生型酵母菌，C错误；

D；钙果果酒的颜色是钙果果皮和果肉中的色素进入发酵液形成的；D正确。

故选D。

【点睛】5、B【分析】【分析】

题图分析：图示表示利用棉花叶肉细胞原生质体培养进行遗传改良的过程；其中①表示采用酶解法去除细胞壁，获得原生质体的过程；②表示人工诱变过程；③表示脱分化形成愈伤组织的过程；④表示再分化过程；③④表示植物组织培养过程，其原理是植物细胞的全能性。

【详解】

A；①表示去壁过程；因为植物细胞壁的成分主要是纤维素和果胶，因此，需在适宜条件下用纤维素酶和果胶酶的混合物处理，A正确；

B；②表示人工诱变过程；但基因突变是不定向的，B错误；

C；③是脱分化形成愈伤组织的过程；该过程中叶肉细胞失去了其特有的结构和功能，变成了可以发生连续分裂的细胞，C正确；

D；④表示再分化过程；决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，生长素和细胞分裂素的比例影响了愈伤组织分化的方向，因此这两种激素的比例非常重要，D正确。

故选B。

【点睛】6、D【分析】【分析】

关于限制酶；考生可以从以下几方面把握：

（1）来源：主要从原核生物中分离纯化出来。

（2）特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列；并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。

（3）结果：形成黏性末端或平末端。

【详解】

A；酶具有专一性；不同的限制酶有不同的识别序列和切割位点，A正确；

B；限制酶2和3识别的序列分别是CCGCGG和GGATCC；均为6个碱基对，B正确；

C；限制酶1和3剪出的黏性末端相同；均为-GATC，C正确；

D；限制酶只能识别和切割DNA分子内一小段核苷酸序列；D错误。

故选D。7、C【分析】【分析】

限制性核酸内切酶是可以识别并附着特定的核苷酸序列；并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。

【详解】

A；DNA双链之间为氢键相连；而限制酶破坏的是磷酸二酯键，因此将DNA双链切割成两段，A错误；

B；同种限制酶既可以切割含目的基因的DNA片段又可以切割质粒；是由于目的基因和质粒都具有相同的酶切位点，因此具有专一性，B错误；

C；序列—CTAG↓—和—G↓GATCC—被限制酶切出的黏性末端相同；均为GATC—，C正确；

D；E．coliDNA连接酶能催化黏性末端的连接；不能催化平末端连接，D错误。

故选C。8、C【分析】【分析】

PCR原理：在解旋酶作用下；打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。

【详解】

A；引物与模板结合依赖于碱基的互补配对；引物长度过短，特异性降低，A正确；

B；两种引物之间不能发生碱基互补配对；以防止引物之间结合形成双链，以免影响引物与DNA模板链的结合，B正确；

C；引物的G—C含量越高；结合特异性越强，但G—C过高，不利于复性，从而阻碍目标DNA的扩增，C错误；

D；DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链；即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的，根据需要可在引物的5’端添加限制酶识别序列，以便更加准确地获得目的基因，D正确。

故选C。二、多选题(共9题，共18分)9、C:D【分析】【分析】

题图分析：限制酶SalⅠ有三处切割位点；切割后产生4个DNA片段，泳道①中是用SalⅠ处理得到的酶切产物；限制酶XhoⅠ有2处切割位点，切割后产生3个DNA片段，泳道②中是用XhoⅠ处理得到的酶切产物。

【详解】

A；酶具有专一性；不同的限制酶识别并切割不同的核苷酸序列，A错误；

B；限制酶通过作用于磷酸二酯键得到相应产物；B错误；

C；分析图1；限制酶XhoⅠ有2处切割位点，切割后产生3个DNA片段，泳道②中是用XhoⅠ处理得到的酶切产物，C正确；

D；用两种限制酶同时处理后进行电泳；若某些位点未被切割，则条带可多于6条，D正确。

故选CD。10、A:D【分析】【分析】

PCR技术：

1；概念：PCR全称为聚合酶链式反应；是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。

2；原理：DNA复制。

3；前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。

4；条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。

5；过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶；高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。

【详解】

A；PCR扩增依据的是DNA分子双链复制的原理；A正确；

B；进行PCR扩增需要热稳定DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）；但不需要解旋酶，B错误；

