高中生物：微生物的利用

第十单元生物技术实践

专题24微生物的利用

挖命题

【考情探究】

5年考情

考点考向要求预测热度

考题示例素养要素难度

2018课标全国II,37,15

1微生物的实验室培养培养基与微生物的纯化中★★★

实验与分科学思维、

探究2018课标全国I,37,15社会责任

2微生物的分离与计数微生物的分离与计数中★★★

分

分析解读本专题内容一直是高考的命题热点，考查内容集中在微生物的实验室培养、特定微生物数量的

测定方法、培养基对微生物的选择作用等;题目情境贴近生活或科技进展,但试题答案落脚于教材主干知识。

预计2020年高考中这种命题趋势还将继续存在。复习时应注意对各种技术的系统理解和横向对比，可将果

酒、果醋与泡菜的制作、特定微生物的分离纯化等实践操作构建过程模型,以加深对相关技术的记忆和理解。

【真题典例】

(2017课标全国I,37,15分)某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH),供植物

吸收和利用。回答下列问题：

(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_________，能分

一。自养生物能以CQ为礁源，而能分聃东

解尿素的细菌不能以尿素的分解产物co,作为碳源，原国是二22221二「但向'用

去的佃西是弁芥生物

葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄藤的主要作用是________(答出两点即可)。

为绛选可分科东多.的的函，缸制语界坂时

(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择_______(填“尿素”庄逸持仪乐彖分解商能*利用，而作乐春分

料萌不能利用的氮源

“NH4NOJ或'“尿素+NHPOJ)作为氮源二不选择其他两组的原因为

“QKH,PO]N%HPQ具有两支“身份”：无机拉

(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH、PO,和Na,HPO/,其作用有_________的孑提修无机管养；H/。了叫P%枸我

________________(答出两点即可)。pH傲疗不

❶命题技巧❸易错易混❺参考答案

(1)将教材中有关微生物培养和利用的基础(1)不能正确区别不同微生物的碳源和氮源(I)版酶分傕尿素的细菌是异养生物，

知识巧妙组合和应用，突出主干知识的考查，(2)不能全面掌握葡萄糖和无机盐在微生不能利用CO2来合成存机物为细胞生命活动

提供能量，为其他有机物的合成提供原料

重视生物基础知识和技能的应用入普斗^^作用

(2)设问注重基础，指向明晰，考杳注重能❹核心系养(2)尿素其他两组都含有NH4NO3,能分

I力，立意精准，贴近高中生学习实际(1)科学思维：理解氮源和无机盐在微生解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能

|利用NH4NO3,不能起到筛选作用

❷核心考点物培养中的作用,并作出应用性判断

I(1)微生物的分离和培养(2)科学探究：能根据预设目标，设计筛选(3)为细菌生长提供无机营养，作为缓冲

I(2)培养基对微生物的选择极目的菌的方案，并运用科学术语报告实验结果剂保持细胞生长过程中pH稳定

❻试题精析

■详解参见P363

破考点

考点一微生物的实验室培养

【考点集训I】

考向培养基与微生物的纯化

1.(2019届吉林实验中学第三次月考,41,15分)下表是某同学列出的分离土壤中微生物的培养基配方，据此

回答下列问题：

KH2P。4Na2HP04MgS04-7H20尿素葡萄糖琼脂

14g2.1g0.2g10g10.0g15.0g

将上述物质溶解后,用蒸储水定容到1000mLo

⑴从作用上看,该培养基属于培养基,提供氮源的物质是,细菌能利用该氮源是由于体

内能合成酶。

⑵在对分离的能分解尿素的细菌进行鉴定时,还需在培养基中加入指示剂,若指示剂变,

说明有目的菌株存在。

⑶为了测定微生物的数量,接种时应采用法，某同学在4个培养基上分别接种稀释倍数

为106的土壤样液0.1吐,培养后菌落数分别为180、155、176、129个，则每升原土壤样液中上述微生物

的数量为个,测定的活菌数比实际活菌数（填“低”“高”或“基本一致”）。

答案⑴选择（1分）尿素K（2）酚红红（3）稀释涂布平板1.6X1012低

2.（2019届宁夏育才中学第二次月考,37,15分）为了调查银川市自来水水源地的水质情况,某研究小组对该

地自来水水样中的大肠杆菌进行了测定,请回答下列问题：

⑴该小组采用平板划线法分离提纯水样中的细菌,划线时在培养基上共画了4个区域，则需要次

灼烧接种环。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线,这样做的目的

是»

