肿瘤免疫生物治疗的临床试验设计

肿瘤免疫细胞生物治疗的

临床试验设计及疗效评价

李磊第三军医大学赵明中南大学深圳生物医药研究院leili1214@肿瘤的发病机制基因突变与基因表达异常环境不协调发展信号通路调控异常机体免疫监视异常肿瘤免疫逃逸肿瘤发病的免疫机制肿瘤治疗策略机械性的手术切除指标不治本的方法负荷较大的实体瘤手术首选肿瘤治疗策略物理性的放射治疗针对DNA变异的通杀性策略化学性的细胞毒性药物细胞内各种代谢酶的覆盖性治疗策略肿瘤治疗策略肿瘤的生物治疗新兴的第四种抗肿瘤策略细胞因子单克隆抗体免疫刺激剂作用于基因的免疫毒素作用于特定分子靶点的非细胞毒性小分子免疫效应细胞：LAK,TIL,CTL,CIK肿瘤的免疫生物治疗策略基于肿瘤发生发展过程中免疫监视异常和肿瘤免疫逃逸的原理，利用免疫学技术制备的各种生物制剂，通过激发或增强机体免疫功能的方式，针对肿瘤细胞演变的关键环节实施靶向性治疗。肿瘤的免疫生物治疗分类免疫因子：

IFN,ILs，TNF，TGF-β，CSF，chemokines，thymosineetc.肿瘤疫苗：

DNA疫苗，多肽疫苗，蛋白质疫苗，HSP蛋白疫苗，抗独特型抗体疫苗，DC疫苗基因修饰的T淋巴细胞过继性免疫效应细胞：NK,LAK,CIK，TIL肿瘤免疫生物治疗机理调节机体抗肿瘤免疫能力干扰肿瘤细胞增殖、分化、凋亡、转移等生物学行为。肿瘤免疫生物治疗特点特异性的靶点肿瘤免疫生物治疗特点个性化的治疗肿瘤过继免疫细胞生物治疗流程药物的临床试验研究目的：是否有效？是否安全？意义：确定治疗价值的临床研究要求：

GoodClinicalPractice

(GCP）策略：

前瞻性研究肿瘤免疫细胞治疗临床试验根本要求掌握法规，符合伦理，设计科学，明确指标，客观统计，临床可行。肿瘤生物治疗与化学治疗各期临床试验设计对比化学治疗生物治疗I期研究目的最大耐受剂量，毒性，药代动力学最佳生物剂量，毒性。药物剂量剂量爬升剂量爬升观察终点毒性靶点抑制II期研究目的抗瘤谱靶点依赖的抗瘤谱药物剂量<最大耐受剂量最佳生物剂量观察终点肿瘤缩小（周期短）肿瘤进展时间（周期长）III期研究目的临床获益临床获益药物剂量<最大耐受剂量最佳生物剂量观察终点生存情况生存情况肿瘤免疫细胞治疗试验要点I期临床试验

寻找最佳生物学剂量为其主要目的；

是否诱发免疫相关性疾病为主要观察指标；

个性化的治疗为其主要特点；

标准化的生产为其主要保障；

受试患者选择以疾病终末期为宜；

受试病例以30例为佳。肿瘤免疫细胞治疗试验要点II期临床试验

确定治疗肿瘤的谱系和适应证为其主要目的；

确定临床有效性为试验终点指标

瘤体大小、肿瘤进展、无进展生存、

总生存率、临床获益

确定是否进行III期试验及其病例数量

病例筛选不局限于终末期肿瘤患者

病例数量以100例左右为佳肿瘤免疫细胞治疗试验要点III期临床试验

试验目的：

通过大宗病例对比研究，最终验证临床获益是否具有统计学差异

病例要求：1000例以上实体瘤疗效评价注意事项：国际计量单位（mm），使用直尺或测量器；所有基线评价应尽可能接近治疗的开始；检查手段和评价方法前后一致；

图片留档；终点指标为客观的有效率时，一般不能用超声作为评价疗效的手段；肿瘤标记物单独不能评价疗效实体瘤疗效评价病灶选择

1.至少有1个可精确测量的径线的病灶，在常规CT下，其最大直径≥20mm，或螺旋CT下，其最大直径需≥10mm；

2.如果只有1个可测量的孤立的病灶，则必须由细胞学/组织学证实具为肿瘤；

3.所有观察病灶最长径的总和记录为基线最长径。实体瘤疗效评价完全缓解completeresponse：所有观察病变完全消失。部分缓解partialresponse：与基线总最长径相比，观察病灶的总最长径减少至少30%。进展progressivedisease：与基线总最长径相比，观察病灶的总最长径增加20%以上，或治疗开始后出现1个或更多的新病灶。稳定stabledisease：与基线总最长径相比，观察病灶的总最长径减少不到30%，增加不到20%。实体瘤疗效评价疗效确认1.评价有效的确认：在首次评价有效后，需至少4周后复验确证；2.肿瘤稳定的确认：通常至少6-8周，肿瘤测量仍符合稳定的标准；实体瘤疗效评价疗效持续时间1.缓解期从上次评价有效开始到客观记录到的出现复发的时间2.稳定持续时间由治疗开始到出现进展的时间

（研究开始后至少6-8周，肿瘤测量仍符合稳定的标准才能评价为稳定）肿瘤免疫细胞治疗常用检测指标1.迟发型超敏反应

定性不定量假阳性与假阴性肿瘤免疫细胞治疗常用检测指标2.细胞毒性T淋巴细胞杀伤实验CytotoxicTlymphocyte(CTLs)是T细胞在体内或体外经抗原刺激后产生的一种效应细胞，可特异性裂解靶细胞，这种能力可以反映机体的抗肿瘤活性。

肿瘤免疫细胞治疗常用检测指标CD8+细胞毒性T淋巴细胞杀伤实验同位素法LDH肿瘤免疫细胞治疗常用检测指标3.淋巴细胞增殖实验T细胞前体没有任何效应功能，但在遇到抗原时可以增殖，这是抗原特异性Th细胞存在的标志。3H2TdR掺入法MTT（琥珀酸脱氢酶法）流式细胞术肿瘤免疫细胞治疗常用检测指标4.MHC多肽四聚体法T细胞的定量、定性分析MHCⅠ类分子四聚体检测CD8+

细胞MHCⅡ类分子四聚体检测CD4+

细胞肿瘤免疫细胞治疗常用检测指标5.免疫细胞因子检测

ELISAELISPOTFCMGenePCR肿瘤免疫细胞治疗常用检测指标铬释放法被认为是评价抗原特异性CTL反应的金标准，但该法无法检测不具增殖潜能的T细胞前体；ELISPOT能更准确地反映T细胞在体内的情况，但仍依赖一定时间的肽诱导以产生细胞因子,会低估总的特异性CTL数量,不过敏感度远高于铬释放法；MHC肽复合物多聚体染色法，是目前最新的直接检测特异性CTLs的方法，可以直接对T细胞染色，还可结合FCM计数细胞，敏感性大大增强，又不受基因型的限制。关于tumormarker检测：下降50