生物制品宿主DNA去除方案-问题解答

北京义翘神州·在线讲座一一《生物制品宿主DNA去除方案》答疑环节汇总非常感谢大家对北京义翘神州在线讲座的大力支持，本次讲座已圆满结束，我们对直播过程中答疑环节大家的问题以及老师的解答进行整理如下。如果有需要补充的，有任何建议或想听到其他更多相关主题的讲座，欢迎来信和我们交流，我们会根据您的宝贵意见不断完善，以后给大家带来更多更精彩的在线讲座！问题1：请问最好的加入核酸酶的时间是细胞裂解前就加入吗？答：建议将核酸酶加入细胞裂解液中。问题2：核酸酶带标签吗？如何去除核酸酶？答：核酸酶不带标签。去除核酸酶通常可以结合产品自身工艺，如离子交换层析、亲和层析、超滤等。问题3：超级核酸酶和benzonase本质是—样的吗？答：超级核酸酶和benzonase本质是—样的。Benzonase是merck的商品名称。问题4:老师，您好，关千293细胞的核酸残留标准，也跟药典—样么？答：293细胞的核酸酶残留标准药典也有明确的指导，其中病毒包装类产品宿主DNA残留不得超过lOng/剂量。问题5：核酸酶去除Vero细胞DNA的效率大概多少？答：核酸酶可以高效水解样本中的核酸，小片段DNA等核酸酶可以在后期的纯化中随其他杂质去除。效率可根据酶活的定义和样本中核酸的浓度推算。问题6：贵公司核酸酶制备方法？答：E.coli重组表达。问题7:培养基原液中直接添加核酸酶，是否需要补加镁离子？答：如果培养基中没有Mg离子，需要补加Mg离子的浓度至2mM,如果不清楚培养基中是否含有Mg离子，亦可直接添加Mg离子的浓度至2mM。问题8：核酸酶的应用有专利限制吗？答：无专利限制。问题9:你们的核酸酶宿主蛋白残留合格吗？答：质量标准含有宿主蛋白残留，宿主蛋白残留合格。问题10：对千不能通过层析来去除的核酸酶残留的时候，有没有推荐的去除方法，谢谢答：可以通过超滤的方式去除。问题11：我们做慢病毒，慢病毒里面有很高的RNA,这个要不要关注？核酸酶去除要改条件么？答：外源性核酸都有安全风险，需要关注。核酸酶的使用条件需要再摸索，我们也会尽快给出相应的使用推荐条件。问题12：使用核酸酶能满足相关药物申报规范？有应用千临床的案例吗？答：使用核酸酶可以满足药物申报的规范。已有成功案例。问题13:蛋白生产完之后再加入超极核酸酶消化可以吗？答：通常建议在工艺上游加入核酸酶去除步骤，有两个方面的考虑：—是核酸酶消化宿主DNA后，下游工艺可以较好的去除小片段核酸，不用额外补充去除步骤；二是核酸酶本身的残留也有要求，工艺上游加入，可以随着产品本身的纯化工艺而去除。问题14:酶反应温度能在4度下吗，效果如何？答：可以在4°C下作用，作用时间需要调整。问题15:料液经核酸酶处理后的核酸残留使用什么方法检测比较好？答：qPCR方法的灵敏度、重复性较好，推荐qPCR方法。且qPCR可以定量，可以更清楚的掌握中间样中核酸残留水平的变化。问题16:请问细胞超声裂解中氯化钠高盐浓度怎么处理？答：如果样品不适于低盐，可以提高核酸酶的使用浓度。问题17:请问，你们的核酸酶能耐住高盐环境，比如1M盐浓度？答：我们的研究数据显示：0.2MNa盐条件下，酶活在50％左右。如果样本耐受低盐，建议更换至低盐条件水解核酸。问题18:你们的核酸酶用千终端产品效果怎么样？答：都可以达到客户的使用要求。问题19：对千核酸被酶包裹结合上，酶还能切到核酸以及去除吗？答：如果核酸完全包裹在蛋白内部，核酸酶很难水解此种核酸。核酸酶在尿素条件下仍有活性，如果样品允许，可以尝试低浓度尿素处理。问题20：你们说明书上功能检测裂解大肠杆菌那块能详细说说嘛？答：说明书比较详细，可以加QQ或微信沟通细节。问题21：如果残留核酸超量，超级核酸酶能清除吗？可以多次酶切吗？答：可以用核酸酶将宿主核酸水解，核酸的去除效率将大大提高，达到残留的标准。可以多次酶切，推荐在工艺上游—次加入核酸酶充分处理。问题22：按个人过往经验，核酸酶对千质粒和宿主核酸的酶切去除表现是不—样的（质粒可以完全被切除<lOObp,宿主核酸会有大片段无法被切除），请问老师是否有用宿主核酸作为样品进行酶切效率验证的数据和案例呢？答：有案例，核酸酶的试用浓度推荐10-100unit/ml,具体用量需要看具体样本的情况。问题23:残留核酸酶如何检测？答：目前主流方法是ELISA试剂盒为基础的免疫学检测，义翘神州有商品化产品，货号为KIT-SSNPOl。问题24:酶切后DNA检测结果较低，层析后出现DNA增加情况，可能原因？答：是否可能是层析有富集DNA的原因。问题25:这个酶与DNASEI和RNASEI比活高很多倍？答：水解宿主残留核酸方面，超级核酸酶的效率会高很多。问题26：核酸酶处理后核酸残留检测这块，核酸酶会影响其核酸残留测定吗？答：不会影响。问题27:请问如何把核酸与宿主蛋白包裹分开用核酸酶消化呢？答：可以尝试更改buffer条件：pH、表面活性剂等，或者增加低浓度变性剂。北京义翘神州科技股份有限公司(SinoBiologicalInc.)重点从事重组蛋白、抗体、基因、ELISA试剂盒、培养基等产品，以及重组蛋白、抗体的开发和生物分析检测等服务。同时，义翘神州也致力于提供真正“一站式”技术服务推进客户研发进程，如重组蛋白生产及纯化服务、抗体研发及生产技术服务、分子生物学技术服务、免