2025年华师大新版选择性必修3生物下册月考试卷含答案

…………○…………内…………○…………装…………○…………内…………○…………装…………○…………订…………○…………线…………○…………※※请※※不※※要※※在※※装※※订※※线※※内※※答※※题※※…………○…………外…………○…………装…………○…………订…………○…………线…………○…………第=page22页，总=sectionpages22页第=page11页，总=sectionpages11页2025年华师大新版选择性必修3生物下册月考试卷含答案考试试卷考试范围：全部知识点；考试时间：120分钟学校：______姓名：______班级：______考号：______总分栏题号一二三四五六总分得分评卷人得分一、选择题(共9题，共18分)1、下列关于动物细胞工程的叙述，错误的是（）A.动物细胞培养过程中通常会出现细胞贴壁现象B.胚胎干细胞可以用于治疗人类的某些疾病C.动物细胞培养过程中需使用胃蛋白酶D.动物细胞培养液中通常需加入血清、血浆等天然成分2、下列传统发酵食品的生产与所用主要微生物对应正确的是（）

。选项。

传统发酵食品。

微生物。

Ａ

果酒。

真核生物；酵母菌。

Ｂ

果醋。

原核生物；乳酸菌。

Ｃ

泡菜。

原核生物；醋酸菌。

Ｄ

腐乳。

原核生物；毛霉。

A.AB.BC.CD.D3、下列有关果酒、果醋和腐乳制作的叙述，错误的是（）A.都需添加香辛料和盐等佐料，以提高产品的口感B.都需要防止杂菌污染，以免降低产品品质C.应用的主要微生物均以DNA作为遗传物质D.果酒制作需要控制无氧条件，果醋制作需要注意通气4、将某种海鱼的抗冻基因导入西红柿细胞中，培育成耐低温的西红柿新品种，这种导入外源基因的方法属于A.杂交育种B.转基因技术C.单倍体育种D.多倍体育种5、下列关于转基因生物安全性的叙述，错误的是A.种植转基因作物应与传统农业种植区隔离B.转基因作物被动物食用后，目的基因会转入动物体细胞中C.种植转基因植物有可能因基因扩散而影响野生植物的遗传多样性D.转基因植物的目的基因可能转入根际微生物6、细胞合成DNA通常有2条途径：第1条途径是利用糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA；第2条途径是通过HGPRT利用核苷酸的前体合成核苷酸，进而合成DNA．HAT培养基是基本培养基添加了次黄嘌呤（H）、甲氨蝶呤（A）和胸腺嘧啶核苷（T），A可以阻断DNA合成的第1条途径，H和T则是第2条途径中合成核苷酸的原料。HAT培养基可以用于单克隆抗体制备杂交瘤细胞的选择，小鼠骨髓瘤细胞是一类HGPRT代谢缺陷型细胞。下列说法正确的是（）A.小鼠免疫B细胞和骨髓瘤细胞融合后，培养基上会有3种类型的细胞B.HAT培养基中未融合的骨髓瘤细胞在A的阻遏下因不能合成DNA而死亡C.HAT培养基中未融合的免疫B细胞仍具有增殖能力而持续进行细胞分裂D.HAT培养基中选择出的杂交瘤细胞都能无限增殖和产生单克隆抗体7、利用重叠延伸PCR技术进行定点突变可以实现对纤维素酶基因进行合理性改造；其过程如下图所示。下列分析错误的是（）

A.PCR1过程中的产物AB是依赖引物a和引物b扩增的结果B.引物c和引物b上均含有与模板链不能互补的碱基C.①过程需要先加热至90～95℃后再冷却至50～60℃D.②过程需要利用引物a和引物d获得突变产物AD8、利用东方百合和云南大百合进行植物体细胞杂交，部分结果如表。组别PEG浓度（%）处理条件融合率（%）125黑暗27±3℃15min102301212335151544030305452020

相关说法正确的是（）A.用胰蛋白酶处理百合组织分离得到原生质体B.获得原生质体后，用血细胞计数板进行计数C.低浓度PEG促进原生质体融合，高浓度抑制融合D.融合后的原生质体直接经再分化发育成杂种百合9、如图是构建基因表达载体的过程示意图。下列相关说法正确的是（）

A.经限制酶切割后，质粒多了1个游离的磷酸基团，DNA分子多了2个游离的磷酸基团B.一个基因表达载体一般包括目的基因、标记基因、起始密码子和终止密码子等结构C.构建的重组质粒一定含有目的基因并能表达出所需的性状D.将构建好的基因表达载体导入动物细胞常用显微注射法评卷人得分二、多选题(共9题，共18分)10、下列有关哺乳动物精子、卵子的发生及受精作用的叙述，正确的是（）A.卵细胞膜反应是防止多精入卵的一道屏障B.卵子形成的过程需在卵巢和输卵管内完成C.卵子发生时，MⅠ和MⅡ过程是不连续的，但细胞质均等分配D.精子和卵子结合的过程中，卵子完成减数第二次分裂11、下列关于试管婴儿技术的叙述，正确的是（）A.在采集卵母细胞之前，需要给供卵者注射适量的促性腺激素，促进排卵B.从卵巢中吸取的卵母细胞，必须经体外培养获能处理后才能用于受精C.受精过程中，卵母细胞会发生透明带反应和卵细胞膜反应，阻止多精入卵D.设计试管婴儿技术，有利于生育健康的下一代，不会造成社会危害12、转MT-like基因的衣藻对Pb、Cd等重金属离子的抗性明显增强，对Cb2+富集效应显著。某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）技术扩增MT-like基因，并进一步通过基因工程手段构建净化重金属废水的工程菌。下列有关PCR操作的叙述，正确的是（）A.PCR扩增需要加入Taq酶和DNA连接酶B.需设计一对与MT-like基因两端序列互补的引物C.设计引物时要避免引物之间形成互补碱基对D.长度相同，但GC含量高的引物需要更高的退火温度13、根据某基因上游和下游的碱基序列；设计合成了用于该基因PCR的两段引物（单链DNA）。引物与该基因变性DNA（单链DNA）结合为双链DNA的过程称为复性。下图是两引物的Tm（引物熔解温度，即50%的引物与其互补序列形成双链DNA分子时的温度）测定结果，以下分析正确的是（）