⑵在纯化菌种时，所用的培养基都需要在接种前用法进行灭菌。将1mL水样稀释1

000倍,在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液,经适宜条件下培养后,3个平板上的菌落数分别为

51、50和49。据此可得出每升水样中的活菌数为。要使该实验所得结果可靠，还应该同时

在另一平板上接种作为对照进行实验。

⑶菌种需临时保藏时,要先将菌种接种到试管的培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长

成后,将试管放入冰箱中保藏。但此方法存在的缺点

是O

⑷在培养时,需将培养皿倒置并放在中。实验结束时，使用过的培养基应该进行

处理后才能丢弃。

答案（1）5（1分）将聚集的菌种逐步稀释以便获得单个菌种的表面（2）高压蒸汽灭菌5.0X108等量

的无菌水（3）固体斜面（1分）40（1分）保存的时间不长,菌种容易被污染或产生变异⑷恒温培养

箱（1分）灭菌（1分）

考点二微生物的分离与计数

【考点集训】

考向微生物的分离与计数

1.（2019届湖北华中师大附中高三上学期期中,37,15分）为更好地解决冬季污水处理厂氨氮去除率低的问

题，某研究小组尝试从海水中筛选在低温下能高效去除氨氮的硝化细菌。将采集到的海水样本加入液体培养

基A（其氮源为氨态氮），放在24P的培养箱中培养5天,然后取少量培养液在固体培养基上涂布,得到三种

形态、颜色均不相同的单菌落。回答下列问题：

⑴液体培养基A应选用的灭菌方法是（填“高压蒸汽灭菌法”或“干热灭菌法”），不选另外

一种的原因是.

⑵在配制培养基A时，对碳源的要求是（填“提供有机碳源”或“不提供碳源”），理由

是O

⑶最后分离得到的单菌落有三种,其形态、颜色各不相同,表明硝化细菌

⑷该研究小组在上述实验的基础上,已经获得了高效去除氨氮的硝化细胞,则需要经过处理，才能

筛选出符合要求的能高效去除氨氮的硝化细菌。

答案（1）高压蒸汽灭菌法（2分）干热灭菌法针对耐高温需要保持干燥的物品,若选干热灭菌法会使培养

基中的水分蒸发（3分）（2）不提供碳源（2分）硝化细菌能进行化能合成作用，为自养生物（3分）（3）存

在不同的种类（3分）（4）低温（2分）

2.（2019届四川南充一诊,37,15分）有机磷农药是用于防治植物害虫的含磷有机化合物，广泛应用于农业生

产中,有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标，不少品种对人、畜的毒性很强,人误食后如不及时医治就会

危及生命。某班同学欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的微生物。请回答下列问题：

⑴为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，可在被有机磷农药污染的土壤中取样,并在含有碳源、氮源及

等的选择培养基上添加适量的进行选择培养。

⑵在制备固体培养基时需加入的常用凝固剂是。若培养基需要调节PH,则应在灭菌之（填

“前”或“后”）调节。

⑶该小组在接种前,随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间,这样做的目的是

⑷若要测定培养液中选定菌种的菌体数,既可在显微镜下用直接计数，也可选用

法统计活菌数目。

⑸将获得的3种待选微生物菌种甲、乙、丙分别接种在1L含20mg有机磷农药的相同培养液中培养（培

养液中其他营养物质充裕、条件适宜），观察从实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为

32小时、45小时、16小时，则应选择微生物（填“甲”“乙”或“丙”）作为菌种进行后续培养，

理由是O

答案（1）水和无机盐有机磷农药（2）琼脂前（3）检测培养基平板灭菌是否合格⑷血细胞计数板

稀释涂布平板（5）丙微生物丙分解有机磷农药的能力比甲、乙强

过专题

【五年高考】

A组统一命题•课标卷题组

1.（2018课标全国I,37,15分）将马铃薯去皮切块,加水煮沸一定时间,过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸

