检验科血清碱性磷酸酶测定标准操作规程

玉环县人民医院检验科文件编号：JYK-3-SH-0010版本/修订号：C/0主题内容生化室作业指导书生效日期：20110701第4页共4页编写制定日期审核审核日期：核准执行日期李永臣2013-08-01李永臣2013-08-01章林华2013-08-01血清碱性磷酸酶测定标准操作规程1检验申请单独检验项目申请：血清碱性磷酸酶测定(缩写ALP)；组合项目申请：血生化中肝功能测定。临床医生根据需要提出检验申请。2标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2～8℃）稳定7天。-20℃保存稳定60天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，和12h以上禁食空腹状态。2.3.2可以使用EDTA、枸橼酸盐、草酸盐抗凝的血液标本，但肝素抗凝剂可引起反应液混浊。3方法原理无色的对硝基苯磷酸二钠在碱性磷酸酶的作用下，生成在405nm处有特异吸收的淡黄色对硝基苯酚。通过测定在405nm处吸光度的变化速率来计算ALP的活性。碱性磷酸酶对硝基苯磷酸二钠+H2O对硝基苯酚+H3PO44试剂及其他用品4.1试剂：碱性磷酸酶测定试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品。4.2试剂盒保存：未启封试剂盒在2～8℃保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓冰箱内稳定14天。开盖后避免污染。4.3试剂盒准备：液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。4.4试剂盒主要成分：AMP（pH10.2）1000mmol/L，磷酸对硝基酚10mmol/L。含有稳定剂与保护剂。5校准品与校准模式校准品：不使用校准品，以p-硝基苯的双波长（410/470nm）毫摩尔消光系数计算ALP活性。6质控品与室内质控规则6.1质控品采用由Beckman-Coulter公司提供的两个不同水平未定值质控血清。6.2质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。6.3质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。7适用仪器适用AEROSET和C16000全自动生化分析仪器。8标本检测步骤装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。9主要分析参数参见说明书。10结果计算公式中ΔA/min即单位时间中吸光度降低的值，VT为总反应体积ml（试剂总量＋标本量），Vs为标本体积ml，l为比色皿光径cm，ε为对硝基酚的410/470nm测定的毫摩尔消光系数。11检验结果的报告及范围11.1结果的报告11.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围：5-1650U/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。12操作性能12.1精密度：批内CV<3.5%；总CV<5.3%。12.2线性范围：5-1000U/L。12.3方法的有限性及干扰因素：胆红素浓度1197μmol/L，血红蛋白浓度5g/L，甘油三酯浓度45.2mmol/L没有明显干扰。13参考范围及医学决定水平参考范围：男性<12岁:<500U/L;12-15岁：<750U/L；>20岁：45-125U/L.女性<15岁:<500U/L;>15岁：40-150U/L；20-49岁：35-100U/L；>=50：50-135U/L。14临床意义14.1ALP在碱性条件下水解各种磷酸酯键，又具有磷酸转移酶的作用。广泛分布于各组织细胞膜上和体液中，以骨骼、肝、肾、肠和胎盘含量较多。ALP有4种同工酶。14.2血清ALP活性测定是鉴别肝胆疾病和骨质增生不可缺少的检查项目。肝胆疾病如胆结石、肿瘤或炎症造成的胆汁郁积等ALP升高，骨疾病如Paget病、骨软化症（佝偻病）、骨转移瘤和甲状旁腺功能亢进等也有ALP升高。14.3霍奇金病、充血性心衰、溃疡性结肠炎等疾病时ALP可有中度升高。14.4妊娠3个月时可有非病理性升高。15结果审核以及分析与相关项目的联系15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3相关项目：审核与肝功能组合中其他项目的关系。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。16威胁生命的“紧急值”及报告规定暂无规定。17有关引用程序与文件17.1Abbott自动生化分析仪仪器标准操作规程。17.2生化检验室内质控标准操作程序。17.3检验结果审核程序。17.4标本送检和接收程序。18参考文献18.1陆永绥，张伟民主编.临床检验管