当归提取物检测方法

当归提取物的检测方法当归为伞形科植物当归Angelicasinensis（Oliv.）Diels的干燥根。2005版《中国药典》收载的含量测定方法为高效液相色谱法，以阿魏酸为对照品。文献报道的当归及其制剂的含量测定方法主要为高效液相色谱法、薄层扫描法等。现就其含量测定方法作一介绍。

一、高效液相色谱法

⑴2005版《中国药典》当归含量测定项下：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.085%磷酸溶液（17：83）为流动相，检测波长为316nm；柱温为35℃。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000。

供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约0.2克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70%甲醇20ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

⑵文献报道的方法

文献报道的HPLC条件：流动相一般为乙腈-磷酸溶液，还有水-冰醋酸-正丁醇、乙腈-磷酸二氢钾溶液、乙腈（甲醇）-醋酸溶液等。检测波长一般为313nm，也有320nm、325nm等。现具体举几例非药典方法。

罗秀琼等测定生乳灵中阿魏酸的含量。高效液相色谱仪：日本岛津LC-10AT；色谱柱：HYPERILODSC18柱(5.0×250mm，5μm)；流动相：水-冰醋酸-正丁醇(347：1：5)；流速1.5ml/min；检测波长：313nm；柱温：40℃；进样量：20μl。，阿魏酸在0.12μg～1.0μg的范围内呈良好的线性关系。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于4OOO。样品溶液的制备：精密量取本品50ml，加盐酸(0.1mol/L)40ml，搅拌，移至分液漏斗中，用乙醚提取3次，每次45ml，合并提取液，加2％碳酸钠液40ml提取，分取碳酸钠层，用盐酸(2.0mol/L)调pH至2～3，移至50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

蒋心惠等测定普藏红胶囊中阿魏酸的含量。岛津LC-3A液相色谱仪，SPD-1型紫外检测器及C-R1A色谱数据处理机；Rheodyne7725型液相色谱进样器；色谱柱为BondapakODS柱(250mm×4.6mm，10μm)；流动相甲醇-水(20：80)，磷酸调pH3.0)；流速1.0ml/min；柱温25℃；检测波长300nm。样品溶液的制备：取本品装量差异下混匀的内容物约0.5g，精密称定，置50ml具塞离心管中，精密加人2％碳酸钠溶液10ml，称重，超声提取30min，放冷，再称定重量，用2％碳酸钠溶液补足减失的重量。离心，精密吸取上清液5.0ml置具塞离心管中，加入乙醚25ml，机械旋混5min，离心，弃去乙醚层，重复操作3次，用稀盐酸调水层pH为1，轻摇至无大量气泡产生时，加入乙醚2.5ml，机械旋混5min，离心，吸取乙醚层，重复操作4次。合并乙醚层，置具塞1Oml尖底离心管中，空气流挥去乙醚，精密加人甲醇1.0ml溶解残渣，即得。

二、毛细管电泳法

采用毛细管电泳法测定当归及其制剂中阿魏酸的含量，文献报道较多。实验条件比较多，现举几例。

翟淮敏采用毛细管电泳法测定当归及其制剂中阿魏酸的含量。空心熔融石英毛细管(75μm×10cm)，10mmol/L硼砂溶液为电泳介质，30kV运行电压，温度25℃，重力进样5s，检测波长214nm。阿魏酸在5～100μg/ml范围内，可定量检测。回归方程为：Y=-7.735+O.0263X，r=0.9993，精密度试验RSD为2.59％，样品重复性RSD为1.20％，三种样品含量的RSD为2.29％。样品溶液的配制：精密称取当归、八珍颗粒、养心氏细粉各3g，加入70％的乙醇约8ml，超声振荡提取30min。离心15min(3O00r／min)，残渣用上述提取液洗涤后重复提取两次。合并提取液至25ml量瓶中，加入内标，并使其浓度为40μg/ml，加70％的乙醇定容至刻度，作为样品溶液备用。

郭涛等采用胶束电动毛细管色谱法对当归中的有效成分阿魏酸和腺苷同时进行含量测定。采用熔融石英毛细管柱(50μm×66.5cm，有效长度58cm)作为分离通道；以50mmol/L硼砂和10mmol/L去氧胆酸钠并且含2％甲醇的溶液(pH9.6)为运行缓冲液；运行电压24kV；毛细管柱温20℃；检测波长：210nm。以戊巴比妥钠为内标，阿魏酸和腺苷分别在20～320μg/mL和10～160μg/mL浓度范围内线性关系良好(r>0.998)；回收率分别为96.8％～97.4％和93.2％～95.0％；重复性试验RSD分别为4.7％和6.8％(n=5)。样品溶液的配制：精密称取60℃干燥的当归粉末2.0g，用6o％乙醇20mL超声提取20min，3000r/min离心10min，取上清液，残渣同法重复提取2次，合并上清液，减压回收溶剂，用60％甲醇定容至10mL，再经0.45μm滤膜滤过后得供试品溶液。

张艺等采用高效毛细管区带电泳法对逍遥片及当归原药材中所含阿魏酸进行含量测定，以控制逍遥片的质量及避免在生产过程中盲目投料。采用HP3D全自动毛细管电泳仪对逍遥片及当归原药材中的阿魏酸以橙皮苷为内标在波长为313am处进行测定。电泳条件为：石英毛细管柱(75μm×65cm，有效长度56.5cm)；行缓冲液为20mmol/L硼砂溶液(25℃时pH=9.18)；分离电压25kV；温度为25℃。阿魏酸在5～100μg/mL范围内呈良好的线性关系，其回归方程为y=26.47X-3.52，r=0.9999。平均回收率分别为99.0％，93.8％，96.0％；RSD分别为1.5％，1.8％，1.3％(n=3)。样品溶液的配制：精密称取当归原药材0.500g，置小三角烧瓶中，加甲醇8mL，超声20min，过滤，残渣以甲醇2mL洗涤，再过滤，合并滤液，在滤液中加入内标溶液2mL并定容至10mL，以0.45μm滤膜过滤至样品小瓶中备用。

三、薄层扫描法

此方法在阿魏酸的含量测定中应用较少，虽然操作简便，重现性好，但在操作中应注意阿魏酸不稳定，薄层展开后应尽快完成扫描，否则影响含量测定效果。如：卢卫平等测定养血当归精中阿魏酸含量。样品测定波长323nm，参比波长365nm；狭缝1.25mm×1.25mm。扫描方法：锯齿扫描