干扰素在动物疫病预防及治疗中的应用

为切实做好全国动物疫病强制免疫工作，各级、各地区不断强化免疫指导，根据当地畜牧养殖情况和所管辖区内动物疫病流行情况，制定针对性动物疫病预防及治疗方案。其中，干扰素防治就是其中之一，通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋，最终起到调节免疫、增强动物抗病毒能力的作用，在动物疫病防控方面具有广阔的应用前景。1干扰素应用背景在十四五规划期间，各地区坚持防疫优先，立足维护养殖业发展安全，切实筑牢动物防疫屏障，持续跟踪病原变化和流行趋势，并制定综合性、全面性、针对性想措施，防控动物疫病出现，抑制疫病大规模暴发和蔓延。近年来随着动物病原菌新毒株的流行，如H5N1高致病性禽流感病、狂犬病病毒、猪瘟病毒、蓝耳病病毒等，变异株不断出现，加重人畜共患病的出现。传统防控措施多采用抗生素治疗，并加以中药辅助，不能否认的是这种用药措施可以有效控制患病畜禽继发性感染，但是只能从“按症给药”，而不能从根本上实现抵抗病毒作用，临床应用效果不佳，难以实现病毒、病原、支原体的彻底根治。而干扰素是一种高活性、多功能的糖蛋白，由巨噬细胞、淋巴细胞及体细胞产生。经过干扰素诱生剂刺激后，可直接应用于圆环病毒II型感染、细小病毒病、伪狂犬病、轮状病毒感染等多种疾病（以上干扰素属于重组猪干扰素α），对犬猫疫病，如狂犬病、传染性肝炎、伪狂犬病、犬冠状病毒病等可直接用重组干扰素ω进行防控。2干扰素特点和基本功能干扰素是一种广谱抗病毒制剂，可分为三类，即：淋巴细胞型（γ型）、成纤维细胞型（β型）、白细胞（α型）。其中α型和β型被称为Ⅰ型干扰素，IFN-α/β二者结合相同受体，γ型干扰素也被称为Ⅱ型干扰素，由活化TH1细胞、T细胞产生，以细胞外基质相连的形式存在，3种干扰素的理化及生物学性质有明显差异，生物学作用也不尽相同，但是在动物疫病防治中均通过细胞表面受体作用，在不直接杀伤或抑制病毒的基础上，增强自然杀伤细胞活力，使细胞产生抗病毒蛋白，起到免疫调节作用。干扰素基本功能为：（1）抗菌作用，比如IFN-γ可增加单核巨噬细胞的吞噬小体，下调转铁蛋白受体减少细菌供铁量，凸显溶酶体溶解细菌作用，并诱导产生内源性NO直接抑制细胞内细菌，通过以上途径共同达到抗菌作用。（2）抗病毒作用，α型和β型干扰素可间接抑制病毒的复制过程，在抗病毒的同时防御和调节因子，可控制病毒的生长和增殖，还具有活化自然杀伤细胞和巨噬细胞，防止诱导抗体细胞死亡的功能。同时，经相关研究报道，IFN-γ与IFN-β共同使用，有相互加强抗病毒的作用。（3）参与免疫调节，有利于巨噬细胞对抗原的吞噬作用，尤其在IFN-γ型干扰素的使用下，可对IgG的Fc受体表达，增强机体免疫应答能力，通过增强巨噬细胞表面表达Fc受体，增加巨噬细胞表面MHCⅡ类分子的表达，以此活化细胞，起到免疫调节作用。（4）抗寄生虫作用，IFN-γ刺激微血管内皮细胞，γ型干扰素可激活巨噬细胞，能抑制弓形虫生长，并催化畜禽体内的L-精氨酸，巨噬细胞发挥作用后产生NO，可有效灭杀寄生虫。3干扰素的类型与应用方法本文主要以生猪养殖为例，分析猪瘟、猪轮状病毒病、猪伪狂犬病、猪圆环病毒病中的应用方法。