A.两引物分别与DNA的两条互补单链结合，是子链延伸的起点B.PCR过程中，复性温度应低于引物的Tm值以提高PCR效率C.若两引物的脱氧核苷酸数相同，推测引物2的（G＋C）含量较高D.适当减少引物2的脱氧核苷酸数，可使其Tm值接近引物114、下图为利用PCR技术扩增特定DNA片段的部分示意图；图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。下列有关描述错误的是（）

A.利用PCR技术扩增目的基因时不需要解旋酶而需要耐高温的DNA聚合酶B.引物是子链合成延伸基础，子链沿着模板链的3’→5’方向延伸C.从理论上推测，第四轮循环产物中只含有引物A的DNA片段所占的比例为15/16D.在第三轮循环产物中才开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段且占1/215、下图表示形成cDNA并进行PCR扩增的过程。据图分析；下列叙述错误的是（）

A.①过程所需的原料是脱氧核苷酸B.②过程所需的酶必须耐高温C.③过程需要解旋酶破坏氢键D.④过程的引物对之间不能互补配对16、我国制作泡菜历史悠久。《中馈录》中记载：“泡菜之水，用花椒和盐煮沸，加烧酒少许。如有霉花，加烧酒少许。坛沿外水须隔日一换，勿令其干。”下列说法错误的是（）A.“泡菜之水，用花椒和盐煮沸”的目的是彻底灭菌B.“霉花”主要由酵母菌繁殖形成，酵母菌往往来自蔬菜C.“坛沿外水须隔日-换，勿令其干”的目的是保证坛内适宜湿度D.制作泡菜的时间越长，亚硝酸盐的含量越高17、抗体的结构分为V区（识别并结合抗原的区域）和C区（抗体的支架），鼠源抗体具有外源性，会被人体免疫系统当作抗原而清除。用人抗体的C区替换鼠源抗体的C区，保留鼠单抗的V区，可构建人一鼠嵌合抗体，操作流程如图所示。下列相关说法错误的是（）

A.与骨髓瘤细胞融合的B淋巴细胞为能分泌抗体的浆细胞B.用选择性培养基可筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞C.为获得结构正确的嵌合抗体，受体细胞应选用大肠杆菌D.人一鼠嵌合抗体在保留抗体特异性的同时外源性下降18、淀粉经淀粉酶水解后得到的产物是重要的工业原料；但工业化生产常需在高温条件下进行，而现有的淀粉酶耐热性不强，科研人员发现将淀粉酶（AmyS1）第27位的亮氨酸替换为天冬氨酸能产生耐热性高的淀粉酶（AmyS2），由此科研人员根据AmyS2的氨基酸序列设计并人工合成了AmyS2基因，将其导入芽孢杆菌内，具体过程如下图所示。最终结果表明，与导入质粒B相比，导入质粒C的芽孢杆菌培养液中更易获得并提纯AmyS2．下列说法错误的是（）

A.获得AmyS2基因并将其导入芽孢杆菌得到AmyS2的过程是通过基因工程实现的B.构建质粒C时需用限制酶Eco52I和BamHI同时切割质粒B和信号肽基因C.信号肽基因表达的产物可帮助核糖体上合成的AmyS2进入内质网和高尔基体D.可用PCR技术检测芽孢杆菌的DNA上是否插入了AmyS2基因评卷人得分三、填空题(共5题，共10分)19、细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就______，称为______。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面______时，细胞就会_____，这种现象称为______。20、今年年初；爆发了全球性新型肺炎疫情。初步研究表明，新型冠状病毒通过其表面的S-蛋白与人细胞膜上的ACE2相互识别，感染人的呼吸道上皮细胞。请分析回答问题：

（1）新型冠状病毒表面的S-蛋白作为_________剌激淋巴细胞，使机体产生_________性免疫反应，人细胞膜上的ACE2的化学本质是_________。

（2）感染病毒后，免疫系统对肺细胞强烈攻击引发肺炎，此时可通过适度使用_________对病人进行治疗；使其免疫功能下降，以避免肺部严重受损。

（3）科学家采集了感染新型冠状病毒并已康复的甲、乙两人的血液，检测相关抗体的水平，结果如图1。据此分析，应选取_________的B淋巴细胞用以制备单克隆抗体（单抗）。

（4）将制备的多种单抗分别与病毒混合，然后检测病毒对宿主细胞的感染率，结果如图2。据此分析，对病毒抑制效果最好的单抗是__________号。

（5）患者康复后一段时间，若再次受到该病毒的攻击，机体内相应的__________细胞迅速增殖分化，产生大量的浆细胞和细胞毒性T细胞。21、生物武器的致病能力强、攻击范围广。它可以直接或通过食物、生活必需品和带菌昆虫等散布，经由呼吸道、消化道和皮肤等侵入人、畜体内，造成大规模伤亡，但对植物无害。（选择性必修3P111）()22、科学家采用定点诱变的方法构建T4溶菌酶的新蛋白质，发现其中一种新蛋白质的第9和第164位氨基酸残基被转换为半胱氨酸残基，并形成一个二硫键。这种新蛋白质的热稳定性会有什么变化？这项技术的要点是什么？_________23、应用分析与比较的方法，对生殖性克隆与治疗性克隆进行列表阐述｡

生殖性克隆与治疗性克隆的比较。比较项目生殖性克隆治疗性克隆含义__________用到的技术__________目的__________评卷人得分四、判断题(共3题，共9分)24、目前，种植的转基因作物中以水稻和小麦最多，其次是转基因棉花和油菜（______）A.正确B.错误25、目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作法。（选择性必修3P54）()A.正确B.错误26、如果转基因植物的外源基因源于自然界，则不会存在安全性问题。()A.正确B.错误评卷人得分五、实验题(共4题，共28分)27、（1）国家生活饮用水卫生标准中规定细菌学指标的限值：细菌总数为100CFU/mL（说明：CFU为菌落形成单位）。兴趣小组同学通过滤膜法对某小区自供水设备的蓄水池进行细菌总数测定，将10mL的水样进行过滤后，将滤膜放在牛肉膏蛋白胨培养基上培养，培养时应将平板倒置，其原因是___________________。

（2）所用培养基中的牛肉膏除为微生物提供________和_______外，还能提供磷酸盐和________。在培养过程中，不同时间所观察到的平板上菌落特征的差异有___________（至少写出两点）。