出液中加入一定量蔗糖和琼脂,用水定容后灭菌,得到M培养基。

回答下列问题：

（1）M培养基若用于真菌的筛选,则培养基中应加入链霉素以抑制的生长,加入了链霉素的培养基属于

________培养基。

（2）M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质,营养物质类型除氮源外还有

（答出两点即可）.氮源进入细胞后,可参与合成的生物大分子有（答出两点即可）。

⑶若在M培养基中用淀粉取代蔗糖,接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能

产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是

⑷甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量,在同一稀释倍数下得到以下结果:

甲同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是110,140和149,取平均值133;

乙同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是27、169和176,取平均值1240

有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低,其原因是。

答案⑴细菌选择⑵碳源、无机盐蛋白质、核酸

⑶碘液淀粉遇碘液显蓝色,产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解,形成透明圈⑷乙同学的结果中,1个平板

的计数结果与另2个相差悬殊,结果的重复性差

2.（2018课标全国II,37,15分）在生产、生活和科研实践中,经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。

回答下列问题：

⑴在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具（填“可以”或“不可以”）放入干热灭菌箱中进行干

热灭菌。

⑵牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法,与煮沸消毒法相比,这两种方法的优点

是O

⑶密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒,其原因是紫外线能。在照射前,适量喷

洒，可强化消毒效果。

⑷水厂供应的自来水通常是经过（填“氨气”“乙醇”或“高镒酸钾”）消毒的。

⑸某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求,而锅内并没有达到相应温度,最可能的原因

是O

答案（1）可以（2）在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少⑶破坏DNA结构消毒液（4）氯气

⑸未将锅内冷空气排尽

3.（2018课标全国III,37,15分）回答下列与酵母菌有关的问题：

⑴分离培养酵母菌通常使用（填“牛肉膏蛋白月东”“MS”或“麦芽汁琼脂”）培养基，该培

养基应采用灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上,培养一段时间后可观察到菌落,菌落

的含义是。

⑵酵母菌液体培养时，若通入氧气，可促进（填"菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产

生”）；若进行厌氧培养,可促进（填"菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”）。

⑶制作面包时,为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌,酵母菌引起面包松软的原因

是O

答案（1）麦芽汁琼脂高压蒸汽由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体⑵菌体快速增殖乙

醇产生⑶酵母菌分解葡萄糖会产生co2,C（M吏面包松软

4.（2017课标全国I,37,15分）某些土壤细菌可将尿素分解成COz和叫供植物吸收和利用。回答下列问题:

⑴有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能,原因是前者能产生。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解

产物CO,作为碳源,原因是o但可用葡萄糖作为

碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是_____________________________________________________

（答出两点即可）。

⑵为了筛选可分解尿素的细菌,在配制培养基时,应选择（填“尿素”“NHMJ或“尿素+NH,N0J）

作为氮源,不选择其他两组的原因是

（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KHFO,和Na2Hp0“其作用有

________________________（答出两点即可）«

答案⑴眠酶分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO,来合成有机物为细胞生命活动提供能量，为其

他有机物的合成提供原料

⑵尿素其他两组都含有NH4N03,能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4N03,不能起到筛选

作用

⑶为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中PH稳定

5.（2016课标全国皿,39,15分,0.24）某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用

固体培养基中因含有碳酸钙而不透明,乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：

⑴分离纯化乳酸菌时,首先需要用对泡菜滤液进行梯度稀释,进行梯度稀释的理由是一

⑵推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有和。

分离纯化时应挑选出的菌落作为候选菌。

⑶乳酸菌在-20℃长期保存时,菌液中常需要加入一定量的（填“蒸储水”、“甘油”或“碳酸

钙”）。

答案（1）无菌水（2分）泡菜滤液中菌的浓度高,直接培养很难分离得到单菌落（3分）

⑵鉴别乳酸菌中和产生的乳酸（或酸）（每空3分，共6分）具有透明圈（2分）

（3）甘油（2分）

6.（2015课标全国I,39,15分0.6127）已知微生物A可以产生油脂,微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油

脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：

⑴显微观察时,微生物A菌体中的油脂通常可用染色.微生物A产生的油脂不易挥发，可选用_

—（填“萃取法”或“水蒸气蒸播法”）从菌体中提取。

⑵为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，

并应选用以为碳源的固体培养基进行培养。

⑶若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用直接计数;若要测定其活菌数量,可选

用法进行计数。

⑷为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降

解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg,则上述三个温度中,。。条件下该酶活力最小。为

了进一步确定该酶的最适温度,应围绕℃设计后续实验。

答案⑴苏丹III（或苏丹IV）萃取法（每空2分，共4分）

⑵油脂（3分）

⑶血细胞计数板稀释涂布平板（每空2分，共4分）

（4）4540（每空2分，共4分）

7.（2014课标全国I,39.15分,0.5106）植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题：

⑴分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶,该酶是由3种组分组成的复合酶,其中的葡萄糖苗酶可将

分解成«

⑵在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时,CR可与纤维素形成色复合物。用含有CR的该种培

养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的。

⑶为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落,某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下

表）：

酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂CR溶液水

培养基甲++++-++

培养基乙+++-+++

注:“+”表示有，表示无。

据表判断，培养基甲（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因

是;培养基乙（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别

纤维素分解菌,原因是。

答案（1）纤维二糖葡萄糖（2）红透明圈（3）不能液体培养基不能用于分离单菌落不能培养

基中没有纤维素,不会形成CR—纤维素红色复合物,即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌

8.（2014课标全国II,39,15分,0.5527）为了调查某河流的水质状况,某研究小组测定了该河流水样中的细

菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：

（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行

培养了一段时间,这样做的目的是_；

然后,将1niL水样稀释100倍,在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液;经适当培养后,3个平板上

的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为。

⑵该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时,接种环通过灭菌,在第二次及以后的划线时,

总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是O

⑶示意图A和B中,表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。

（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养,另一部分进行振荡培养。结果发

现:振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是:振荡培养能提高培养液中的含量,

同时可使菌体与培养液充分接触，提高的利用率。

答案（15分）（1）检测培养基平板灭菌是否合格3.8X107（每空2分，共4分）

⑵灼烧（2分）将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落（3分）

（3）B（2分）

⑷溶解氧营养物质（每空2分，共4分）

教师用书专用（9—11）

9.（2013课标全国II,39,15分,0.5633）临床使用抗生素前,有时需要做细菌耐药实验。实验时,首先要从病

人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作,以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。

回答下列问题：

⑴为了从样本中获取致病菌单菌落，可用法或法将样本接种于固体培养基表面,经过选

择培养、鉴别等步骤获得。

⑵取该单菌落适当稀释,用法接种于固体培养基表面,在37℃培养箱中培养24h,使其均匀生长,

布满平板。

⑶为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上

的不同位置，培养一段时间后,含A的滤纸片周围出现透明圈,说明该致病菌对抗生素A;含B的滤

纸片周围没有出现透明圈,说明该致病菌对抗生素B;含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小,说

明_；

含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小,且透明圈中出现了一个菌落,在排除杂菌污染的情况下,此菌落很

可能是抗生素D的。

⑷根据上述实验结果,为达到抗菌目的,最好应选用抗生素。

答案（15分）

⑴划线稀释涂布（或涂布）（每空2分，共4分）

（2）涂布（1分）

⑶敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌（每空2分，共8分）

（4）A（2分）

10.（2011课标,39,15分）有些细菌可分解原油,从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污