3.1干扰素在猪瘟防治中的应用猪瘟俗称“烂肠瘟”，是猪的一种传染病，该病在自然条件下只感染猪，不是人畜共患病，但该病发病快、蔓延快，且家猪野猪均易感染，以内脏器官严重出血和高死亡率为特征，潜伏期一般为5～7d，发病初期病猪精神差，发热，喜卧，弓背，后续随着病情的逐渐加剧，体温在40～42℃，结膜发炎，流脓性分泌物，食欲减退或废绝，后期腹泻，粪便恶臭，腹部及四肢内侧伴有出血点，经过病理检验和实验室诊断发现，粘膜和内脏器官有不同程度的出血，如果是慢性型，主要表现为坏死性肠炎。猪瘟病毒的基因组是单股正链RNA，病毒先与细胞表面的受体结合，经过内吞作用后，病毒粒子裂解将其RNA释放到胞质中，单核巨噬细胞受到猪瘟病毒感染后，健康猪前列腺素E2可引起机体的炎症反应，在单核巨噬细胞的诱导下，最终损伤机体的淋巴细胞，病毒粒子吸附在细胞表面，最终导致抵抗力弱的病猪死亡。自从2018年非洲猪瘟传入后，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研制出α型白细胞干扰素可刺激PK-15细胞，对猪瘟病毒的抑制作用显著。还可使用猪白细胞干扰素（冻干型），20000U/支，10支/盒，对乳猪（10日龄以内），注射剂量为10头/支，1次/d，连用2～3d；对10～50kg仔猪，注射剂量为3头/支，1次/d，连用2～3d；对50kg以上仔猪，注射剂量为1头/支，1次/d，连用2～3d；对150kg及以上育肥猪，注射剂量为2头/支，1次/d，连用2～3d。但在用药过程中，技术人员应该注意到，该α型白细胞干扰素应该在猪瘟病毒感染前使用，不能在确诊后注射，否则疗效降低。为响应国家畜禽疫病防控相关政策规定，一旦发现猪瘟病例应第一时间扑杀，以减低病毒传播风险，因此在使用猪白细胞干扰素（冻干型）时，应该前置，充分发挥猪白细胞干扰素（冻干型）的预防作用，同时在给药过程中，可以利用5mL生理盐水、双黄连、黄芪多糖等中药稀释，方便注射，可抑制病毒RNA的合成复制。3.2干扰素在轮状病毒病防治中的应用轮状毒病在临床诊断与治疗中，被定义为急性肠道传染病，由猪轮状病毒引起，中猪和大猪为隐性感染，而仔猪临床表征更为明显，主要症状为厌食、呕吐，病初精神沉郁，食欲减退，继而腹泻，为水样或糊状。粪便为灰黑色或黄色，通常10～21日龄仔猪的症状显著。解剖病死猪其病理变化病变主要在消化道，小肠壁变薄呈半透明，有时小肠出血，肠内容物充满凝乳块和乳，肠系淋巴结肿大，用荧光抗体检查可以直接诊断为轮状病毒感染。由于该病病原为猪轮状病毒，病毒肠毒素以NSP4基因为主，NSP4是非结构糖蛋白（由第10段基因编码），可以破坏细胞间的紧密连接，在病毒感染后，从肠上皮细胞顶端释放继而引起腹泻症，加剧病毒感染，在胞内质网膜上作为病毒双层颗粒受体，帮助病毒脱壳和进入细胞过程，通过劫持自噬机制促进病毒粒子成熟，抑制天然免疫发应，抑制下游抗病毒细胞因子产生，且病毒蛋白与宿主间关系十分复杂，在病毒与细胞膜上的受体结合之后，病毒受体被病毒劫持以协助其感染，再加之病毒在不断变异，当前临床投入药物虽然可以增强某些病毒代谢过程，但在给药的同时，也意味着细胞淘汰。对此，可利用I型干扰素，如植物血凝素，该药剂属于I型干扰素系列，在治疗病毒性腹泻、病毒型呼吸道疾病、传染性胃肠炎、多系统衰竭综合征、蓝耳病等方面功效显著，用法用量为：肌肉注射0.01mL/kg.bw，用5mL生理盐水稀释，对机体免疫力不足的仔猪，可用5mL黄芪多糖注射液稀释，1次/d，连用2～3d，也可以通过混饮方式，将药液稀释后溶于水（按照1：10的比例勾兑），1次/d，连用3～5d。