（3）上述检测过程在37℃条件下经24h培养后；测得如下结果：

。平板l平板2平板3细菌总数（CFU/mL）413538据上表结果判断，所取水样测定结果是_________________。28、研究表明生物制剂W对不同种类动物细胞的分裂均有促进作用。有同学设计相关实验来验证这个观点。请根据以下提供的实验材料；完善该实验步骤，并预测实验结果。

实验材料：培养液；正常肝组织、肝癌组织、W、胰蛋白酶。

（要求与说明：答题时不考虑加入W后的体积变化等误差。提供的细胞均具有分裂能力；只进行原代培养且培养条件适宜）

（1）实验步骤：

①用_________分别处理正常肝组织和肝癌组织获得分散的细胞。将两种分散的细胞加入培养液中制成两种细胞悬液。培养液需要中加入__________等营养物质和__________用以灭菌。

②在显微镜下用_____________直接计数两种细胞悬液中细胞的数量；并进行记录。

③取灭菌后的培养瓶若干个均分为A、B两组，A组加入正常肝细胞悬液；B组加入_________。从A、B组中各取出一半培养瓶作为C、D组，分别加入_________。放入动物细胞培养箱在适宜条件下培养。

④各组样品在培养箱中培养一段合适的时间后，每组取部分样品，加入_____________后摇匀；在显微镜下计数并记录细胞数量。

⑤重复④若干次。

⑥统计并分析所得数据。

（2）预测实验结果（用坐标系和曲线示意图表示）_____________29、干燥综合征（SS）是临床常见的一种自身免疫病；患者血清中存在多种抗体，其中以SSB抗体特异性最强。下图表示科研人员利用基因工程技术获得SSB蛋白及利用SSB蛋白对小鼠进行免疫的过程。回答下列问题：

(1)利用RNA通过①过程获得cDNA需要________酶。已知真核生物mRNA在3'端加有PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）保护尾部不被降解。为了针对性获得cDNA，应如何设计逆转录第一步时的DNA引物______，设计引物的目的是______。

(2)为确保与pET41a质粒定向连接，对逆转录得到的cDNA扩增时，应在相应引物的_______（填“5'”或“3'”）端加上______酶切位点。

(3)③过程用重组质粒转染大肠杆菌时，需要用Ca2+处理大肠杆菌，目的是______，然后将处理后的大肠杆菌先接种在添加_______的培养基（A）上培养，待长出菌落后再利用无菌膜同位置转移到添加______的培养基（B）上培养，收集_______菌落进一步纯化后将菌体破碎处理；筛选得到SSB蛋白。

(4)将改造后的大肠杆菌生产的SSB蛋白注入到小鼠体内是为了检测该蛋白是否具有抗原性，则后续实验内容应为抽取小鼠血液_______。30、黏多糖贮积症是由IDUA基因突变导致的遗传病。科研人员对此病的治疗进行相关研究。

(1)黏多糖贮积症患者细胞中IDUA基因由于碱基对___________造成突变，转录出的mRNA长度不变但提前出现终止密码子，最终导致合成的IDUA酶分子量___________；与正常IDUA酶的空间结构差异显著而失去活性，积累过多的黏多糖无法及时清除，造成人体多系统功能障碍。

(2)抑制性tRNA（sup-tRNA）与普通tRNA的结构、功能相同，但它的反密码子可以与终止密码子配对。在上述这一类突变基因的翻译过程中，加入sup-tRNA可以发挥的作用是___________；从而诱导通读获得有功能的全长蛋白。

(3)不同的sup-tRNA可以携带不同氨基酸；为比较它们的通读效果，科研人员进行了相关研究，实验结果如图。

注：“-”代表未加入。

据图分析，实验组将___________基因导入受体细胞，并采用___________技术检测导入基因的表达情况。据结果分析，携带酪氨酸的sup-tRNA能___________。

(4)科研人员利用携带酪氨酸的sup-tRNA对IDUA突变基因纯合小鼠及IDUA基因敲除小鼠进行治疗，检测肝脏细胞IDUA酶活性和组织黏多糖的积累量，与不治疗的小鼠相比较，实验结果为_____________，表明携带酪氨酸的sup-tRNA可以治疗黏多糖贮积症。评卷人得分六、综合题(共3题，共27分)31、CAR-T细胞免疫疗法；是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法。借助基因工程给T细胞装上定位导航装置CAR（肿瘤嵌合抗原受体），T细胞就能获得特异性识别和攻击肿瘤细胞的能力，犹如“细胞导弹”，能精确“点射”肿瘤细胞，但又不会伤及正常细胞。治疗流程如下，回答下列有关问题：

（1）将T细胞改造成CAR-T细胞，可以借助逆转录病毒载体将CAR基因整合到正常T细胞的基因序列中，这个过程称为____________。

（2）除借助病毒侵染外，也可通过电穿孔技术(通过高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的外源分子)直接将____________导入细胞质中进行表达，该方法相较于病毒侵染更安全，原因是________________________。

（3）让CAR-T细胞进行增殖，需要用到____________技术，此技术应在5%的CO2培养箱中进行，CO2的作用是________________________。

（4）将CAR-T细胞回输到患者体内后，CAR-T细胞表面的抗原受体能与____________发生特异性结合，从而高效地杀灭肿瘤细胞。32、请回答下列有关传统发酵技术应用的问题：

（1）杨梅酒制作的菌种是_________________。

（2）若在杨梅酒的基础上，进一步制作杨梅醋，需要改变哪些条件？___________________。

（3）家庭制作杨梅酒不需要严格消毒的原因________________。

（4）腐乳制作过程中，毛霉主要产生哪些酶？__________，影响腐乳品质的因素有哪些？___________。

（5）泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有哪些？____________。亚硝酸盐的检测方法是________，检测过程中的吸附剂是______________。33、杂草会危害农业生产；人为除草费工费时，除草剂的应用可大量减轻人们的劳作，但除草剂在杀死杂草的同时也会使植物受到损伤。利用基因工程技术，将草甘膦（除草剂）抗性基因转入玉米基因组中，培育出抗除草剂玉米可解决此项难题。下图是培育抗除草剂玉米的流程图，GUS基因表达的产物经染色可由无色变为蓝色。回答下列问题：

(1)采用Ti质粒转运草甘膦抗性基因的原因是______。①过程用到的酶为_______。②过程用Ca2+处理农杆菌细胞，使细胞处于一种______的生理状态；然后与重组质粒混合，完成转化作用。

