《核酸提取纯化方法评价通则GBT+37874-2019》详细解读

《核酸提取纯化方法评价通则GB/T37874-2019》详细解读contents目录1范围2规范性引用文件3术语和定义、缩略语4基本要求5指标参数6评价方法011范围监管机构为监管机构提供了监管依据，有助于保障市场上核酸提取纯化试剂盒的质量。核酸提取纯化试剂盒生产企业规范了核酸提取纯化试剂盒的生产质量要求，为生产企业提供了统一的标准。核酸提取纯化试剂盒使用者为使用者提供了评价核酸提取纯化试剂盒质量的方法，有助于选择高质量的试剂盒。适用对象覆盖内容术语和定义明确了核酸提取纯化试剂盒相关的术语和定义，避免了理解上的歧义。质量要求规定了核酸提取纯化试剂盒的质量要求，包括外观、纯度、浓度、准确性等指标。评价方法提供了评价核酸提取纯化试剂盒质量的具体方法，包括实验设计、操作步骤、结果分析等。标志、标签和说明书规范了核酸提取纯化试剂盒的标志、标签和说明书的内容和要求，确保使用者能够正确使用。022规范性引用文件分析实验室用水规格和试验方法，此标准规定了实验室用水的级别、技术要求和试验方法等，确保实验用水的质量，进而保证核酸提取纯化实验的准确性和可靠性。GB/T6682实验室质量控制规范食品微生物检测，此标准提供了实验室进行食品微生物检测时的质量控制要求，对于核酸提取纯化过程中可能涉及的微生物污染控制有重要指导意义。GB/T27405主要引用文件YY/T1182核酸提取试剂盒（磁珠法），此标准规定了使用磁珠法进行核酸提取的试剂盒的技术要求、试验方法等，与核酸提取纯化方法密切相关。GB19489实验室生物安全通用要求，此标准规定了实验室生物安全管理和技术要求，确保核酸提取纯化实验过程的安全性。相关引用文件033术语和定义、缩略语术语和定义核酸提取纯化试剂盒用于从生物样本中提取和纯化核酸的试剂盒，其包含了进行核酸提取和纯化所需的各种试剂及材料。质量评价样本处理对核酸提取纯化试剂盒的性能指标进行检测、验证和评估的过程，以确保其满足预期的使用要求和标准。在进行核酸提取前对生物样本进行的预处理操作，如破碎、裂解等，以便于后续的核酸提取和纯化。缩略语0102030405dNTP脱氧核苷三磷酸，是PCR反应中的重要原料之一。RNA核糖核酸，在生物体内发挥着重要的信息传递和调控功能。国家标准推荐性标准，表示该标准为推荐性国家标准。GB/TDNA脱氧核糖核酸，是生物体内遗传信息的载体。PCR聚合酶链式反应，是一种分子生物学技术，用于扩增特定的DNA片段。044基本要求4.1提取纯化方法的选择应根据具体实验需求和样本类型选择合适的核酸提取纯化方法，确保提取效率和纯度满足实验要求。提取纯化方法应具有可重复性和稳定性，以保证实验结果的可靠性。4.2提取纯化效果的评价应对提取纯化后的核酸进行质量检测，包括浓度、纯度等指标，以确保提取纯化效果符合要求。可采用定量PCR、电泳等方法对提取纯化效果进行验证和评价。““4.3安全性要求提取纯化过程中使用的试剂和耗材应符合相关安全标准，避免对实验人员和环境造成危害。实验操作应在符合生物安全要求的实验室进行，实验人员应做好个人防护。实验过程中应详细记录操作步骤、实验条件、试剂耗材使用情况等信息，以便于结果分析和问题追溯。实验结束后应撰写实验报告，对提取纯化方法和效果进行综合评价，并提出改进意见。4.4记录与报告055指标参数指从样本中提取出的核酸量与原始样本中核酸总量的比例。提取效率定义影响因素评价方法包括样本类型、裂解方式、洗涤条件等。通过对比不同试剂盒或方法在同一样本中的提取效率，选择最优方案。5.1提取效率指提取出的核酸中目标核酸与杂质（如蛋白质、盐类等）的比例。纯度定义可能来源于样本本身或提取过程中引入的污染物。杂质来源通过测定提取产物的吸光度比值（如A260/A280）或使用荧光染料等方法评估纯度。评价方法5.2纯度010203指提取出的核酸分子保持原始长度和序列的完整性。完整性定义可能由于样本保存不当、提取过程中机械剪切或酶解等因素导致。降解原因通过凝胶电泳观察核酸分子的长度分布或使用qPCR等方法检测特定序列的完整性。评价方法5.3完整性重复性定义包括样本处理、试剂批次、操作人员等。影响因素评价方法通过计算多次提取结果的变异系数（CV）或相对标准偏差（RSD）等统计指标评估重复性。指在同一实验条件下，使用相同试剂盒或方法对同一样本进行多次提取，结果之间的一致性。5.4重复性066评价方法提取效率指标通过对比不同试剂盒或方法提取的核酸量，以及提取后核酸的纯度，来评价提取效率。评价标准高效的核酸提取方法应能够最大限度地提取样本中的核酸，并保持核酸的完整性。6.1提取效率评价考察提取后核酸的纯度，如是否含有蛋白质、多糖等杂质。纯化效果指标优质的纯化方法应能有效去除杂质，获得高纯度的核酸。评价标准6.2纯化效果评价6.3重复性评价评价标准稳定的提取纯化方法应能在不同实验中保持一致的结果。重复性指标通过多次重复实验，考察提取和纯化结果