如何正确采集病原微生物标本专家讲座

临床微生物标本采集与运输

潘韶霞如何正确采集病原微生物标本第1页1.给临床感染诊疗提供试验室依据2.给临床抗感染治疗提供参考3.临床流行病学调查微生物检验一个主要功效就是进行细菌耐药监测，以指导临床合理使用抗生素，并制订合理经验用药方案。临床微生物检验主要功效如何正确采集病原微生物标本第2页但就当前现实状况，要实现上述功效存在很大问题1.分离病原菌耐药谱不能真正代表病原菌耐药谱，很多敏感病原菌没有做培养或没有取到感染部位标本；2.当前分离病原菌耐药率是远远高于真正耐药率，当前统计病原菌耐药率利用价值很低，所以在制订经验用药方案时缺乏合理依据。如何正确采集病原微生物标本第3页处理方案1.提升病原微生物送检率，强调在使用抗生素之前采集标本；2.提升送检标本质量；3.提升试验室检测能力。期待明年耐药数据能真正反应我院病原菌分布和耐药情况，能够用作经验选药依据。如何正确采集病原微生物标本第4页试验结果影响原因检验前原因检验中原因检验后原因如何正确采集病原微生物标本第5页常见微生物标本正确采集血液和骨髓采集;痰标本采集;咽拭子标本采集;尿液标本采集;脓、创伤感染标本采集;穿刺液标本采集;粪便标本采集;如何正确采集病原微生物标本第6页血液和骨髓采集采血时机？采血方法？正确采血量应该是多少?血培养阴/阳性有什么临床意义？如何正确采集病原微生物标本第7页什么情况需要做血培养有不明原因发烧、体温过低等症状；怀疑有菌血症或脓毒症如休克、寒颤等;严重局部感染；呼吸频率加紧等。如何正确采集病原微生物标本第8页采集血培养标本最正确时间？1.有发烧等症状时；2.在使用抗生素情况下；3.怀疑有亚急性心内膜炎时。如何正确采集病原微生物标本第9页病例:女性患者，怀疑为亚急性心内膜炎入院，入院后当日连续送三次血培养均为阴性，但临床上有显著脓毒血症症状。微生物室注意到三次血培养抽血时间为4pm,6pm和9pm，与主管医生沟通后，提议两小时内连续送三次血培养。结果第二批血培养中有二次为阳性，均培养出草绿色链球菌。

亚急性心内膜炎如何正确采集病原微生物标本第10页怀疑有亚急性心内膜炎或导管相关性菌血症时：1～2小时内采集三份血标本如何正确采集病原微生物标本第11页正确采血方法采血时皮肤消毒推荐采取三步消毒法：1.首先用70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30秒钟以上。2.然后用一根碘酊或碘伏棉签消毒皮肤（1%～2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒），从穿刺点向外以1.5cm～2cm直径画圈进行消毒。3.最终用70%酒精脱碘。注意对碘过敏患者，只能用70%酒精消毒，消毒60秒钟，待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。如何正确采集病原微生物标本第12页血养瓶消毒程序：1．用70%酒精或碘溶液(不要使用碘)消毒血培养瓶橡皮塞子。2．酒精作用约60秒。3．在血液注入血培养瓶之前,用无菌纱布去除橡皮塞子表面剩下酒精,然后注入血液。如何正确采集病原微生物标本第13页正确采血量应该是多少?如何正确采集病原微生物标本第14页血培养应采集多少次1.推荐24h内连续采集三次血培养标本；一次血培养约能够检出72％血流感染，二次约可检出约93％，三次约可检出约97％；2.假如培养48h以后为阴性，若临床怀疑为菌血症应在24h内再连续采集三次血培养标本；3.不主张天天采集血培养标本。如何正确采集病原微生物标本第15页血培养阳/阴性临床意义1.培养出革兰阴性菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌等时，多数能够确认为病原菌；2.培养出凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、芽胞杆菌等时，感染？污染？如何正确采集病原微生物标本第16页处理方案需屡次多部位/天采血。24小时内连续采集三次血培养标本。如何正确采集病原微生物标本第17页采集血培养标本方面存在问题1.采血量不太准确，很多培养采血量远远超量；2.采血时机不够准确，采血时机与体温改变关系不太熟悉；3.采集标本次数和频率不太准确，很多医生喜欢天天采集一次或仅采集一次；如何正确采集病原微生物标本第18页什么情况需要采集骨髓标本1.疑为细菌性或真菌性骨髓炎患者；2.疑为伤寒感染患者；如何正确采集病原微生物标本第19页痰标本采集