(2)在培育抗除草剂玉米的过程中存在两次筛选，第一次筛选利用_______，筛选得到含基因表达载体的农杆菌；第二次筛选若利用GUS基因表达产物对细胞进行鉴定，目的是，获得_______。

(3)图中脱分化需要在_______等条件的诱导下进行，由愈伤组织到植株的再分化过程中，先诱导_____（填“生根”或“生芽”），再诱导______（填“生根”或“生芽”），并且此过程每日需要给予适当时间和强度的光照。参考答案一、选择题(共9题，共18分)1、C【分析】【分析】

动物细胞培养过程取动物胚胎或幼龄动物器官；组织。将材料剪碎；并用胰蛋白酶（或用胶原蛋白酶）处理（消化），形成分散的单个细胞，将处理后的细胞移入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞就会停止分裂增殖，出现接触抑制。此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配成一定浓度的细胞悬浮液。另外，原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。

【详解】

A；结合分析可知；动物细胞培养的过程中通常会出现细胞贴壁生长的现象，A正确；

B；胚胎干细胞经过诱导可分化成多种组织细胞；因而可以用于治疗人类的某些疾病，B正确；

C；动物细胞培养过程中需使用胰蛋白酶将组织细胞分散成单个细胞制成单细胞悬液；而不能使用胃蛋白酶，C错误；

D；动物细胞培养液中通常需加入血清、血浆等天然成分；从而有利于动物细胞增殖，D正确。

故选C。

【点睛】2、A【分析】【分析】

果酒制作的原理：在无氧条件下；酵母菌能进行酒精发酵。方程式：C₆H₁₂O₆→2C₂H₅OH+2CO₂

果醋制作的原理：当氧气；糖源充足时；醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。方程式：C₂H₅OH+O₂→CH₃COOH+H₂O果酒在发酵过程中产生CO₂，所以发酵后，PH会变小。果醋在发酵过程中生成醋酸，所以发酵后，pH会变小。

腐乳是好氧发酵；主要用的是毛霉，是霉菌。它是利用毛霉产生的蛋白酶分解豆制品中的蛋白质，使用不易消化吸收的大分子蛋白质分解为易于吸收的多肽，并产生多种风味物质。

泡菜是厌氧发酵；主要用的是乳酸菌，是细菌。它是利用乳酸菌在厌氧条件下产生乳酸，使蔬菜产生酸味，同时产生多种风味物质。

【详解】

A；果酒制作是在无氧条件下；酵母菌能进行酒精发酵，酵母菌是真核生物，A正确；

B；发酵制果醋利用的微生物是醋酸菌；其为原核生物，B错误；

C；制泡菜利用的微生物是乳酸菌；其为原核生物，C错误；

D；制腐乳利用的微生物是毛霉；其为真核生物，D错误。

故选A。3、A【分析】【分析】

果酒；果醋和腐乳制作利用的微生物分别是酵母菌、醋酸菌和毛霉；其中酵母菌和毛霉属于真核生物，醋酸菌属于原核生物。

【详解】

A；制作果酒、果醋不需添加香辛料和盐等佐料；A错误；

B；果酒、果醋和腐乳制作过程中都需要防止杂菌污染；以免降低产品品质，B正确；

C；真核生物h和原核生物均以DNA做遗传物质；C正确；

D；酵母菌在无氧条件下通过呼吸作用产生酒精；果酒制作需要控制无氧条件，醋酸菌为好氧菌，果醋制作需要注意通气，D正确。

故选A。

【点睛】4、B【分析】【分析】

基因工程又叫转基因技术；是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。

【详解】

将一种生物的基因导入另一种生物体内需要采用基因工程技术。因此，将某种海鱼的抗冻基因导入西红柿细胞中，培育成耐低温的西红柿新品种，需要采用转基因技术，这样可以培育出在冬天也能长期保存的西红柿。

故选B。5、B【分析】【分析】

【详解】

A；种植转基因作物应与传统农业种植区隔离；防止转基因植物的基因通过杂交传给其他农作物，A正确；

B；动物取食转基因作物后；要经过消化吸收才进入身体，目的基因不可能直接进入动物细胞，B错误；

C；种植转基因植物有可能因基因扩散而影响野生植物的遗传多样性；C正确；

D；转基因植物的目的基因可能转入根际微生物；D正确。

故选B。

【点睛】6、B【分析】【分析】

单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内；使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞。利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，单克隆抗体制备过程中的两次筛选：第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞（A为B淋巴细胞，B为骨髓瘤细胞），不需要A；B、AA、BB型细胞。第二次筛选：利用多孔板法和抗原-抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。

【详解】

A；根据分析可知：小鼠免疫B细胞和骨髓瘤细胞融合后；培养基上会有5种类型的细胞，但最终生存下来的只有杂交瘤细胞，A错误；

B；由于小鼠骨髓瘤细胞是一类HGPRT代谢缺陷型细胞；因此骨髓瘤细胞合成DNA只第1条途径，但是A可以阻断DNA合成的第1条途径，所以HAT培养基中未融合的骨髓瘤细胞在A的阻遏下因不能合成DNA而死亡，B正确；

C；免疫B细胞属于高度分化的细胞；不再增殖，C错误；

D；HAT培养基中选择出的杂交瘤细胞都能无限增殖；但不是都能产生单克隆抗体，D错误。

故选B。7、D【分析】【分析】

1；PCR原理：在解旋酶作用下；打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4中游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。

2；PCR反应过程是：变性→复性→延伸。

3；结果：上述三步反应完成后；一个DNA分子就变成了两个DNA分子，随着重复次数的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反应过程都是在PCR扩增仪中完成的。

【详解】

A、PCR技术中DNA单链延伸的方向是沿着引物的5'端向3'端延伸的，据此可分析，PCR1过程中的产物AB是依赖引物a和引物b扩增的结果；A正确；

B、根据突变位点的产生可推知，引物c和引物b上均含有与模板链不能互补的碱基；B正确；

C；①过程是双螺旋解开的过程；即氢键断裂可通过先加热至90～95℃完成，而后再冷却至55～60℃使氢键形成，为子链的延伸做准备，C正确；

D；②过程为子链延伸的过程；该过程需要利用AB上链和CD下链之间的互补配对实现子链的延伸过程，D错误。

故选D。8、B【分析】【分析】

利用植物体细胞杂交技术培育杂种植物细胞；具体过程包括诱导植物细胞融合成杂种细胞和植物组织培养技术培育成杂种植株两过程。

【详解】

A；百合是植物；其细胞壁的成分为纤维素和果胶，要得到原生质体，需要用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞，A错误；

