如何精准把握细胞消化时间_第1页
如何精准把握细胞消化时间_第2页
如何精准把握细胞消化时间_第3页
全文预览已结束

如何精准把握细胞消化时间.docx 免费下载

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

如何精准把握细胞消化时间？在贴壁细胞培养中，细胞消化是至关重要的步骤，可以说直接影响后续实验的成败。消化时间过长过短都会导致细胞受到损伤，进而出现细胞生长速度减慢，大量漂浮不贴壁，拉丝、空泡等异常形态，甚至细胞死亡的情况。因此把握最佳消化时间是培养细胞的必修课之一。一、了解细胞贴壁强弱首先，了解细胞的贴壁的强弱是判断最佳消化时间的基础。不同种类的细胞在贴壁强度是有差异的，如果你对你将要培养的细胞并不了解，可以先去ATCC、上海中科院细胞库等权威细胞库查看消化时间，作为我们的预期消化时间。二、消化试剂的配方、品牌将影响消化时间以最常用的胰蛋白酶为例，胰酶浓度越高消化能力越强，添加EDTA也可促进胰酶的消化作用。另外，即使是相同配方的胰酶，因不同厂家生产工艺不同，消化效果也会有差异。因此实际消化时间可能与ATCC等细胞库描述不一样，应该以具体情况确定。三、细胞部分脱落时即可终止消化如果你是第一次消化细胞、购买了新的细胞、或者换了消化试剂的品牌，需要摸索一次最佳消化时间，作为以后消化该细胞的标准。以下是确认最佳消化时间的方法，以胰酶为例：1.加足量PBS润洗细胞1-2次，清除残留的培养基，润洗的PBS也尽量吸干净（培养基中的血清会抑制胰酶活性、残余过多PBS会稀释胰酶，均会影响消化效果）；2.将适量胰酶加入培养器皿，摇晃铺匀后放入37℃培养箱进行消化。随后每隔30秒拿出观察一次，若细胞未发生脱落，则放回培养箱继续消化。（贴壁紧的细胞可以延长时间，1-5min观察一次，或参考权威细胞库提供的参考时间）；3.直到显微镜下可见细胞间隙变大并脱落，将培养器皿对着灯光观察，肉眼可见部分细胞开始滑落，说明消化完成，可以加入完全培养基进行中和（注意贴壁较紧的细胞建议先吸取正在消化的胰酶轻轻吹下细胞，再加终止液）。四、值得注意的细节细胞变圆但未脱落时建议继续消化，此时吹打细胞可能会导致细胞膜破裂，所以建议细胞能滑落再终止消化，确保细胞是被胰酶消化下来而不是被强行吹下的。强行吹下细胞的损伤比胰酶对细胞的损伤大得多，大部分细胞系对胰酶有一定耐受性，遇到消化不下来的情况可以适当延长时间。PBS仅润洗一次可能还

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 各类标准

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论