要求采集肺深部痰液，不要唾液。普通采取自然咳痰法，但以气管镜采集法标本质量最好。⑴自然咳痰法；⑵气管镜采集法；⑶小儿取痰法；⑷导管尖送检；

如何正确采集病原微生物标本第20页下呼吸道标本全部病人下呼吸道标本应在采集后马上送至微生物室，并于1小时内接种室温下放置>1h会降低肺炎链球菌、流感嗜血杆菌分离率而定植于上呼吸道非致病菌则会过分生长下呼吸道标本勿放冰箱或运输时勿置于冰块中如何正确采集病原微生物标本第21页痰涂片检验是否标本合格痰肉眼观察:统计标本外观

唾液、带血、粘液样、水样、脓性、粘液脓性、脓性粘液样显微镜检验：取脓性部分涂在玻片上作革兰染色.低倍视野下看涂片，统计5个视野下平均细胞数。如何正确采集病原微生物标本第22页痰涂片判定分类WBC鳞状上皮细胞

6<25 <255>25 <104 >2510-253>25 >25210-25 >251 <10>25分类中1～3类不做培养，要求重新留取标本；

4、5类为合格标本；6类为气管穿刺液时，如未见白细胞，而鳞状上皮细胞>10/低倍，亦应重新留取标本。如何正确采集病原微生物标本第23页痰标本采集存在问题1.痰标本合格程度偏低，普通痰标本合格率不到40%；2.标本转运时间过长，很多标本送到试验室已经超出2小时。如何正确采集病原微生物标本第24页

咽拭子标本采集

标本采集应在用药前，最好在清晨，嘱患者用清水漱口，由检验者将舌向外拉，使悬雍垂向外牵引，将咽拭子超出舌根抵达咽后壁或悬雍垂后侧，在咽部肉眼见显著发红或有假膜处局部重复涂抹棉拭(注意不要碰着口腔粘膜)，放入无菌试管内马上送检。如何正确采集病原微生物标本第25页如何正确采集病原微生物标本第26页尿液标本采集

中段尿采集法导尿法膀胱穿刺取尿法留尿法如何正确采集病原微生物标本第27页如何正确采集病原微生物标本第28页尿液标本采集存在问题1.随机尿代替中段尿送检，尤其是门诊病人；2.部份标本存在污染情况；3.部份插管患者采集了尿袋中尿液；4.标本中转运时间过长。如何正确采集病原微生物标本第29页脓、创伤感染标本采集

首先用无菌生理盐水拭净病灶表面污染杂菌。对已破溃脓肿用无菌棉拭子取深部脓液和分泌物；未破溃脓肿消毒皮肤后，用无菌注射器抽取脓液及分泌物马上送检。如深部脓肿在送需氧培养同时应考虑送厌氧培养，厌氧培养标本应隔绝空气马上送检。当创伤出血时，敷用药品2h以内及烧伤在12h内不应采集标本，此时取得阳性结果机会极少。如何正确采集病原微生物标本第30页穿刺液标本采集应在患者用药之前或停药1-2d后进行穿刺，标本应马上送检或保留于4℃冰箱。脑脊液标本应保温（25-37℃），抽2ml直接注入小儿瓶中,同时再另抽1-2ml于无菌容器同时送检并马上送检。如何正确采集病原微生物标本第31页粪便标本采集