C；DNA的两条链反向平行；子链从引物的3′端开始延伸，则利用图中的引物①、④组合可扩增出两侧的未知序列，C错误；

D；通过与受体细胞的基因组序列比对；即可确定T-DNA的插入位置，D正确。

故选AD。

【点睛】11、A:D【分析】【分析】

纤维素分解菌能合成和分泌纤维素酶，纤维素酶是一种复合酶，包括C1酶；Cx酶和葡萄糖苷酶；前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。用以纤维素为唯一碳源的培养基可以筛选出纤维素分解菌。

【详解】

A；木材、秸秆中富含纤维素；故可以从富含腐殖质的林下土壤中筛选产纤维素酶菌，A正确；

B；应该用以纤维素为唯一碳源的培养基筛选纤维素分解菌；只有纤维素分解菌能够存活，B错误；

C；接种室、接种箱等常用紫外线消毒法处理；接种环等常用灼烧灭菌法处理，吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理，培养基用高压蒸汽灭菌法处理，C错误；

D；菌落只能在固体培养基中形成；菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基，D正确。

故选AD。12、B:C:D【分析】1；酵母菌的新陈代谢类型为异养兼性厌氧型；在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵；酒精发酵的最佳温度是在18℃～25℃，pH最好是弱酸性。

2；乳酸菌的代谢类型是异养厌氧型；在无氧条件下乳酸菌能够将葡萄糖分解为乳酸。

【详解】

A；乳酸菌为严格厌氧菌；只能进行无氧呼吸，A错误；

B；面包液、糖化液主要成分为糖类；也含有其他物质，可为微生物的生长提供碳源、氮源、水和无机盐等营养物质，B正确；

C；酵母菌产酒精能力与其耐受酒精的能力有关；利用选择培养基，向培养基中添加较高浓度的酒精筛选出产酒精能力比较强的酵母菌，C正确；

D；过程③中瞬时高温会破坏微生物的蛋白质空间结构；进而将微生物杀死达到灭菌效果，D正确。

故选BCD。13、A:C【分析】【分析】

分析图解，可以看出绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪涉及了多项生物工程技术。图中B表示基因表达载体的构建；然后将目的基因导入猪胎儿的成纤维细胞，经过动物细胞培养筛选出转基因体细胞，然后该细胞的细胞核与猪的卵细胞进行细胞核移植获得重组细胞。重组细胞经过早期胚胎培养到桑椹胚或囊胚期，最后经过胚胎移植技术将早期胚胎移植到代孕母猪子宫内，最后生成转基因克隆猪。由此可见，该过程中利用基因工程、动物细胞培养、细胞核移植、早期胚胎培养和胚胎移植等技术。

【详解】

A；①是将重组DNA导入受体细胞；直接采用显微注射法，无需对受体细胞进行诱导，②过程通常是将细胞注入去核卵母细胞中，然后利用电融合法使D构建成功，A错误；

B；C是处于MⅡ期的卵母细胞；这个时期的“核”实际上是纺锤体—染色体复合物，B正确；

C；受体对移入的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应；因此无需给F注射免疫抑制剂，C错误；

D；移入F的通常是桑葚胚；它要经历囊胚、原肠胚阶段的发育才能成为猪的幼体，D正确。

故选AC。14、A:B:C【分析】【分析】

单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应；之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融台，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基坮养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

【详解】

A；①过程要多次注射抗原；其目的是刺激小鼠产生更多的已免疫的B淋巴细胞，A错误；

B；③为选择培养基；经选择培养基获得的杂交瘤细胞不一定能产生所需抗体，要产生所需抗体还要进行抗体检测阳性和克隆化培养，B错误；

C；诱导动物细胞融合可以使用PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等；C错误；

D；双特异性抗体中的癌胚抗原抗体能将药物定向引导至和癌细胞结合；从而避免对其他细胞的破坏，D正确。

故选ABC。15、B:C:D【分析】【分析】

影印培养法；是指确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落的一种微生物培养方法。主要操作方法是:用灭菌的丝绒覆盖在一块与培养皿同样大小(或略小)的木制圆柱体上，轻轻地在母种培养皿的菌苔上印一下，把细菌菌落全部转移到丝绒面上，然后将这一丝绒面再印在另外的选择性培养基平板上，获得与原始平板完全相同的接种平板。待培养后，比对各培养皿在相同位置出现相同的菌落，从而筛选出适当的菌株。