B；获得原生质体后；细胞已经分散，可以利用血细胞计数板进行计数，B正确；

C；从表格中看出；PEG浓度为40%时融合率最高，不管浓度过高还是过低对融合都是抑制作用，C错误；

D；融合后的原生质体需要再生出细胞壁；再经过脱分化形成愈伤组织，再经过再分化发育成杂种百合，D错误。

故选B。9、D【分析】【分析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤；基因表达载体包括目的基因；启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同；导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法；基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定；抗病鉴定、活性鉴定等。

【详解】

A；经限制酶切割后；质粒上出现2个黏性末端，多了2个游离的磷酸基团，DNA分子多了2个游离的磷酸基团，A错误；

B；一个基因表达载体一般包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等结构；B错误；

C；构建的重组质粒含有目的基因；但不一定能表达出所需的性状，还需要进一步检测，C错误；

D；将构建好的基因表达载体导入动物细胞常用显微注射法；D正确。

故选D。二、多选题(共9题，共18分)10、B:D【分析】【分析】

1；受精阶段主要包括：精子穿越放射冠和透明带；进入卵细胞膜，原核形成和配子结合。

2；阻止多精入卵的两道屏障：透明带反应和卵细胞膜反应。

3；多数哺乳动物卵子的形成和在卵巢内的贮备是胎儿出生前完成的；MⅠ是在雌性动物排卵前后完成的；场所在卵巢。MⅡ是在受精过程中完成的，场所在输卵管中。

【详解】

A；透明带反应是防止多精入卵的第一道屏障；A错误；

B；卵子形成时的减数第一次分裂过程在卵巢内完成；减数第二次分裂过程在输卵管完成，B正确；

C；卵子发生时；MⅠ和MⅡ过程是不连续的，初级卵母细胞和次级卵母细胞的细胞质不均等分配，C错误；

D；精子和卵子结合的过程中；卵子完成减数第二次分裂，形成雌原核，并排出第二极体，D正确。

故选BD。11、A:C【分析】【分析】

1；试管婴儿技术是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精；并通过培养发育为早期胚胎后，再经移植后产生后代的技术。

2；设计试管婴儿技术是通过体外受精获得许多胚胎；然后从中选择符合要求的胚胎，再经移植后产生后代的技术。

【详解】

A；在采集卵母细胞之前；需要给供卵者注射适量的促性腺激素，促进超数排卵，A正确；

B；从卵巢中吸取的卵母细胞；必须经体外培养成熟后才能与获能的精子受精，B错误；

C；受精过程中；卵母细胞会发生透明带反应和卵细胞膜反应，这是防止多精入卵的两道屏障，C正确；

D；以治疗为目的的设计试管婴儿技术；是救治患者最好、最快捷的办法之一，不是有利于生育健康的下一代，并存在伦理问题，D错误。

故选AC。

【点睛】12、B:C:D【分析】【分析】

PCR技术：1；概念：PCR全称为聚合酶链式反应；是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。2、原理：DNA复制。3、前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。4、条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。5、过程：①高温变性：DNA解旋过程；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开。

【详解】

A；DNA连接酶催化DNA片段连接；Taq酶催化脱氧核苷酸连接，故PCR扩增不需要DNA连接酶，A错误；

B；PCR技术的原理是碱基互补配对和DNA半保留复制；其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物，因此需设计一对与MT-like基因两端序列互补的引物，B正确；

C；为避免引物自连；设计引物时要避免引物之间形成互补碱基对，C正确；

D；因G-C碱基对之间的氢键多于A-T碱基对之间的氢键；GC碱基对含量高的双链的稳定性更高，故GC碱基对含量高的引物需要更高的退火温度，D正确。

故选BCD。

【点睛】13、A:B:C:D【分析】【分析】

分析曲线图：引物2的Tm高于引物1；说明引物2的热稳定性较高。

【详解】

A；PCR过程是目的基因DNA受热变性后解链为单链；引物与单链互补结合，合成的子链在Taq聚合酶的作用下进行延伸，所以两引物分别与DNA的两条互补单链结合，是子链延伸的起点，A正确；

B；PCR过程中；复性温度应低于引物的Tm值以提高PCR效率，B正确；

C；DNA含有的氢键数越多；其热稳定性越高，而A和T碱基对间有两个氢键，C和G碱基对间有三个氢键，曲线图显示：引物2的Tm高于引物1，说明引物2的热稳定性较高，因此若两引物的脱氧核苷酸数相同，推测引物2的（G＋C）含量较高，C正确；

D；适当减少引物2的脱氧核苷酸数；会降低引物2的热稳定性，可使其Tm值接近引物1，D正确。

故选ABCD。14、C:D【分析】【分析】

聚酶链式反应扩增DNA片段：

1.PCR原理：在解旋酶作用下；打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4中游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。

2.PCR反应过程是：变性→复性→延伸。

【详解】

A；利用PCR技术扩增目的基因时不需要解旋酶；该过程中氢键的断裂是通过高温完成的，而子链延伸过程需要耐高温的DNA聚合酶，A正确；

B；引物是子链合成延伸基础；即DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，也可以说子链沿着模板链的3’→5’方向延伸，B正确；

C、从理论上推测，第四轮循环产物共有24=16个DNA分子；其中有2个是模板链，只含有引物A的DNA片段即为与其中的一个模板链形成的1个DNA分子，因此，第四轮循环产物中只含有引物A的DNA片段所占的比例为1/16，C错误；

D、DNA复制为半保留复制，DNA复制n次，共形成2n个DNA，其中两个DNA含有母链和子链（引物A或引物B），（2n-2）个DNA都含有子链（含有引物A和引物B）。第三轮循环即DNA复制3次；共形成8个DNA，其中2个DNA含有引物A或引物B，6个DNA含有引物A和引物B，其中只有2个两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段，含量为1/4，D错误。

故选CD。

【点睛】15、B:C【分析】【分析】

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程；其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：

①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后；使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；

②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后；温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃；DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下；以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