该药剂可刺激T细胞增殖分化，可刺激B细胞转化为浆母细胞，同时产生大量效应T细胞，对病毒起到杀灭作用，也产生细胞毒T细胞，杀毒作用更为显著，也可以增殖分化为浆细胞，干扰素的诱生能力是聚肌胞苷酸的30倍，并产生大量非特异性抗体。技术人员也应注意到，可以视病猪身体情况，可用干扰素配合双黄连注射液使用，尤其对症状较为严重的猪，可用复方穿心莲注射液，有良好的预防和治疗作用。3.3干扰素在伪狂犬病防治中的应用伪狂犬病属于猪的急性传染病，由猪伪狂犬病病毒引起，其基因组是线状双链DNA分子，是疱疹病毒科中抵抗力较强的一种，可引起妊娠母猪流产和仔猪生长停滞，病毒粒子为圆形，在pH4～9保持稳定，通过已感染猪排毒而传给健康猪，传播途径多为鼻分泌、乳汁和精液，幼龄猪感染伪狂犬病毒后病情最重。在发病初期，病猪昏睡、呜叫、呕吐，有时见到肺水肿，精神极度委顿，这一阶段死亡率在10%～20%，成年猪临床症状多表现为体温上升达41℃以上，怀孕母猪可发生流产，没有明显的季节性特征。病理检测发现，病死猪脑膜明显充血，淋巴细胞内可见核内嗜酸性包涵，中枢神经系统有明显的血管套，有时可见肝脏小叶周边出现凝固性坏死。此时，对伪狂犬病，养殖技术人员可采用诱导白细胞介素，促进诱导I型干扰素的表达，如用白细胞介素-2，该药物具有双重药理作用，临床主要用于治疗由猪附红细胞体、大肠杆菌病、伪狂犬病、弓形体病、原虫病等，即能抗菌，又能抗病毒，可有效对肺炎球菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、布鲁氏菌、猪痢疾螺旋体等病原有较好的抑制作用。预防时，可以将本品100g兑水300kg，让健康猪每次灌服250mL，并在30min内饮用完毕，1次/d，若拌料，可以将本品100g拌料150kg，连用3～5d；用于治疗时，可以将本品100g兑水200kg，让病猪每次灌服300mL，并在50min内饮用完毕，1次/d，治疗拌料，可以将本品100g拌料100kg，连用5～7d。服药之后，由于白细胞介素是T细胞分泌的一种生长因子，可以提高临床免疫效果，通过特异性诱导机体细胞免疫和体液免疫，增强健康猪大肠杆菌病、支原体病等疫苗的免疫力，显著提高免疫水平，高机体抗应激能力，发病情况下与药物或疫苗配合使用能在短时间内控制疾病。3.4干扰素在猪圆环病毒病防治中的应用猪圆环病毒粒子直径约为17nm，在pH3的酸性环境中很长时间不被灭，可能引发病猪繁殖障碍、先天性颤抖。感染猪可自鼻液、体液、粪便中排出病毒，怀孕猪可经胎盘垂直传播感染仔猪，且病毒可水平传播，病理变化为患猪消瘦，内脏和外周淋巴结肿大，肺部有灰褐色炎症和肿胀，肝小叶间结缔组织增生，且组织学病变广泛分布于全身器官，淋巴细胞缺失，心脏有多灶性心肌炎。此时，技术人员可以利用干扰素，如三防四联工程干扰素，也被称为1FNa+IFNp，每2g含1500万活性单位（超浓缩型），该干扰素主要用于猪病毒性疾病的有效预防和治疗，同时本品通过竞争体内组胺受体，对母畜因生产所引起的免疫功能下降起到控制作用，对多种革兰氏阳性菌及支原体均有强大的杀灭作用。用法用量为肌肉注射，1mL/30kg，1次/d，如果是应用于预防，肌肉注射，0.5mL/30kg，若病重猪或阳性病例的同群猪，给药量为2mL/30kg，连用3d为一个疗程，必要时可结合中医治疗手段，比如使用扶正解毒散，本品主要成分为板蓝根、黄芪、淫羊藿可通过中药诱导机体产生干扰素,在宿主细胞作用下而产生抗病毒蛋白,起到扶正祛邪、清热解毒效果，抑制病毒蛋白合成,影响病毒释放，在增