【详解】

A；母板培养基上有发生突变的营养缺陷型和野生型大肠杆菌的菌落；而基本培养基上只有野生型大肠杆菌的菌落，由此可知母板培养基与基本培养基的成分不同，A错误；

B；分析题图可知；用了稀释涂布平板法将菌液接种在母板培养基上进行培养，B正确；

C；作为接种工具的“印章"需经过灭菌处理才能印在长有菌落的母板上；以防止杂菌污染，C正确；

D；根据基本培养基上的菌落分布和添加不同营养物质的补充培养基上的菌落分布对应位置可知；4、5、6为营养缺陷型大肠杆菌，理由是这三个菌落在基本培养基上都没有，而分别在添加了不同营养物质的补充培养基上形成，D正确。

故选BCD。16、B:C:D【分析】【分析】

在微生物学中；将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水；碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。

【详解】

A；培养基中的营养物质浓度过高会导致微生物不能从培养基中吸水；将出现失水过多而死亡的现象，对生长不利，A错误；

B；这种培养基以石油为唯一碳源；只有石油降解菌可在该培养基上正常存活，因此是一种选择培养基，B正确；

C；被石油污染的土壤通气性极差；利用这种石油降解菌可以降解石油，修复土壤，C正确；

D；根据生物与其生存环境相适应的特点；未被污染的土壤中几乎不含石油分解菌，从被石油污染的土壤中更容易分离到石油降解菌，D正确。

故选BCD。17、B:C:D【分析】【分析】

动物核移植是指将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中；使其重组并发育成一个新的胚胎。这个新的胚胎最终发育为动物个体。核移植得到的动物称克隆动物，克隆动物的核基因完全来自供体动物，而细胞质基因来自受体细胞。核移植包括体细胞核移植和胚胎细胞核移植，其中体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植，因为体细胞的全能性低于胚胎细胞。

【详解】

A；动物细胞核移植技术；不能体现动物细胞的全能性，而是体现动动物细胞核的全能性，A错误；

B；去除A猴卵母细胞的细胞核；目的是排除A猴核遗传物质的干扰，保证克隆猴的核遗传物质都来自B猴，B正确；

C；必须将重组细胞培育到桑椹胚或囊胚阶段后才能植入代孕动物体内；才可正常继续发育，C正确；

D；卵母细胞的细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质；故体细胞的细胞核需移植到去核卵母细胞后才能表现出全能性，D正确。

故选BCD。三、填空题(共8题，共16分)18、略

【解析】①.胚胎细胞②.体细胞19、略

【解析】①.活菌②.培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌20、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】目的基因的获取21、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】高压灭菌—2022、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】80—100℃变性23、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】2种引物DNA或RNA20—3024、略

【分析】【分析】

1；动物核移植的概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中；使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体，核移植得到的动物称克隆动物；

2；早期胚胎培养的培养液成分；除无机盐和有机盐外，还需要添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，并需添加动物血清等天然成分。

【详解】

（1）转基因动物；试管动物和克隆动物分别在体外得到早期胚胎后；都要通过胚胎移植获得新个体。

（2）核移植包括体细胞核移植和胚胎细胞核移植；其中后者更易成功，原因是胚胎细胞分化程度低，恢复全能性相对容易，而体细胞分化程度高，全能性不易表达；核移植常用的减数第二次分裂中期的去核卵母细胞作为受体细胞，其中去核的目的是避免原细胞核中遗传物质对克隆动物的影响，保证克隆动物的核遗传物质来自供体细胞。

（3）促性腺激素处理可促使雌性个体超数排卵；即使良种母牛一次排出多枚卵母细胞。精子需要经过获能处理才能受精；防止多精入卵的两道屏障依次为透明带反应；卵细胞膜反应。

（4）要考虑环境承载力；处理好生物与环境的协调与平衡，这体现了生态工程的协调与平衡原理。

【点睛】

本题考查细胞工程、胚胎工程和生态工程的有关知识，意在考查考生理解能力、获取信息的能力和综合运用能力。【解析】胚胎移植（或胚胎的早期培养和胚胎移植）胚胎细胞分化程度低，恢复全能性相对容易MⅡ中期去核卵母细胞促性腺激素获能透明带反应协调与平衡25、略