【详解】

A；①过程为逆转录；所需的原料是脱氧核苷酸，A正确；

B；②过程由DNA单链合成DNA双链过程所需要的DNA聚合酶不需要耐高温；B错误；

C；③过程为变性；温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链，不需要DNA解旋酶破坏氢键，C错误；

D；④过程为复性；温度降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条DNA单链结合，但引物对之间不能互补配对，D正确。

故选BC。16、A:C:D【分析】【分析】

1；泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌．在无氧条件下；乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。2、在制作泡菜时所配制的泡菜盐水要煮沸，以杀灭盐水中的微生物，防止杂菌污染。泡菜制作过程中，温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短、容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。

【详解】

A；“泡菜之水；用花椒和盐煮沸”的目的提升泡菜味道、减少水中的溶氧量和消毒杀菌防止杂菌污染，A错误；

B；“霉花”是指泡菜坛表面的一层白膜；主要由酵母菌繁殖形成，酵母菌往往来自蔬菜，B正确；

C；“坛沿外水须隔日一换；勿令其干”的目的是保证坛内的无氧环境，C错误；

D；制作泡菜的过程；亚硝酸盐的含量呈先上升后下降的趋势，D错误。

故选ACD。17、A:B:C【分析】【分析】

1；骨髓瘤细胞为无限增殖的细胞；分裂能力强，制备单克隆抗体的过程中还需该杂交细胞具备分泌特异性抗体的功能，而浆细胞为能够分泌抗体的细胞，故与骨髓瘤细胞融合的B淋巴细胞为能分泌抗体的浆细胞。

2；骨髓瘤细胞与B淋巴细胞在融合的过程中可能会出现多种融合结果；如骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合，B淋巴细胞与B淋巴细胞融合，而实验需要的是骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的细胞，需要用选择性培养基进行筛选，但只能筛选出能杂交瘤细胞，而要筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞则需要进行专一性抗体检测。

【详解】

A；与骨髓瘤细胞融合的B淋巴细胞取自脾脏；不一定是能分泌抗体的浆细胞，A错误；

B；骨髓瘤细胞与B淋巴细胞在融合的过程中可能会出现多种融合结果；如骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合，B淋巴细胞与B淋巴细胞融合，而实验需要的是骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的细胞，需要用选择性培养基进行筛选，但是只能筛选出能杂交瘤细胞，而要筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞则需要进行专一性抗体检测，B错误；

C；抗体为分泌蛋白；需要内质网和高尔基体对其进行加工，大肠杆菌为原核生物，无高尔基体和内质网，为获得结构正确的嵌合抗体，受体细胞不应该选用大肠杆菌，C错误；

D；结合题干“鼠源抗体具有外源性；会被人体免疫系统当作抗原而清除。用人抗体的C区替换鼠源抗体的C区，保留鼠单抗的V区，可构建人一鼠嵌合抗体”可知，该抗体不是原本的鼠源抗体，保留了其V区，但是其中还有一部分来自于人本身，使得人一鼠嵌合抗体在保留抗体特异性的同时外源性下降，D正确。

故选ABC。18、A:B:C【分析】【分析】

基因工程：目的基因的筛选与获取；构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。

分泌蛋白的合成：首先；在游离的核糖体中以氨基酸为原料开始多肽链的合成。当合成了一段肽链后，这段肽链会与核糖体一起转移到粗面内质网上继续合成过程，并且边合成边转移到内质网腔内，再经过加工；折叠，形成具有一定空间结构的蛋白质。内质网膜鼓出形成囊泡，包裹着蛋白质离开内质网，到达高尔基体，与高尔基体融合，高尔基体对蛋白质做进一步的加工，然后形成包裹着蛋白质的囊泡转运到细胞膜，与细胞膜融合。

【详解】

A；科研人员根据AmyS2的氨基酸序列设计并人工合成了AmyS2基因；因此获得AmyS2基因并将其导入芽孢杆菌得到AmyS2的过程是通过蛋白质工程和基因工程实现的，A错误；

B；BamHI会破坏AmyS2基因；B错误；

C；在分泌蛋白的合成过程中；信号肽序列可帮助肽链进入内质网，在内质网被切割，因此信号肽基因表达的产物可帮助核糖体上合成的AmyS2进入内质网，但不能引导其进入高尔基体，C错误；

D；可用PCR技术检测芽孢杆菌的DNA上是否插入了AmyS2基因；如果经过PCR扩增，不出现扩增产物，说明没有插入基因，反之，则成功插入，D正确。

故选ABC。三、填空题(共5题，共10分)19、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】贴附在瓶壁上细胞贴壁相互抑制停止分裂增殖细胞的接触抑制。20、略

【分析】【分析】

分析图1：表示多年前感染EV并已康复的甲；乙两人的血液中抗EV-GP抗体的水平。根据曲线图可知；多年前感染EV并已康复的甲的血液中抗EV-GP抗体水平明显高于乙和对照组。

分析图2：表示单抗与病毒混合后病毒对宿主细胞的感染率。根据柱形图可知；单克隆抗体和病毒混合，加入单抗Ⅲ；Ⅴ后，病毒对宿主细胞的感染率明显低于其他组别。

【详解】

（1）由题意可知；新型冠状病毒表面的S-蛋白作为抗原刺激淋巴细胞，使机体产生特异性免疫反应，人细胞膜上的ACE2的化学本质是蛋白质。

（2）免疫系统对被新冠病毒感染后肺细胞强烈攻击引发肺炎；此时可通过适度使用免疫抑制剂对病人进行治疗，使其免疫功能下降，以避免肺部严重受损。

（3）由图1可知；多年前感染EV并已康复的甲的血液中抗EV-GP抗体水平明显高于乙和对照组，故应选取甲的B细胞用以制备单克隆抗体。

（4）由图2可知；单克隆抗体和病毒混合，加入单抗Ⅲ后，病毒对宿主细胞的感染率较低。因此抑制效果最好的单抗是Ⅲ。

（5）患者康复后一段时间；若再次受到该病毒的攻击，机体内相应的记忆细胞迅速增殖分化，产生大量的浆细胞和细胞毒性T细胞。

【点睛】

本题结合图解，考查病毒、单克隆抗体的制备等，要求考生识记病毒的结构，明确病毒没有细胞结构；识记单克隆抗体的制备过程，掌握其优点及相关应用，能结合图中信息准确答题【解析】①.抗原②.特异③.糖蛋白（或蛋白质）④.免疫抑制剂⑤.甲⑥.Ⅲ⑦.记忆21、略

