烟草及烟草制品主要大分子物质的测定第 1 部分 纤维素、半纤维素

1烟草及烟草制品主要大分子物质的测定第1部分纤维素、半纤维素本文件规定了烟草及烟草制品中纤维素、半纤维素含量的离子色谱测定方法。本文件适用于烟草及烟草制品中纤维素、半纤维素含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法YC/T31烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样依次采用80%乙醇-饱和氯化钠溶液去除糖、90%二甲亚砜-水溶液去除淀粉等干扰后，加入72%硫酸溶液解聚，加水稀释后，高温酸解，抽滤分离，得酸解滤液。采用离子色谱法测定酸解滤液中的单糖，以葡萄糖浓度计算纤维素含量，以阿拉伯糖、半乳糖、木糖和甘露糖的浓度计算半纤维素含量。5试剂除非另有说明，在分析中使用分析纯及以上的试剂。5.1水应为蒸馏水或至少应达到GB/T6682三级水的水平。5.2L‒(+)‒阿拉伯糖、D-半乳糖、D-(+)-木糖、D-甘露糖、葡萄糖，纯度均≥99%。5.3无水乙醇。5.4二甲基亚砜。5.5浓硫酸，98%（质量分数）。5.6氢氧化钠溶液，50%（质量分数）。5.7醋酸钠，纯度≥99%。5.8氯化钠。5.980%乙醇-饱和氯化钠溶液混匀，加盖静置，待溶液澄清后过滤。5.1090%二甲基亚砜-水溶液移取900mL二甲基亚砜（5.2）于1000mL容量瓶，用水定容。25.1172%硫酸溶液：移取174mL水于1000mL烧杯中，缓慢加入326mL98%浓硫酸（5.5搅拌，冷却。5.12硫酸稀释液：移取80μL72%硫酸（5.11）溶液于1000mL容量瓶，用水定容。5.13200mmol/L氢氧化钠溶液：移取10.4mL氢氧化钠溶液（5.6）于1000mL容量瓶，用水定容。5.1410mmol/L氢氧化钠溶液：移取50mL氢氧化钠溶液（5.13）于1000mL容量瓶，用水定容。5.15100mmol/L氢氧化溶液-1.0mol/L醋酸钠溶液：称取20.5g醋酸钠（5.7）于100mL烧杯中，用适量水超声溶解，加入1.3mL氢氧化钠溶液（5.6），转移至250mL容量瓶，用水定容。5.16系列标准工作溶液：准确称取8mg阿拉伯糖、12mg半乳糖、70mg葡萄糖、7mg木糖、10mg甘露糖（5.2）于50mL烧杯中，精确至0.1mg，用硫酸稀释液（5.12）溶解，并定容于250mL容定容，配制成糖标系列标准工作溶液，即配即用。6仪器及材料6.1离心管，50mL。6.2具塞锥形瓶，150mL。6.3容量瓶，100mL、250mL、500mL、1000mL。6.4定量加液器或移液管。6.5玻璃棒。6.6耐压玻璃管，110mL，耐压强度不小于0.6MPa。6.7抽滤装置。6.8布氏漏斗。6.9滤布，尼龙网，500目。6.10G4玻璃坩埚，30mL。6.11分析天平，感量0.1mg。6.12超声波发生器，可加热控温，频率37KHz。6.13离心机，适用50mL离心管，转速不低于4000r/min。6.14恒温水浴锅。6.15防爆烘箱。6.16离子色谱仪，配电化学检测器，工作电极为Au电极，参比电极为AgCl/Ag。6.17色谱柱：糖分析柱2.0mm×250mm，柱填料为疏水性高聚物薄壳型阴离子交换剂或其他等效柱，保护柱2mm×50mm。7分析步骤7.1试样制备按YC/T31的方法制备试样，并测定其水分含量。7.2试样处理7.2.1醇洗准确称取试样0.5g于50mL离心管中，加入40mL80%乙醇-饱和氯化钠水溶液（5.9），超声30min后4000r/min离心5min，弃上清液，得醇洗试样。37.2.2二甲基亚砜洗将经醇洗后的试样用70mL90%二甲亚砜-水溶液（5.10）冲洗至150mL锥形瓶，60℃超声3h后，采用布氏漏斗和滤布抽滤，滤渣依次用水、无水乙醇各洗涤三次（每次约10mL），滤渣晾干后转移至110mL耐压玻璃管。7.2.3两步酸解7.2.3.1在装有滤渣的耐压玻璃管中加入2.0mL72%硫酸溶液（5.11用玻璃棒搅匀，置于30℃恒温水浴锅酸解2h。7.2.3.2水浴酸解后，在耐压玻璃管中缓慢加入56mL水，旋紧盖子，置于120℃烘箱中酸解2h，取出冷却。7.2.4抽滤定容酸解液经G4玻璃砂芯坩埚抽滤，用90℃~100℃热水清洗耐压玻璃管和滤渣至少3次，所得滤液转移至250mL容量瓶，冷却至室温后用水定容。准确移取1.0mL于100mL容量瓶，用水定容，待测。7.3仪器条件以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性。——流动相A：水；——流动相B：200mmol/L氢氧化钠溶液（5.13）；——流动相C：100mmol/L氢氧化溶液-1.0mol/L醋酸钠溶液（5.15——流动相D：10mmol/L氢氧化钠溶液（5.14）；——流速：0.25mL/min；——进样量：25μL；——温度：20℃;电化学检测器扫描电位采用脉冲点位波形如表1所示。表1检测波形——————流动相梯度洗脱程序如表2所示。表2梯度洗脱程序A（%）B（%）C（%）D（%）4000000010007.4标准工作曲线制作对系列标准工作溶液（5.16）进行离子色谱测定，使用保留时间定性，外标法定量。根据所配标准溶液的浓度及其响应峰面积，建立各单糖的标准工作曲线，相关系数不低于0.99。7.5试样测试按照离子色谱分析条件测定试样溶液（7.2.4），每个试样平行测试两次。待测试样应在72h内完成分析。若试样浓度超出标准工作溶液浓度范围，则应稀释后再重新测定。标准工作溶液和试样溶液色谱图参见附录A。8结果计算与表述8.1结果计算试样中以干基计纤维素Wce按式（1）计算，半纤维素Whe含量按式（2）计算，数值都以质量百分数表示。WW式中：Cglu——葡萄糖检测质量浓度，单位为微克每毫升(µg/mL）；Cgal——半乳糖检测质量浓度，单位为微克每毫升(µg/mL）；Cman——甘露糖检测质量浓度，单位为微克每毫升(µg/mLCxyl——木糖检测质量浓度，单位为微克每毫升(µg/mL）；Cara——阿拉伯糖检测质量浓度，单位为微克每毫升(µg/mL）；0.9——葡聚糖、半乳聚糖和甘露聚糖脱水校正因子；0.88——木聚糖和阿拉伯聚糖脱水校正因子；V——定容体积，单位为毫升（mLF——定容后溶液稀释倍数；m0——称取试样质量，单位为克（g）；w——水分含量，单位为质量分数（%）；Wce——纤维素含量，单位为质量分数（%）；Whe——半纤维素含量，单位为质量分数（%）。58.2结果表述以两次平行测定结果平均值作为测定结果，结果精确至0.01%。两次平行测定结果相对平均偏差不大于10%。9检出限、定量限、精密度和回收率本方法的检出限、定量限、精密度和加标回收率结果分别见表3、表4和表5。表3方法的检出限、定量限表4纤维素、半纤维素的检出限、定量限、精密度%%%表5方法的回收率%%10试验报告试验报告应包括下列内容：——试验对象；——识别被测试样需