【分析】【详解】

生物武器是利用生物战剂杀伤人员、牲畜、毁坏植物的武器。致病能力强、攻击范围广。它可以直接或通过食物、生活必需品和带菌昆虫等散布，经由呼吸道、消化道和皮肤等侵入人、畜体内，造成大规模伤亡，同时可毁坏植物，该说法错误。【解析】错误四、判断题(共2题，共8分)26、A【分析】【详解】

转基因生物可能会破坏生态平衡，特别是对生物多样性的影响。大自然经过亿万年的演化，各种生物相对处于一种和谐的生态平衡状态。但是，如果我们用转基因技术把某种生物人为地变得更加“强悍”，那其他物种就会衰败以至灭绝，故本题正确。27、A【分析】【详解】

蛋白质工程是一项难度很大的工程，主要是因为蛋白质发挥功能必须依赖于正确的高级结构，而这种高级结构往往十分复杂，并且蛋白质的结构具有多样性，这也在一定程度上增加了蛋白质工程的难度，故说法正确。五、实验题(共3题，共24分)28、略

【分析】【分析】

培养基的制作流程一般为：计算→称量→溶化（包括琼脂）→调节pH→分装→灭菌→倒平板→（冷却后）倒置平板。微生物接种是微生物学研究中最常用的基本操作；主要用于微生物的分离纯化。具体来说，就是在无菌条件下，用接种环或接种针等专用工具，从一个培养皿（上面可能存在各种杂菌落）挑取所需的微生物，转接到另一个培养基中进行培养的方法。【小问1】

培养基的组成成分包括碳源；氮源、水、无机盐、生长因子等。倒平板时；应待培养基冷却到50℃左右倒平板，平板冷凝后要将平板倒置，倒平板过程中应在酒精灯火焰附近进行，以防止杂菌污染。【小问2】

题干中表明菌体密集均匀分布在平板上；所以是稀释涂布平板法接种。培养基灭菌合格，影响因素应为除培养基灭菌以外可能的影响因素，因此，可能操作过程中是否无菌操作，以及使用的滤纸条是否灭菌合格等。A为对照组，应除自变量以外，其他条件都相同，因此，处理方法为浸泡在无菌水中处理后贴于平板中央；实验中能观察到出现野生型菌株菌落，说明环境中存在化学致癌剂导致突变型菌株突变成野生型菌株。【小问3】

使用过的培养基应灭菌后再丢弃；以防止培养基中的有害物质污染环境或感染实验操作者。

【点睛】

本题考查培养基的成分、制备过程以及微生物的接种方法等相关知识，意在考查考生对所学知识的识记和理解能力。【解析】【小题1】①.碳源；氮源、水和无机盐②.待培养基冷却至50℃左右时；在酒精灯火焰旁附近倒平板。

【小题2】①.稀释涂布平板②.滤纸片是否灭菌彻底和待测化合物是否含有杂菌③.（滤纸片）用无菌水浸泡④.his-菌株在培养基上突变为his+菌株；说明待测化合物中存在致癌剂（或待测化合物中存在化学诱变剂，这些化学物质具有致癌性，叙述合理即可）

【小题3】灭菌，避免对环境造成污染29、略

【分析】【分析】

制备牛肉膏蛋白胨固体培养基；其基本过程为计算；称量、溶化、灭菌、倒平板。培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物生长，培养、分离出特定的微生物（如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度的食盐）。

(1)

制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的基本操作步骤是计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。金黄色葡萄球菌具有高度耐盐化的特性；培养基中加入7.5%NaC1不影响金黄色葡萄球菌生长的同时会抑制其他杂菌生长，起到了选择的目的。

(2)

在制作血平板时需要等平板冷却后；方可加入血液，以防止高温破坏血细胞。在血平板上，由于金黄色葡萄球菌可破坏红细胞而使其褪色，因此菌落的周围会出现褪色圈。

(3)

测定土壤中金黄色葡萄球菌的数量时，一般采用稀释涂布平板法。为了保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板，需要选用一定稀释范围的样品液进行培养。测定土壤中金黄色葡萄球菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养；测定放线菌的数量，一般选用103、104、105倍的稀释液进行平板培养；测定真菌的数量，一般选用102、103、104倍的稀释液进行平板培养。因此稀释倍数较低的是真菌。由于当两个或多个细胞连在一起时；平板上观察到的只是一个菌落，因此实验结果统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。