【分析】【详解】

生物武器是利用生物战剂杀伤人员、牲畜、毁坏植物的武器。致病能力强、攻击范围广。它可以直接或通过食物、生活必需品和带菌昆虫等散布，经由呼吸道、消化道和皮肤等侵入人、畜体内，造成大规模伤亡，同时可毁坏植物，该说法错误。【解析】错误22、略

【分析】【详解】

蛋白质形成二硫键，使蛋白质的结构更加稳定，因此T4溶菌酶的热稳定性会提高。这项技术属于蛋白质工程技术，其步骤为从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→获得所需的蛋白质。【解析】会提高T4溶菌酶的耐热性。这项技术属于蛋白质工程技术，该技术的要点是从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→获得所需的蛋白质。23、略

【分析】【详解】

生殖性克隆指利用克隆技术获得胚胎；并将胚胎孕育成为人类个体的克隆性技术，其目的是用于生育，获得人的复制品；治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定细胞或组织等，用于治疗性移植的克隆性技术，其目的是用于医学研究和疾病的治疗。

据概念可知，实现生殖性克隆和治疗性克隆都会用到的技术有体细胞核移植技术、动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术、胚胎移植技术等；治疗性克隆在获取胚胎干细胞后，根据治疗目的诱导干细胞分化形成各种组织和器官，供患者移植用，故治疗性克隆还会应用到的技术为干细胞培养技术。【解析】生殖性克隆指利用克隆技术获得胚胎，并将胚胎孕育成为人类个体的克隆性技术治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定细胞或组织等，用于治疗性移植的克隆性技术体细胞核移植技术、动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术、胚胎移植技术等体细胞核移植技术，早期胚胎培养技术、动物细胞培养技术、胚胎移植技术、干细胞培养技术等用于生育，获得人的复制品用于医学研究和疾病的治疗四、判断题(共3题，共9分)24、B【分析】【详解】

目前，种植的转基因作物中以大豆和玉米最多，其次是转基因棉花和油菜，所以错误。25、A【分析】【详解】

目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作法。也有人采用梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等方法。这些方法是在没有穿透卵母细胞透明带的情况下去核或使其中的DNA变性，故正确。26、B【分析】【详解】

来源于自然界的目的基因导入植物体后，可能破坏原有的基因结构，具有不确定性，外源基因也可能通过花粉传播，使其他植物成为“超级植物"等，所以如果转基因植物的外源基因来源于自然界，也可能存在安全性问题。本说法错误。五、实验题(共4题，共28分)27、略

【分析】【分析】

1；微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐；此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。

2；统计菌落数目使用的方法有显微镜直接计数法和活菌计数法；其中活菌计数法即稀释涂布平板法，一般选择菌落数目在30-300的平板进行计数。

【详解】

（1）平板倒置后既可使培养基表面的水分更好地挥发；又可防止冷凝水滴落培养基，造成污染，影响实验结果。

（2）所用培养基中的牛肉膏除为微生物提供碳源和氮源外；还能提供磷酸盐和维生素。区分菌落种类的依据是菌落的形状；大小、隆起程度和颜色等特征。

（3）统计菌落种类和数量时要每隔24h观察统计一次；直到各类菌落数目稳定，以防因培养时间不足而导致遗漏菌落的种类和数目。表格中3个平板的平均菌落数为（41+35+38）÷3=38个，低于国家标准，因此所取水样符合饮用水标准。

【点睛】

本题考查微生物分离和培养的相关知识，要求考生识记培养基的成分，掌握微生物分离和计数的方法，属于考纲理解层次的考查。【解析】防止冷凝水滴落污染培养基碳源氮源维生素菌落大小、形状、隆起程度和颜色等符合饮用水的标准28、略

【分析】【分析】

1；动物细胞培养的条件：

（1）无菌；无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液；以清除代谢废物；

（2）营养物质：糖；氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等；还需加入血清、血浆等天然物质；

（3）适宜的温度和pH；

（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。

2；实验操作步骤的安排一般如下：第一步：取材随机均分为几组；编号；第二步：不同组自变量的处理；第三步：把上述各组放在无关变量相同且适宜等条件下处理一段时间；第四步：观察并记录比较相应的因变量。根据题意可知，本实验的目的是验证生物制剂W对动物不同细胞的分裂具有促进作用，则该实验的自变量是细胞的种类及是否加入生物制剂W，因变量是细胞悬液中细胞的数目，对细胞直接计数可以采用血球板计数法。

【详解】

（1）①动物细胞培养前需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶分别处理正常肝组织和肝癌组织获得分散的细胞。将两种分散的细胞加入培养液中制成两种细胞悬液。动物细胞的培养液中需要加入葡萄糖；氨基酸、无机盐、维生素、动物血清；为了保证无菌的条件，一般在培养液中加入一定量的抗生素。

②在显微镜下可以采用血球计数板直接计数两种细胞悬液中细胞的数量；并进行记录。

③本实验的目的是验证生物制剂W对动物不同细胞的分裂具有促进作用；根据题干所给实验材料可知，不同细胞是指正常肝细胞和癌细胞，因此该实验应该设置四组，变量为细胞的种类及是否加入生物制剂W，具体如下：

A组：培养液中加入正常肝细胞悬液；B组：培养液中加入与之等量癌细胞悬液；从A；B组中各取出一半培养瓶作为C、D组；C、D两组：培养液中加入等量的生物制剂W。放入动物细胞培养箱在适宜条件下培养。

④该实验的因变量是计数细胞悬液中细胞的数量；因此各组样品在培养箱中培养一段合适的时间后，每组取部分样品，加入胰蛋白酶或胶原蛋白酶摇匀，将细胞分散成单个，然后在显微镜下计数。

（2）预测实验结果；若较长时间培养，因为正常细胞的增殖次数有限，故A组中细胞数量最少，由于W促进细胞增殖的作用，因此C组细胞数量多于A组；而癌细胞可以无限增殖，且由于其细胞膜上的糖蛋白减少，易于扩散和转移，同时失去接触抑制，可大量培养增殖，故B；D两组中细胞数量明显更多，且由于W的促进作用，D组多于B组；由于此实验是验证实验，所以实验结果是加入生物制剂W的实验组比对照组细胞数多，同时癌细胞分裂能力比正常细胞高，故绘制坐标曲线具体如下:

【点睛】

本题考查验证实验，要求学生明确实验的目的，正确区分实验的变量，能够根据题意判断自变量和因变量，然后根据设计实验的单一变量和等量原则，同时结合题干所给的实验材料完善实验设计，并能预测实验结果和绘制相关曲线图表示实验的结果。【解析】胰蛋白酶（胶原蛋白酶）葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清抗生素血球计数板等量肝癌细胞悬液等量生物制剂W胰蛋白酶（胶原蛋白酶）29、略

【分析】【分析】

1；基因工程的四个步骤：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。

2、在基因工程操作中，常用原核生物作为受体细胞，其中以大肠杆菌应用最为广泛。研究人员一般先用Ca2＋处理大肠杆菌细胞；使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中。

【详解】

（1）利用RNA通过①过程（逆转录）获得cDNA需要逆转录酶；已知真核生物基因的mRNA在3'端加有PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）保护尾部不被降解。逆转录第一步以mRMA为模板合成DNA单链；新链与模板链反向平行，由于新链只能由5'端向3'端延伸，所以逆转录第一步的引物应与mRNA尾部的PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）互补配对，即用多聚胸腺嘧啶脱氧核苷酸序列为引物；设计引物的目的是使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸。

（2）对逆转录得到的cDNA扩增时；引物的5'端结合母链的3'端之后DNA聚合酶开始扩增DNA。为确保其与pET41a质粒定向连接，应使用不同种的限制酶切割质粒和目的基因，由图可知，使用EcoRI酶会破环SSB基因，故应在相应引物的5'端加上BamHI和XhoⅠ酶切位点。

（3）由题图分析可知：质粒上存在卡那霉素和氯霉素抗性基因，由于XhoⅠ酶破坏了氯霉素抗性基因，所以成功组装的重组质粒不能在添加了氯霉素的培养基上生长，③过程用重组质粒转染大肠杆菌时，需要用Ca2+处理大肠杆菌；目的是使大肠杆菌成为易于吸收外源DNA的状态，然后分别将处理后的大肠杆菌先接种在添加卡那霉素的培养基（A）上培养，待长出菌落后再利用无菌膜同位置转移到添加氯霉素的培养基（B）上培养，收集能在含卡那霉素的培养基上生长而不能在含氯霉素培养基上生长的菌落进一步纯化后将菌体破碎处理，经筛选即可得到SSB蛋白。

（4）将改造后的大肠杆菌生产的SSB蛋白注入到小鼠体内是为了检测该蛋白是否具有抗原性，如果该蛋白有抗原性，会引起机体的免疫反应，产生相应抗体。则后续实验内容应为抽取小鼠血液提取其中的抗体，利用抗原—抗体杂交的方法检测其是否含有抗SSB的抗体。【解析】(1)逆转录用多聚胸腺嘧啶脱氧核苷酸序列为引物

使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸

(2)5’BamHⅠ和XhoI

(3)使大肠杆菌成为易于吸收外源DNA的状态卡那霉素氯霉素能在含卡那霉素的培养基上生长而不能在含氯霉素培养基上生长的。

(4)提取其中的抗体，利用抗原—抗体杂交的方法检测其是否含有抗SSB的抗体30、略

【分析】【分析】

基因突变是指DNA分子中发生碱基对的替换；增添和缺失；而引起的基因结构的改变。翻译是指在核糖体上，以mRNA为模板、以氨基酸为原料合成蛋白质的过程，该过程还需要tRNA来运转氨基酸。

密码子由位于mRNA上决定一个氨基酸的三个相邻的碱基组成。终止密码子的作用是终止翻译过程。

基因工程中检测目的基因在受体细胞内是否成功表达可以用抗原-抗体杂交技术。

【详解】

（1）由题干信息可知；黏多糖贮积症患者细胞中IDUA基因突变后，转录出的mRNA长度不变，说明其没有发生碱基对的增添和缺失，因为这两者改变会导致转录出的mRNA长度改变，因此推测其基因突变是由于碱基对替换。由于终止密码子提前出现，导致翻译提前终止，肽链变短，IDUA酶分子量变小，空间结构改变而失活。

（2）由题干可知；抑制性tRNA（sup-tRNA）可以最终诱导核糖体通读mRNA上的遗传信息合成具有功能的全长蛋白，并且抑制性tRNA（sup-tRNA）与普通tRNA的结构；功能相同，据此推测该抑制性tRNA可以携带氨基酸至核糖体并与终止密码子碱基配对使翻译过程继续。

（3）本实验目的是比较携带不同氨基酸的sup-tRNA的通读效果；需要保证实验组细胞含有突变IDUA基因，即其不能合成具有正常功能的IDUA酶（防止正常IDUA酶对实验结果产生干扰），同时保证在不同的实验组细胞中可以转录出携带不同中氨基酸的sup-tRNA，因此实验组中受体细胞中应该含有导入携带不同氨基酸的sup-tRNA基因和突变IDUA基因。若要判断各个实验组细胞中携带不同氨基酸的sup-tRNA是否成功诱导了具有功能的IDUA酶，可以采用该酶的特异性抗体对其进行检测，即进行抗原-抗体杂交。分析题图可知，与对照组（含正常IDUA基因的组）相比，含携带酪氨酸的sup-tRNA的受体细胞中表达的全长IDUA蛋白量比其他实验组都多，说明其能有效恢复细胞中全长IDUA蛋白的合成，且效果最好。

（4）由以上实验可知，携带酪氨酸的sup-tRNA能有效诱导核糖体对突变IDUA基因转录出的mRNA进行通读，进而产生具有正常功能的IDUA酶，因此利用携带酪氨酸的sup-tRNA对IDUA突变基因纯合小鼠进行治疗，与不进行治疗的IDUA突变基因纯合小鼠相比，治疗组小鼠的IDUA酶活性高，组织黏多糖积累量少；同时，利用携带酪氨酸的sup-tRNA对IDUA基因敲除小鼠进行治疗，与不进行治疗的IDUA基因敲除小鼠相比，由于二者都不含有IDUA基因，则其细胞内都没有相应mRNA，因此携带酪氨酸的sup-tRNA无法发挥作用，最终导致治疗组与不治疗组的IDUA酶活性与组织黏多糖积累量无明显差异。【解析】(1)替换减少。

(2)识别终止密码子并携带氨基