染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：

⑴在筛选过程中,应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲,该培养

基属于培养基。

⑵纯化菌种时,为了得到单菌落,常采用的接种方法有两种,即和。

⑶为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小,分解圈大说明该菌株的降解能力O

⑷通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、和。无菌技术

要求实验操作应在酒精灯附近进行,以避免周围环境中微生物的污染。

答案⑴原油选择

⑵平板划线法稀释涂布平板法

⑶强

⑷干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰

11.（2009全国II,33,10分）利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆,具有广阔的应用前景。但现有野生菌株对淀

粉的转化效率低,某同学尝试对其进行改造,以获得高效菌株。

⑴实验步骤：

①配制（固体、半固体、液体）培养基，该培养基的碳源应为。

②将接入已灭菌的培养基平板上。

③立即用适当剂量的紫外照射，其目的是O

④菌落形成后，加入碘液,观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小,周围出现

现象的菌落即为初选菌落.经分离、纯化后即可达到实验目的。

⑵若已得到二株变异菌株I和II,其淀粉转化率较高。经测定菌株I淀粉酶的催化活性高,菌株II的淀粉酶

蛋白含量高。经进一步研究发现，突变发生在淀粉酶基因的编码区或非编码区,可推测出菌株I的突变发生

在区,菌株II的突变发生在区。

答案（1）①固体玉米淀粉②野生菌株③对野生菌株进行诱变④浅色范围大（2）编码非编码

B组自主命题•省（区、市）卷题组

1.（2018江苏单科,31,8分）酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以

利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该

类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程,请回答下列问题：

①称量土样②梯度稀释③平板浇注分离④划线蛆化⑤*-大培养

⑴配制培养基时,按照培养基配方准确称量各组分,将其溶解、定容后,调节培养基的,及时对培养

基进行分装,并进行灭菌。

⑵取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中,在步骤③中将温度约（在250、50°C

或80°C中选择）的培养基倒入培养皿混匀,冷凝后倒置培养。

⑶挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有O

a.为保证无菌操作,接种针、接种环使用前都必须灭菌

b.划线时应避免划破培养基表面,以免不能形成正常菌落

c.挑取菌落时,应挑取多个菌落,分别测定酵母细胞中甲醇的含量

d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度,获得甲醇高耐受株

⑷步骤⑤中,为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和供应。为监测酵母的活细胞

密度,将发酵液稀释1000倍后,经等体积台盼蓝染液染色,用25X16型血细胞计数板计数5个中格中的细

胞数,理论上色细胞的个数应不少于,才能达到每毫升3XIO'个活细胞的预期密度。

答案（8分）

⑴pH高压蒸汽（湿热）（2）50℃（3）a、b、d

（4）氧气无30

2.（2017江苏单科,31,7分）苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中,对环境有严重危害。小明同学准备依据

下图操作步骤,从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株■请回答下列问题：

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白陈、K,HPO"MgSO,、苯酚和水,其中可作为碳源的有。

⑵将采集到的样品接种培养,苯酚用量应随转接次数增加而逐渐,以达到富集酚降解菌的目的。若

如图平板中菌落过于密集，应进一步,以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、

营养物质外,还必须添加。

⑶如图为连续划线法示意图,在图中（填图中序号）区域更易获得单菌落。

开始处

（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反

应,下表中「5号比色管的苯酚浓度应分别为。

管号1|2|3|4|56

苯酚浓度（rngZ11

如果废水为50mg/I.苯酚溶液，降解后约有21岫勺苯酚残留,则需将残留液稀释（填序号:①5②10

③20）倍后,再进行比色。

答案（7分）（1）蛋白陈、苯酚（2）增加稀释涂布凝固剂（3）③（4）0、0.2、0.4、0.6、0.8③

【三年模拟】

非选择题（共90分）

1.（2019届湖南长郡中学第二次月考,35）日前微博传言手机细菌比马桶多.如图,央视和北京卫视通过实验

展示调查结果。回答下列相关问题。（15分）

⑴该实验需制备培养基，培养基一般都含有水、碳源、氮源、，培养基一般放入

中进行灭菌。

⑵据图，两电视台均采用法接种，该方法需要。（多选）

A.接种环B.酒精灯C.移液管D.涂布器E.无菌水

⑶通过观察菌落的，可知手机屏幕和马桶按钮都存在多种微生物。两电视台实验操作均

正确且完全一致，但报道结果截然不同,你认为原因是O

⑷按图操作取样面积,实验员测定某手机屏幕的细菌数量，将10mL菌悬液进行梯度稀释,分别取0.1niL稀

释倍数为10°的样品液接种到三个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为48、50、52,则该手机屏幕