自然排便采集法直肠拭子采集法

有腹泻病人，在送培养标本同时能够送细菌涂片检验。抗生素相关性腹泻性腹泻，培养是阴性，但涂片检验却能够看到细菌百分比失调，涂片临床意义大于培养。如何正确采集病原微生物标本第32页生殖道标本采集（一）送检指征

1.男性泌尿系统表现尿急、尿频、尿痛尿道分泌物增多会阴部疼痛及阴囊疼痛性功效障碍泌尿生殖器畸形和缺损如何正确采集病原微生物标本第33页女性泌尿系统表现分泌物增多及性状异常尿道口搔痒及脓性分泌物流畅下腹疼痛月经失调阴道出血外阴搔痒外阴或阴道疼痛性功效障碍如何正确采集病原微生物标本第34页（二）标本采集生殖器官标本包含子宫颈、阴道、前列腺；男性及女性外生殖器分泌物及经血等。应依据感染部位和可能病原体决定用于病原学诊疗标本种类、采集部位和采集方法等。阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由医师采集，搜集于无菌试管内送检。如何正确采集病原微生物标本第35页尿道分泌物1.女性尿道：患者排尿1小时后采集，首先拭去尿道口渗出物；再用拭子经过阴道，靠着耻骨联合，按摩尿道，采集分泌物；如未取得分泌物，清洗外尿道，用灭菌纱布或棉球擦拭，用泌尿生殖道拭子插入尿道2－4cm，旋转拭子2秒。2.男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔2－4cm，旋转拭子，最少停留20秒，而使之轻易吸收。如何正确采集病原微生物标本第36页阴道分泌物擦除过多分泌物和排出液，用无菌棉拭子采取阴道口内4厘米内侧壁或后穹窿处罚泌物，假如需要涂片，需再用一个拭子。男性前列腺

用前列腺按摩法采集前列腺液。清洗尿道口，冲洗尿道膀胱，从肛门用手指按摩前列腺，使前列腺液溢出，用无菌容器搜集。无肉眼可见脓液时，可用灭菌拭子轻轻伸入前尿道内，旋转拭子采集标本。如何正确采集病原微生物标本第37页注意事项1.生殖器是开放性器官，标本采集过程中应严格遵循无菌操作规程以降低杂菌污染。

2.因为阴道正常菌群存在而使细菌分离判定受到干扰，所以在采集女性生殖道标本时应注意尽量降低或防止正常菌群污染。

3.疑有宫腔感染，如遇产妇需行剖宫产，待胎儿娩出后取宫腔分泌物，并同时取婴儿耳拭子一同送检。

4.沙眼衣原体和病毒均在宿主细胞内繁殖，取材时拭子应在病变部位（移行上皮处稍内）停留十几秒钟，并采集尽可能多上皮细胞。如何正确采集病原微生物标本第38页5.生殖道感染厌氧菌也较多见，疑有厌氧菌感染时，标本采集和运输应防止与氧气接触，最正确方法是床边采样，直接接种至厌氧装置内。

6.淋病奈瑟菌检验时，取材深度一定要够，因为淋球菌好发于柱状上皮细胞而不是复层鳞状上皮细胞。不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈3cm深转动并停留10-30s取样送检。

7.淋病奈瑟菌抵抗力低，对外环境改变颇为敏感，对严寒和干燥抵抗力很弱。所以，为了确保培养有足够成功率，取材后要尽快送检，马上接种，标本离体时间越短越好。如何正确采集病原微生物标本第39页微生物培养还应注意问题1.培养阳性分离菌不一定是真病原菌，尤其从有菌部位来，如痰标本；2.无菌部位培养出来病原菌应该连续监测，若病原菌发生改变或治疗效果不佳时应考虑更换抗生素；3.细菌耐药性在治疗过程中能够会发生改变，要注意观察是否有耐药性变迁。如何