《DNA的粗提取和鉴定》教案

1/4课题1DNA的粗提取与鉴定【学习目标】1．通过阅读教材，能准确说出DNA的理化特性及提取和鉴定的原理；2．通过观看实验视频，初步学会DNA粗提取和鉴定方法，知道相关溶液的作用机理。【教学重点】提取DNA的相关原理和步骤【教学难点】提取DNA的相关原理和步骤【教学过程】一、开门见山：讲解本实验的目的是提取DNA和DNA的鉴定，其中提取DNA是本实验的重点和难点。提出问题：“DNA主要存在于什么结构上？”“如何提取DNA？”“选什么材料好？”二、达成共识：1、选适宜材料：选取动物细胞，易打破细胞结构2、破坏细胞膜、核膜结构，取核物质。3、将DNA与蛋白质等物质分开，得DNA4、去掉DNA中杂质，提纯DNA。三、探究实验原理：屏幕展示表格1NaCl2mo1/LNaCl0.14mo1/LNaCl0.015mo1/LDNA蛋白质表格2DNA蛋白质杂质95%酒精不同浓度的NaC1溶液可溶解或析出DNA。95%酒精可提取DNA。填表1：NaCl2mo1/LNaC10.4mo1/LNaC10.015mo1/LDNA最大最小变大蛋白质解聚最大变小填表2：DNA蛋白质杂质95%酒精不溶可溶可溶通过对实验原理的预习，表格的比较，使学生明确了各溶液的用途，保证理解实验。请学生代表简述DNA提取实验步骤[实验设计一]投影展示实验设计思路：鸡血细胞液①aDNA释放②bDNA与蛋白质的分离③cDNA析出④dDNA浓缩（提纯）获得鸡血细胞核物质：提核物质→溶解→析出→溶解→析出四、实验步骤：引导学生讨论、回忆并回答目的①~⑨。①防止血凝。②加速血细胞破裂。③溶解DNA。④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L，促DNA最大限度地析出。⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上。⑥使含DNA的黏稠物尽可能多地溶于溶液中。⑦除去含DNA的滤液中的杂质。⑧提取DNA。⑨A：出现蓝色。B：无变化五、讨论与结论：投影给出如下讨论提纲，供学生讨论。（1）DNA粗提取过程中的关键是哪几步？（2）提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液？（3）DNA的直径约为2nm，实验中出现的丝状物的粗细是否表示一个DNA分子直径的大小？学生分组进行讨论并发表讨论结果。教师对讨论进行全程指导，并与学生一起归纳总结。（1）a.提取鸡血细胞的核物质。应用低渗原理和机械搅拌，可得到最大量的DNA。b.析出DNA黏稠物。加蒸馏水要慢，搅拌要轻。c.沉淀DNA时，必须用冷酒精。（2）提取DNA，去除杂质是关键。由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去（含蛋白质）。（3）实验中出现的丝状物是肉眼可以观察到的，这种丝状物的直径要比DNA分子的直径2nm大许多倍，所以实验中出现的丝状物并不表示一个DNA分子的直径。六、实验结论：细胞中有DNA，DNA遇二苯胺试剂在沸水浴中变蓝色。七、补充知识：1、鉴定DNA的其他方法用紫外灯照射法鉴定DNA效果很好。具体鉴定方法如下。1.配制染色剂。用蒸馏水配制万分之五的溴化乙锭（EB）溶液。2.将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴一滴EB溶液染色。3.将蜡纸放在紫外灯（260nm）下照射（暗室中），可见橙红色的荧光（DNA的紫外吸收高峰在280nm处）。2、DNA粗提取与鉴定的另一种方法1.材料用具新鲜菜花（或蒜黄、菠菜）。塑料烧杯，量筒，玻璃棒，尼龙纱布，陶瓷研钵，试管，试管架，试管夹，漏斗，酒精灯，石棉网，三角架，火柴，刀片，天平。研磨液，体积分数为95%的酒精溶液，二苯胺试剂，蒸馏水。2.方法步骤A.DNA的粗提取（1）准备材料：将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室，至少24小时。（2）取材：称取30g菜花，去梗取花，切碎。（3）研磨：将碎菜花放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。（4）过滤：在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液过滤入烧杯中（有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心，用1000r/min的旋转频率，离心2~5min；取上清液放入烧杯中）。在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。（5）加冷酒精：将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的酒精溶液中，并且玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液（玻璃棒不要直插烧杯底部）。沉淀3~5min后，可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，絮状物会缠在玻璃棒上。B.DNA的鉴定（1）配制二苯胺试剂：取0.1mLB液；滴入到10mLA液中，混匀。（2）鉴定：取4mLDNA提取液放入试管中，加入4mL二苯胺试剂，混匀后观察溶液颜色（不变蓝）。用沸水浴（100℃）加热10min。在加热过程中，随时注意试管中溶液颜色的变化（逐渐出现浅蓝色）。八、结课：这节课咱们验证了细胞是