【点睛】

本题主要考查微生物的培养与分离，考查学生的实验与探究能力。【解析】(1)计算→称量→溶化→灭菌→倒平板7．5%NaC1不影响金黄色葡萄球菌生长的同时会抑制其他杂菌生长。

(2)高温破坏血细胞褪色圈（或溶血圈）

(3)稀释涂布平板30～300真菌当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落30、略

【分析】【分析】

1；基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤；基因表达载体包括目的基因；启动子、终止子和标记基因等；

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同；导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法；基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：

①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因DNA分子杂交技术；

②检测目的基因是否转录出了mRNA-分子杂交技术；

③检测目的基因是否翻译成蛋白质抗原一抗体杂交技术。

④个体水平上的鉴定：抗虫鉴定；抗病鉴定、活性鉴定等。

2；图1中①-④依次为目的基因的获取、表达载体的构建、目的基因导入受体细胞、目的基因的检测。

（1）

PCR是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术，需要Taq酶，但Taq酶不能从头开始合成DNA，前提条件是要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物，因此需要根据目的基因fabV基因的两端按碱基互补配对原则设计引物。至少需要经过4次扩增才能获的8个双链等长的目的基因。

（2）

基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，题干信息显示C基因在低温下会抑制P2，R基因在高温下会抑制P1，说明P2启动子在高温下可以启动转录；P1启动子在低温下可以启动转录。题目显示高温下只表达lacz蛋白，则lacZ基因要插在“高温下不被抑制”的启动子的后面，即P2→T2之间；GFP基因要低温下表达，则插入位置要在P1→T1之间；且不破坏C基因和R基因。

（3）

因为fabV（从霍乱弧菌中发现的烯脂酰ACP还原酶）基因可以使大肠杆菌抵抗三氯生；大肠杆菌能在含三氯生的培养基上生长，说明大肠杆菌插入重组质粒，且依据是低温下有绿色荧光高温下无绿色荧光。

【点睛】

本题考查基因工程相关知识点，要求学生熟练掌握基因工程的原理、步骤及相关的目的，形成知识网络，结合题目要求解决相关问题。【解析】(1)目的基因（fabV基因）两端碱基序列4

(2)基因表达载体的构建P2→T2插在P1→T1之间；且不破坏C基因和R基因。

(3)三氯生低温下有绿色荧光，高温下无绿色荧光六、综合题(共4题，共12分)31、略

【分析】【分析】

从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样；选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株；其中选择培养的目的是初步选择能生长目的菌，并提高其密度，在利用平板计数法统计之前需要进行梯度稀释。

（1）

通过图解可以看出A瓶到C瓶中的培养液中除莠去津外没有其他氮源；而本实验的目的是选择分解莠去津的细菌，所以该过程是通过选择培养基选择能够分解莠去津的细菌。通常情况下，固体培养基比液体培养基中多加入的凝固剂是琼脂。从功能上讲，这两种培养基目的都是筛选出能降解莠去津的细菌，都属于选择培养基。

（2）

从培养液中选取细菌进行涂布培养；如果直接进行接种，培养基中的菌落将会很密，无法进行纯化，通过梯度稀释后再接种，培养基中菌落将会分开，这时就可以进行纯化和分离了。通过培养基上的菌落分布特征可以判断接种方式为稀释涂布平板法。涂布平板操作所用的接种工具是涂布器，常用灼烧灭菌法对涂布器进行灭菌。

（3）

莠去津在水中溶解度低；含过量莠去津的固体培养基不透明的，能够分解培养基中的莠去津的菌落周围会形成透明带，所以选择的目的菌是有透明带菌落中的细菌，即该菌落生长所需的氮元素主要来源于莠去津。

【点睛】

本题主要考查微生物的筛选分离过程，意在强化学生对微生物的分离过程的认识和实验操作过程的要求。【解析】（1）选择培养琼脂选择。

（2）梯度稀释稀释涂布平板法灼烧灭菌。

（3）有透明带莠去津32、略

【分析】【分析】

1；基因文库的构建。

①基因组文库构建过程。

②cDNA文库构建过程。

【详解】

（1未知目的基因的情况下；若从细胞质中选取抗草甘膦基因，由于细胞质中没有和