的细菌数为个/平方厘米。该实验对照组该如何设

置?O

答案⑴无机盐（1分，“琼脂”不作为扣分或给分的标准）高压蒸汽灭菌锅⑵稀释涂布平板

BCDE（全对2分，答对2~3个得1分）（3）形态、大小（答出一点即给2分,也可填“颜色”或其他合理答案）

手机的取样和马桶的取样都不相同（答出“取样不同”即得2分）（4）2X104取培养基涂布0.1mL无菌

水进行培养

2.（2019届山东青岛期初调研,36）蛋白酶在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值。某同学

为筛选产蛋白酶的高产菌株，做了如下实验步骤（配制了下列培养基,在适宜条件下培养）：（15分）

步骤取样培养基培养结果

葡萄

糖，（NHjSOz,K2HPO4・3H20,KH2

I土壤样品培养液a

P04,NaCl,CaCl2,MgSO4・7H20,

加水定容

II1mL培养液a同上菌落

III挑取单菌落细菌培养基培养液b

⑴为实现筛选目的,步骤I所使用的培养基配方中,应去除并加入高浓度的。该培养

基从功能上看属于培养基。

⑵灭菌是否彻底或是否被污染需要检测,检测方法是。

（3）为实现目的菌的分离和计数,步骤II所使用的培养基中还常加入制成平板,采用的接种方法

是0

（4）步骤III的目的是。

答案⑴葡萄糖蛋白质选择（2）未接种的培养基在适宜条件下放置一段时间后，观察培养基上是否

有菌落产生⑶琼脂稀释涂布平板法⑷快速增加目的菌的种群数量（扩大培养）

3.（2019届黑龙江大庆实验中学第一次月考,44I）酸雨主要是由大气中所含的S0,造成的。研究人员为了获

得用于烟气脱硫的脱硫细菌,进行了相关实验。回答下列问题：（15分）

⑴采集菌种:在某热电厂烟囱周围区域采集土样,取样用的小铁铲和盛装土样的信封在使用前都需

要。将采集的土样进行稀释处理后,接种到培养基上进行培养。

⑵分离目的菌:将目的菌转移到含少量无菌水的锥形瓶中,边搅拌边持续通入S02,驯化几分钟后接种到固

体培养基上,待长出菌落后再重复上述步骤,并逐步延长通SO。的时间,与此同时逐步降低培养基的pH。由此

分离得到的目的菌具有较强的的能力O

⑶活菌计数:为获得大量目的菌用于生产,在培养过程中需连续取样进行计数,法常用来统计

样品中的活菌数目。通常情况下,用此方法得到的活菌数目往往比实际数目（填“高”或

“低”）.

⑷检测目的菌对抗生素的敏感性:取该单菌落适当稀释后的液体2滴，接种于固体培养基表面,并用

使菌液均匀分布。在37℃培养箱中培养24小时后，将大小相同且分别含有不同抗生素的圆纸片均匀置于

该平板的不同位置,再培养一段时间,结果如图所示（圆纸片周围的白色区域表示没有菌落分布），据此实验

结果推测,五种抗生素中对该菌抑制作用最强的是（答序号和名称）。

①利福平

②四环素

③庆大霉素

④链霉素

⑤青霉素

⑸菌种保存:采用平板划线法分离纯化得到了脱硫细菌,可以采用的方法,对菌种长期保

存。

答案（1）灭菌（2）利用SO,和耐酸（3）稀释涂布平板